質(zhì)粒
- 大腸桿菌必需基因的CRISPR-Cas9敲除策略及高效質(zhì)粒置換方法
[5]報(bào)道了一種質(zhì)粒改組的酵母必需基因編輯方法。將待編輯的必需基因yfeg克隆至回補(bǔ)質(zhì)粒并使用URA3作為選擇標(biāo)記。在含有5-氟乳清酸的平板培養(yǎng)時(shí),可篩選出無(wú)回補(bǔ)質(zhì)粒的基因編輯菌株。該方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)必需基因的功能表征,但是選擇標(biāo)記篩選方法也可能使細(xì)胞發(fā)生突變進(jìn)行逃逸。CRISPR/Cas9作為第三代基因編輯技術(shù),自問(wèn)世以來(lái)就廣泛用于細(xì)胞基因組的編輯[6-7]。Cas9可在向?qū)NA(sgRNA)的靶向作用下被引導(dǎo)至目標(biāo)基因靶點(diǎn)位置進(jìn)行切割產(chǎn)生雙鏈斷裂,誘導(dǎo)
食品與發(fā)酵工業(yè) 2023年18期2023-10-09
- 新疆牛羊源金黃色葡萄球菌D353質(zhì)粒pD353序列分析
言【研究意義】質(zhì)粒是染色體外的遺傳物質(zhì),攜帶遺傳信息,并能夠通過(guò)接合的方式有效進(jìn)行遺傳信息的水平轉(zhuǎn)移,進(jìn)而增強(qiáng)細(xì)菌對(duì)不同環(huán)境的適應(yīng)能力[1]。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureus,MRSA)及耐萬(wàn)古霉素金黃色葡萄球菌(Vancomycin resistantStaphylococcusaureus,VRSA)的出現(xiàn)是有危害的。在當(dāng)前具有感染性的金黃色葡萄球菌菌株中,抗生素的耐藥性通常
新疆農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年7期2023-07-28
- 質(zhì)粒DNA實(shí)驗(yàn)室規(guī)?；苽涔に?/a>
239000細(xì)菌質(zhì)粒DNA（plasmid DNA，pDNA）通常是小的（平均80 kb）環(huán)狀染色體外DNA元件，以游離形式持續(xù)穩(wěn)定地存在于染色體外，能夠通過(guò)招募宿主細(xì)胞機(jī)制進(jìn)行半自主復(fù)制，可攜帶有助于宿主適應(yīng)新環(huán)境的基因或編碼特異性功能的基因。質(zhì)粒作為載體應(yīng)用于基因治療領(lǐng)域具有兩大優(yōu)勢(shì)：（1）基因轉(zhuǎn)移過(guò)程中，質(zhì)粒載體具有低毒性、低免疫原性，可耐受核酸酶且轉(zhuǎn)移效率與遺傳物質(zhì)大小無(wú)關(guān)［1］；（2）在基因編輯時(shí)，質(zhì)粒可作為編輯工具CRISPR/Cas9系統(tǒng)表達(dá)
山東第一醫(yī)科大學(xué)(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)學(xué)報(bào) 2023年3期2023-05-05
- 基因工程中載體概述
，克隆載體可分為質(zhì)粒載體、噬菌體載體、病毒載體和人工染色體載體等。1 質(zhì)粒載體質(zhì)粒（Plasmid）是人們廣泛應(yīng)用的克隆載體。它是細(xì)菌和真菌等細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立存在的一種環(huán)狀DNA分子。幾乎所有的質(zhì)粒都帶有一個(gè)或多個(gè)基因。質(zhì)粒不影響宿主細(xì)胞的生存，但其帶有特殊功能的基因可以賦予宿主細(xì)胞某些抵御外界不利環(huán)境因素的特性。1.1 質(zhì)粒的生物學(xué)特性1.1.1 質(zhì)粒的復(fù)制幾乎所有的質(zhì)粒都含有復(fù)制起點(diǎn)。質(zhì)粒侵染宿主細(xì)胞后，不同質(zhì)粒復(fù)制的方式不同。根據(jù)是否攜帶一套促進(jìn)DNA轉(zhuǎn)移
中學(xué)生物學(xué) 2022年8期2022-10-13
- 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中的“Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化載體系統(tǒng)”的簡(jiǎn)介
——一道江蘇高考題的奧秘解讀和拓展
用轉(zhuǎn)移法，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，再與Ti質(zhì)粒重組為共整合載體，然后轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞。共整合載體是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化載體系統(tǒng)中的一種。這與高中教材介紹的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法不一樣，人教版高中教材介紹的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因插入到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T－DNA中構(gòu)成重組質(zhì)粒，再將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，將目的基因插入到植物細(xì)胞染色體DNA中，其過(guò)程如圖2所示。圖2 人教版教材中所示的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法高中教材介紹的僅是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的思路，并不是具體操作步
中學(xué)生物學(xué) 2022年7期2022-09-07
- 全基因組測(cè)序后質(zhì)粒的組裝與鑒定研究進(jìn)展*
的方法無(wú)法獲得的質(zhì)粒可由WGS數(shù)據(jù)進(jìn)行組裝，但組裝質(zhì)粒的正確性和完整性需要進(jìn)一步鑒定和分析。從WGS中準(zhǔn)確識(shí)別染色體序列和質(zhì)粒序列是質(zhì)粒鑒定分析的先決條件[6]。WGS可獲得高質(zhì)量的質(zhì)粒序列，但很多組裝質(zhì)粒并不一定真實(shí)存在，質(zhì)粒的組裝仍存在較多問(wèn)題，且尚未被解決，需改良WGS后的組裝。本文對(duì)WGS技術(shù)的發(fā)展、WGS后質(zhì)粒的組裝、質(zhì)粒的鑒定及質(zhì)粒組裝中存在的問(wèn)題進(jìn)行綜述。1 WGS的發(fā)展第一代測(cè)序技術(shù)以Sanger等[1]提出的鏈終止法及Maxam等[7]提
成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) 2022年4期2022-08-19
- 質(zhì)粒介導(dǎo)的印第安納沙門氏菌耐藥機(jī)制及分子溯源研究
也可以存在于細(xì)菌質(zhì)粒上。質(zhì)粒是在多數(shù)G-細(xì)菌中廣泛存在的一種染色體外的遺傳因子，質(zhì)粒特性使細(xì)菌更易獲得抗生素耐藥性、增強(qiáng)細(xì)菌的致病性、代謝能力等多種特性[4]，并具增強(qiáng)細(xì)菌耐藥基因傳播能力。耐藥I類整合子、轉(zhuǎn)座子Tn3、TnsA、插入序列IS26、IS91作為細(xì)菌中存在的重要可移動(dòng)元件，可對(duì)外源基因進(jìn)行捕獲和表達(dá)(尤其是存在于質(zhì)粒上的整合子及移動(dòng)元件)[5-6]。盛煥精等[7]通過(guò)質(zhì)粒接合的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明菌株攜帶的質(zhì)粒類型和相應(yīng)的耐藥表型存在關(guān)聯(lián)，并且耐藥基因可
中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào) 2022年7期2022-08-11
- 糞腸球菌內(nèi)源性質(zhì)粒的序列分析及其穿梭載體的構(gòu)建
點(diǎn)[7?11]。質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞中染色體之外，能夠自主復(fù)制的共價(jià)閉合環(huán)狀雙螺旋的DNA分子或遺傳因子。已有研究表明，乳酸菌可攜帶數(shù)個(gè)質(zhì)粒，大小不一，其中多數(shù)質(zhì)粒為隱蔽性質(zhì)粒，少數(shù)質(zhì)粒則具有某些特殊功能[12]。乳酸菌的一些特性與其所攜帶的質(zhì)粒相關(guān)，并且這些特性可以通過(guò)質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)移至其他乳酸菌或其他細(xì)菌中[13]。目前已有許多研究對(duì)乳酸菌內(nèi)源性質(zhì)粒進(jìn)行序列測(cè)定和功能分析，并利用乳酸菌內(nèi)源性質(zhì)粒上重要元件構(gòu)建乳酸菌載體，其中獲得乳酸菌內(nèi)源性質(zhì)粒的復(fù)制子是構(gòu)建乳酸
食品工業(yè)科技 2021年23期2021-12-16
- 一種優(yōu)化的提高質(zhì)粒產(chǎn)量的提取方法
130021)質(zhì)粒(plasmid)是廣泛存在于生物界的環(huán)狀雙鏈DNA分子[1]。質(zhì)粒DNA作為最基本的基因載體工具，在分子生物學(xué)、生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)等學(xué)科中得到廣泛的應(yīng)用[2]。質(zhì)粒載體含有3個(gè)共同的結(jié)構(gòu)：復(fù)制子，選擇性標(biāo)志和克隆位點(diǎn)，它們?cè)?span id="syggg00" class="hl">質(zhì)粒的表達(dá)與復(fù)制中發(fā)揮重要作用[3]。人們通過(guò)在質(zhì)粒中插入目的基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒，使目的基因在動(dòng)物模型中表達(dá)，可以研究動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育、疾病發(fā)生等情況，如P53基因在犬乳腺惡性腫瘤中高表達(dá)[4]，VIPR-1基因在
畜牧與獸醫(yī) 2021年11期2021-11-11
- 轉(zhuǎn)錄因子E2F1 及其突變體真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的建立
建了真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒pFlag-E2F1 及其DNA 結(jié)合功能域突變體質(zhì)粒pFlag-E2F1E132，并進(jìn)一步獲得了與之對(duì)應(yīng)的穩(wěn)篩細(xì)胞株。這些細(xì)胞株對(duì)E2F1 的關(guān)鍵下游靶基因的篩選具有重要意義。1 材料與方法1.1 材料HeLa 細(xì)胞和pFlag 真核細(xì)胞表達(dá)載體由天津師范大學(xué)分子細(xì)胞系統(tǒng)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供；pCMV-E2F1 表達(dá)質(zhì)粒由中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所生物多樣性與水生生物保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室饋贈(zèng)。1.2 試劑與儀器胎牛血清、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基，B
生物化工 2021年3期2021-07-10
- 生殖道衣原體質(zhì)粒功能的研究進(jìn)展
要的毒力物質(zhì)——質(zhì)粒[5]。質(zhì)粒除了與衣原體的毒力和致病性有關(guān)外，還對(duì)衣原體自身生長(zhǎng)代謝、誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答作用均具有影響。本文對(duì)生殖道衣原體質(zhì)粒的主要功能及其潛在應(yīng)用價(jià)值作一概述。1 衣原體質(zhì)粒的基本特征質(zhì)粒是細(xì)菌中除染色體DNA外能自主復(fù)制的DNA分子。衣原體的質(zhì)粒為環(huán)狀雙鏈DNA，大小約為7.5 kb，存在于染色體外，質(zhì)粒在衣原體RB二分裂階段能達(dá)到最多拷貝數(shù)，以便將質(zhì)粒有效分配于子代衣原體中[6]。生殖道衣原體為非接合性質(zhì)粒，不編碼衣原體抗生素耐藥性
中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志 2021年3期2021-06-02
- 單增李斯特菌質(zhì)粒研究進(jìn)展
力，單增李斯特菌質(zhì)粒與其抗逆性有關(guān)。質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外具有遺傳功能的DNA，非細(xì)菌生長(zhǎng)代謝的必需元件，在輔助宿主菌的生存和適應(yīng)中發(fā)揮重要作用。質(zhì)粒可介導(dǎo)細(xì)菌間遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)移，使受體菌獲得供體菌的選擇性優(yōu)勢(shì)，如抗逆性、毒力、耐藥等。上世紀(jì)80年代，Perez-Diaz等[3]首次報(bào)道了單增李斯特菌質(zhì)粒，后來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒在單增李斯特菌中分布廣泛，并發(fā)揮一定的生物學(xué)功能。本文將對(duì)單增李斯特菌質(zhì)粒的分類、分布以及生物學(xué)特性等研究進(jìn)展進(jìn)行概述。1 單增李斯特菌質(zhì)粒
中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào) 2021年4期2021-05-06
- mcr-1陽(yáng)性類噬菌體質(zhì)粒與F33∶A-∶B-質(zhì)粒共整合形成的融合質(zhì)粒的生物學(xué)特性分析
3∶A-∶B-型質(zhì)粒是多重耐藥質(zhì)粒IncF型質(zhì)粒中最為流行的亞型之一,它廣泛存在于腸桿菌科細(xì)菌,尤其是大腸桿菌中,是介導(dǎo)fosA3、blaCTX-Ms和rmtB等耐藥基因快速傳播的主要載體[1-3]。F33∶A-∶B-型質(zhì)粒除了能夠借助IS26和IS1294元件捕獲和傳播抗性基因外,還能夠獲得IncN1、IncI1、IncR和IncX1型質(zhì)粒的一些片段成為多復(fù)制子質(zhì)粒[3]。本課題組在研究豬源大腸桿菌中mcr-1的水平轉(zhuǎn)移能力時(shí),首次發(fā)現(xiàn)在接合過(guò)程中,F3
江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2021年4期2021-04-20
- 多變魚(yú)腥藻ATCC 29413基因的一步插入失活
轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中的輔助質(zhì)粒pRL623上缺少甲基化酶M.AvrⅡ基因,可能與難以構(gòu)建多變魚(yú)腥藻突變株有關(guān)[12,13]。為了克服藻株的限制酶對(duì)外源DNA的破壞,本研究克隆了該藻株自身的兩個(gè)甲基化酶基因,構(gòu)建了新的輔助質(zhì)粒。利用該質(zhì)粒對(duì)多變魚(yú)腥藻ATCC 29413兩個(gè)基因進(jìn)行了插入失活,均實(shí)現(xiàn)了一步獲得同源雙交換子,比通常在絲狀藍(lán)藻敲除基因節(jié)省一半時(shí)間。1 材料與方法1.1 藻種、菌種及培養(yǎng)方法多變魚(yú)腥藻ATCC 29413高溫衍生株由美國(guó)南達(dá)科塔州州立大學(xué)周阮
水生生物學(xué)報(bào) 2021年1期2021-02-04
- 103個(gè)mcr質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)與特征
檢測(cè)到一種新的由質(zhì)粒介導(dǎo)的黏菌素耐藥基因mcr-1[8]。攜帶mcr-1基因的質(zhì)粒具有接合轉(zhuǎn)移能力，有助于黏菌素耐藥性穩(wěn)定持久的傳播。隨后，許多國(guó)家陸續(xù)報(bào)道了攜帶mcr-1基因質(zhì)粒的革蘭氏陰性菌，這些菌對(duì)公眾健康造成了重大威脅[10-16]。目前質(zhì)粒的報(bào)道主要集中在質(zhì)粒草圖水平上，側(cè)重于mcr基因的基因環(huán)境分析，質(zhì)粒的完成圖報(bào)道占比相對(duì)較少[17]。近年來(lái)，黏菌素在畜禽養(yǎng)殖中作為促生長(zhǎng)藥物被禁用[18]，動(dòng)物源細(xì)菌對(duì)黏菌素的耐藥率隨之持續(xù)下降，但是耐藥率仍
浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2021年1期2021-01-28
- IncI1和IncN質(zhì)粒陽(yáng)性沙門氏菌耐藥及質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移特征
危害[6-7]。質(zhì)粒是獨(dú)立于染色體外、可自主復(fù)制、通常攜帶多種抗性和毒力基因的閉合環(huán)狀雙鏈DNA，質(zhì)粒的存在可使宿主菌產(chǎn)生耐藥性和致病性等附加特性[8]。其中，接合質(zhì)粒是一種與耐藥基因水平傳遞和細(xì)菌耐藥性獲得的重要可移動(dòng)元件[9]。在眾多質(zhì)粒中，IncI1型質(zhì)粒有助于blaCTX-M-1基因在禽類和人之間散播[10]，IncN型質(zhì)粒已被歐洲多個(gè)國(guó)家的研究者報(bào)道攜帶blaCTX-M-1基因[11-12]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)IncI1質(zhì)粒有時(shí)還可與IncN質(zhì)粒共
食品科學(xué) 2020年18期2020-09-17
- 優(yōu)化大腸桿菌CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)及應(yīng)用
不同之處前者是單質(zhì)粒編輯系統(tǒng)，后者是雙質(zhì)粒編輯系統(tǒng)。單質(zhì)粒編輯系統(tǒng)[10]將Cas9，gRNA和供體DNA構(gòu)建在同一個(gè)表達(dá)載體上，在遺傳操作過(guò)程中，只需一輪質(zhì)粒轉(zhuǎn)化就能實(shí)現(xiàn)對(duì)基因組的編輯。但單質(zhì)粒由于本身骨架片段較大，可插入的供體DNA大小受限，質(zhì)粒構(gòu)建會(huì)有一定的難度。雙質(zhì)粒編輯系統(tǒng)可以解決單質(zhì)粒構(gòu)建困難的問(wèn)題，將Cas9，Red構(gòu)建在一個(gè)質(zhì)粒上，將目標(biāo)N20-gRNA, 供體DNA片段構(gòu)建在另一個(gè)質(zhì)粒上，利用這個(gè)雙質(zhì)粒CRISPR/Cas9系統(tǒng)，大腸桿菌
生物學(xué)雜志 2020年4期2020-08-19
- 開(kāi)發(fā)新方法追蹤植物病害的全球傳播（2020.6.7 iPlants）
質(zhì)粒是可自主復(fù)制的非必需DNA分子，可加速許多重要的細(xì)菌的進(jìn)化。例如，質(zhì)粒傳播抗生素抗性基因，這是人類和動(dòng)物健康的緊迫問(wèn)題。農(nóng)桿菌獲得致瘤的Ti質(zhì)粒或根誘導(dǎo)（Ri）質(zhì)粒后，將其轉(zhuǎn)變?yōu)槟軌蜻z傳轉(zhuǎn)化并引起多種植物疾病的病原體。因此，對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行進(jìn)化關(guān)系分類，準(zhǔn)確評(píng)估質(zhì)粒對(duì)疾病暴發(fā)的影響，制定緩解疾病的策略以及加快利用質(zhì)粒多樣性進(jìn)行生物技術(shù)研究的基礎(chǔ)。但是，之前認(rèn)為質(zhì)粒過(guò)于多樣化且能平行轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致無(wú)法分類。2020年6月6日，Science雜志在線發(fā)表了美國(guó)俄勒岡
三農(nóng)資訊半月報(bào) 2020年11期2020-06-21
- 嗜水氣單胞菌穿梭質(zhì)粒載體p BKPU01的構(gòu)建、表達(dá)和鑒定
要原因是含有多種質(zhì)粒［4］。本實(shí)驗(yàn)室從嗜水氣單胞菌中分離得到一種質(zhì)粒，命名為質(zhì)粒pBK760，該質(zhì)粒具有多種位點(diǎn)和抗性，具有良好的載體特征。pMD20是一種高效克隆PCR產(chǎn)物的專用載體［5］。該載體以pUC19載體為基礎(chǔ)，在其多克隆位點(diǎn)處的Xba I和BamH I位點(diǎn)之間增加了Spe I，Nde I，EcoRV3種酶切位點(diǎn)，經(jīng)EcoR V酶切后再在兩側(cè)的3’端添加“T”制備而成［6］。因大部分耐熱性DNA聚合酶進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)都有在PCR產(chǎn)物的3’端添加一
江蘇科技信息 2020年1期2020-03-18
- 植物乳桿菌內(nèi)源性質(zhì)粒序列分析及其表達(dá)載體的構(gòu)建
酸桿菌攜帶有數(shù)個(gè)質(zhì)粒，大小不一，其中多數(shù)質(zhì)粒為隱蔽性質(zhì)粒，少數(shù)質(zhì)粒具有某些特殊功能[7]。目前，已有許多乳桿菌質(zhì)粒被測(cè)序，并用于構(gòu)建質(zhì)粒載體，如副干酪乳桿菌的質(zhì)粒pCD01和pCD02[8]、干酪乳桿菌的質(zhì)粒pLC494[9]和pMC11[10]、植物乳桿菌質(zhì)粒pD403[11]和pM4[12]等。乳酸桿菌質(zhì)粒復(fù)制方式為滾環(huán)復(fù)制和θ復(fù)制，通常較小的質(zhì)粒（＜12 kb）通過(guò)滾環(huán)方式進(jìn)行復(fù)制[13]。通過(guò)對(duì)乳酸菌質(zhì)粒的測(cè)序、分析，得到乳酸菌質(zhì)粒的復(fù)制子是構(gòu)建質(zhì)
食品科學(xué) 2020年4期2020-03-11
- 以質(zhì)粒為基礎(chǔ)的同源重組技術(shù)在葡萄球菌基因敲除中的應(yīng)用
]，即選擇合適的質(zhì)粒，將靶基因兩側(cè)的同源序列克隆至載體上，轉(zhuǎn)入宿主菌后通過(guò)同源重組實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因的置換敲除。由于微生物的多樣性，將外源DNA導(dǎo)入宿主菌并完成同源重組的策略也千差萬(wàn)別。目前，未見(jiàn)有適合于多種宿主菌基因敲除的通用重組系統(tǒng)的報(bào)道。因此，需要根據(jù)宿主菌的特點(diǎn)來(lái)構(gòu)建相對(duì)特異的基因敲除系統(tǒng)，用于基因功能研究。葡萄球菌屬(Staphylococcusspp.)是引起醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌[3-5]，由于其GC含量較低(mol%約28%～35%)，通過(guò)同源重
中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào) 2019年7期2019-08-07
- 微滴數(shù)字PCR檢測(cè)含有目的基因的PUC57質(zhì)粒問(wèn)題分析
7]。PUC57質(zhì)粒是大腸桿菌載體含有2 710 bp。本實(shí)驗(yàn)利用ddPCR檢測(cè)含有目的基因的PUC57質(zhì)粒，對(duì)檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的酶切、酶切孵育時(shí)間和酶切后放置天數(shù)的問(wèn)題進(jìn)行了探討，為同行提供參考。1 材料與方法1.1材料 根據(jù)GenBank中乙肝病毒DNA(HBV DNA)的序列，經(jīng)過(guò)序列比對(duì)分析，針對(duì)HBV DNA保守區(qū)設(shè)計(jì)引物和探針，用引物擴(kuò)增的那段目的基因片段(95 bp)構(gòu)建PUC57質(zhì)粒，質(zhì)粒的構(gòu)建由上海生工生物工程有限公司完成。質(zhì)粒含有2 80
國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志 2019年6期2019-03-26
- 中草藥對(duì)細(xì)菌耐藥質(zhì)粒的消除作用研究
藥性能夠通過(guò)耐藥質(zhì)粒介導(dǎo)，由一種微生物轉(zhuǎn)移到另一種微生物［2-3］；此外，耐藥質(zhì)粒攜帶的多種耐藥標(biāo)記，也可經(jīng)由菌株間的接合而相互傳遞［4］，從而引起細(xì)菌對(duì)新的抗生素藥物產(chǎn)生耐藥性，最終導(dǎo)致菌株的多重耐藥性和多重耐藥菌株的出現(xiàn)［5］，這促使研究者加快研究耐藥性質(zhì)粒消除的步伐。大腸桿菌等耐藥菌株在臨床上有逐年增多的趨勢(shì)，且耐藥性變遷的速度極快，另外，該菌的生長(zhǎng)、繁殖速度快，耐藥質(zhì)粒復(fù)制時(shí)能夠隨著遺傳物質(zhì)復(fù)制，使交叉耐藥菌株不斷出現(xiàn)，耐藥譜變寬。因此，要使細(xì)菌性
中國(guó)獸藥雜志 2018年11期2018-12-15
- 豬帶絳蟲(chóng)TSOL18基因重組乳球菌疫苗的穩(wěn)定性分析
擬將豬帶絳蟲(chóng)重組質(zhì)粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18電穿孔轉(zhuǎn)化入L.lactisMG1363，分別在無(wú)紅霉素抗性和含紅霉素抗性條件下連續(xù)人工傳代20次，通過(guò)測(cè)定質(zhì)粒穩(wěn)定率和SacI/HindIII雙酶切鑒定，測(cè)定質(zhì)粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中的遺傳穩(wěn)定性。1 材料與方法1.1 材料1.1.1質(zhì)粒與菌種 重組質(zhì)粒pMG36e-TSOL18和pMG36e-SP-TSOL18、由本
中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào) 2018年11期2018-12-13
- 植物乳桿菌野生質(zhì)粒分析及其提取方法的優(yōu)化
存在大量的野生型質(zhì)粒，能夠表達(dá)和遺傳如代謝、抗性相關(guān)的基因，因此，挖掘高拷貝、穩(wěn)定復(fù)制的野生型質(zhì)粒元件和無(wú)質(zhì)粒受體菌是構(gòu)建細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)的關(guān)鍵［4］。由于乳酸菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，且部分野生型質(zhì)粒拷貝數(shù)低，因此使用傳統(tǒng)堿裂解法或普通質(zhì)粒提取試劑盒提取效果并不理想［4-5］。目前，乳酸菌質(zhì)粒提取方法已有多個(gè)報(bào)道，但操作均過(guò)于復(fù)雜、周期長(zhǎng)、毒性大、質(zhì)粒產(chǎn)量低且多數(shù)只適合對(duì)數(shù)期乳酸球菌［6-9］，因此，該試驗(yàn)對(duì)比研究已報(bào)道的兩種常規(guī)方法和優(yōu)化后的方法，最終得到可應(yīng)用于
畜牧與飼料科學(xué) 2018年11期2018-12-10
- 沉默結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因KPNA2對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和順鉑敏感性的影響及其機(jī)制
gfp-s3重組質(zhì)粒以及空質(zhì)粒pSUPER-Egfp-neo購(gòu)于上海北諾生物科技有限公司；兔抗人KPNA2單克隆抗體、兔抗人Erk1/2和p-Erk1/2多克隆抗體、兔抗人Caspase-3、活化后Caspase-3單克隆抗體購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司；ECL顯色試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒、Transwell小室購(gòu)于北京科宇深藍(lán)科技有限公司。1.2 方法1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、分組與轉(zhuǎn)染 CAOV3細(xì)胞放入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，CO2孵箱
山東醫(yī)藥 2018年35期2018-10-26
- 大腸桿菌-鴨疫里默氏桿菌高效穿梭質(zhì)粒pFY02的構(gòu)建和應(yīng)用
失基因克隆至穿梭質(zhì)粒進(jìn)行功能回補(bǔ)驗(yàn)證。在我們之前的研究中，構(gòu)建了能夠用于鴨疫里默氏桿菌基因回補(bǔ)的穿梭質(zhì)粒pLMF03[15]，然而該質(zhì)粒所包含酶切位點(diǎn)較少，接合轉(zhuǎn)移效率低下，不能滿足所有鴨疫里默氏桿菌基因的回補(bǔ)。為解決這一缺陷，本研究構(gòu)建了結(jié)合轉(zhuǎn)移效率高，能穩(wěn)定存在于鴨疫里默氏桿菌中且能用于鴨疫里默氏桿菌基因回補(bǔ)的穿梭質(zhì)粒pFY02。1 材料與方法1.1 菌株及試劑質(zhì)粒 pPM5由比利時(shí)那慕爾大學(xué) Guy R.Cornelis教授惠贈(zèng)[16]。質(zhì)粒 pEX
生物工程學(xué)報(bào) 2018年10期2018-10-25
- 短乳桿菌天然質(zhì)粒分類
個(gè)短乳桿菌天然質(zhì)粒基因組序列，從質(zhì)粒大小、數(shù)量和復(fù)制類型而言，短乳桿菌是乳桿菌屬中攜帶天然質(zhì)粒最豐富的菌種之一[7]，這一現(xiàn)象表明，質(zhì)粒在短乳桿菌生長(zhǎng)、代謝、遺傳和進(jìn)化等生物學(xué)過(guò)程中可能扮演著特殊且重要的角色，此外，眾多天然質(zhì)粒的發(fā)現(xiàn)和測(cè)定為短乳桿菌基因工程改造和生物技術(shù)應(yīng)用提供了必要的研究和材料基礎(chǔ)。然而，目前對(duì)短乳桿菌天然質(zhì)粒的了解和研究比較有限，現(xiàn)有研究主要集中于載體構(gòu)建[8-10]和特殊功能質(zhì)粒[11-12]。本研究以短乳桿菌天然質(zhì)粒為研究對(duì)象，
食品科學(xué) 2018年10期2018-05-23
- 一株食竇魏斯氏菌的分離鑒定及其質(zhì)粒的序列分析
功能都與其攜帶的質(zhì)粒相關(guān),如產(chǎn)胞外多糖、產(chǎn)細(xì)菌素、抗生素抗性等[9]。因此對(duì)質(zhì)粒生物學(xué)和遺傳學(xué)的研究受到了極大關(guān)注。許多魏斯氏菌擁有一個(gè)或多個(gè)天然質(zhì)粒,但是相對(duì)于乳桿菌屬、乳球菌屬、腸球菌屬等質(zhì)粒,對(duì)魏斯氏菌質(zhì)粒研究較少[9-10]。Park[11]、金紅星[12]、Kim[13]等分別從食竇魏斯氏菌(Weissellacibaria)分別分離出3、2、6個(gè)質(zhì)粒,王海娟等[14]從融合魏斯氏菌(Weissellaconfusa)中分離出了2個(gè)質(zhì)粒,并對(duì)部分
食品工業(yè)科技 2018年8期2018-05-01
- 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化、提取及酶切分析
●黃靜質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化、提取及酶切分析●黃靜目的：構(gòu)建人Bcl-2基因原核表達(dá)載體，并對(duì)其酶切鑒定。方法：將Bcl-2重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入經(jīng)CaCl2法制備的大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，篩選培養(yǎng)充分克隆，然后用堿裂解法分離提取重組質(zhì)粒DNA，最后用限制性內(nèi)切酶酶切重組質(zhì)粒DNA，并跑電泳鑒定。人Bcl-2基因；質(zhì)粒轉(zhuǎn)化；CaCl2法；質(zhì)粒提??；堿裂解法；酶切分析本研究介紹人Bcl-2重組質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化、分離提取和內(nèi)切酶酶切鑒定。1 材料與方法1.1 試劑不含
保健文匯 2017年6期2017-11-02
- 基于模型建構(gòu)的“基因工程”一節(jié)的高三復(fù)習(xí)教學(xué)設(shè)計(jì)
步驟，形成正確的質(zhì)粒選擇策略、限制酶選擇策略、質(zhì)粒標(biāo)記基因的運(yùn)用策略，理解3種受體細(xì)胞的產(chǎn)生。2.2 過(guò)程與方法目標(biāo) 經(jīng)歷模擬活動(dòng)，理解基因工程中的一些操作策略；參與探究活動(dòng)，體驗(yàn)科學(xué)發(fā)現(xiàn)、形成結(jié)論的過(guò)程；提高自主學(xué)習(xí)和合作探究的能力。2.3 情感態(tài)度與價(jià)值觀目標(biāo) 感受合作探究的樂(lè)趣，培養(yǎng)實(shí)事求是的精神。3 教學(xué)過(guò)程3.1 課前活動(dòng)——基因工程中的“剪”和“粘”的練習(xí)準(zhǔn)備小組活動(dòng)材料：DNA分子3個(gè)(圖1，紙質(zhì)，長(zhǎng)度為A4紙高)，陰影部分示限制酶識(shí)別序列，
生物學(xué)教學(xué) 2017年3期2017-08-20
- 細(xì)菌中獲得并轉(zhuǎn)移耐藥基因—質(zhì)粒概述
并轉(zhuǎn)移耐藥基因—質(zhì)粒概述高淑娟 （山東省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局 271000）細(xì)菌已在地球上存在了30億年左右，變得擅于保護(hù)自己免受有毒化學(xué)物質(zhì)的侵害。而抗生素在臨床上使用已有70多年，目前耐藥性問(wèn)題成為了世界上嚴(yán)峻的問(wèn)題之一，同時(shí)這也證明了細(xì)菌適應(yīng)能力之強(qiáng)及傳播速度之快。細(xì)菌的耐藥性機(jī)制有多種方式，包括：靶點(diǎn)保護(hù)，靶點(diǎn)替代，抗生素降解以及阻斷胞內(nèi)抗生素積累。耐藥性的獲得是在多種基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)協(xié)助下完成的，耐藥基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)(如細(xì)菌接合質(zhì)粒，轉(zhuǎn)座元件和整合子系
山東畜牧獸醫(yī) 2017年9期2017-04-05
- 一個(gè)融合魏斯氏菌隱蔽質(zhì)粒的序列分析
融合魏斯氏菌隱蔽質(zhì)粒的序列分析王海娟1戴雨珂2蘇森森1王英3潘渠1（1. 成都醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室，成都 610500；2. 成都醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生系，成都 610500；3. 成都軍區(qū)總醫(yī)院腎內(nèi)科，成都 610500）從融合魏斯氏菌（Weissella confusa QJ012）中發(fā)現(xiàn)一個(gè)隱蔽質(zhì)粒（pQJ012），測(cè)序結(jié)果顯示該質(zhì)粒大小為1 489 bp，堿基G+C含量為42.8%。BLAST結(jié)果顯示該質(zhì)粒的核苷酸序列同pJY33和pKLCA的同源性分別
生物技術(shù)通報(bào) 2016年4期2016-06-13
- 質(zhì)粒抽提策略對(duì)雙酶切鑒定的影響
2］，而很少報(bào)道質(zhì)粒抽提策略對(duì)彌散的影響。筆者在雙酶切鑒定葡萄糖6-磷酸脫氫酶(glucose 6-phosphate dehydrogenase，G6PD)重組質(zhì)粒pET-28a-G6PD時(shí)，發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒抽提策略對(duì)雙酶切后瓊脂糖凝膠電泳彌散有顯著影響，現(xiàn)報(bào)道如下，以供參考。1 材料與方法1.1 質(zhì)粒與菌株含空質(zhì)粒 pET-28a的大腸桿菌 Top10(pET-28a/Top10)由本教研室保存。重組質(zhì)粒pET-28a-G6PD為筆者構(gòu)建并轉(zhuǎn)化至Top10感受
山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2015年6期2015-12-16
- 產(chǎn)丙酮酸氧化酶重組大腸桿菌的發(fā)酵過(guò)程質(zhì)粒穩(wěn)定性研究
菌的發(fā)酵過(guò)程中，質(zhì)粒不穩(wěn)定性（Plasmid instability）是一個(gè)比較嚴(yán)重的問(wèn)題，會(huì)導(dǎo)致目的產(chǎn)物水平的下降.在工業(yè)發(fā)酵過(guò)程中，對(duì)重組細(xì)胞要求質(zhì)粒穩(wěn)定性保持在25代以上[11].因此，研究重組細(xì)胞質(zhì)粒的穩(wěn)定性對(duì)于提高發(fā)酵效率有著十分重要的意義[12].從目前已有報(bào)道來(lái)看，影響質(zhì)粒穩(wěn)定性的因素很多，比如生長(zhǎng)培養(yǎng)基組分[13-14]、質(zhì)粒拷貝數(shù)[15]、宿主遺傳背景、培養(yǎng)條件、比生長(zhǎng)速率[16]、培養(yǎng)溫度[17]、外源蛋白表達(dá)水平[18]以及所表達(dá)蛋白
常熟理工學(xué)院學(xué)報(bào) 2015年4期2015-06-15
- 攜帶SLC基因的Birc5－siRNA質(zhì)粒載體的構(gòu)建及鑒定＊
c5－siRNA質(zhì)粒載體的構(gòu)建及鑒定＊舒 榕1，王 強(qiáng)2△，朱慧芬3，孫媛麗3，賀 琪3， 萬(wàn)京華21湖北省中山醫(yī)院麻醉科，武漢 4300332武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物與免疫學(xué)系，武漢 4300653華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，武漢 430030目的 構(gòu)建攜帶SLC基因的Birc5－siRNA質(zhì)粒載體，為腫瘤靶向治療研究提供基礎(chǔ)。方法 使用Ambion公司siRNATarget Finder設(shè)計(jì)的Birc5mRNA干擾序列，將Bi
- 乳桿菌屬天然質(zhì)粒研究進(jìn)展
曦*乳桿菌屬天然質(zhì)粒研究進(jìn)展孫大慶1,2，李洪飛1，宋大巍1，楊 健1,3，張東杰1,3，許曉曦2,*（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 國(guó)家雜糧工程技術(shù)研究中心，黑龍江 大慶 163319；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；3.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 大慶 163319）天然質(zhì)粒在乳桿菌屬多個(gè)菌種中已被發(fā)現(xiàn)，它們攜帶了許多重要生理功能和脅迫因子抗性基因，對(duì)乳桿菌遺傳、代謝、進(jìn)化等生物學(xué)研究具有重要意義。本文概述乳桿菌屬天然質(zhì)粒的生
食品科學(xué) 2015年11期2015-04-09
- 抗鼻咽癌質(zhì)粒pFY轉(zhuǎn)化和菌種篩選的研究*
基礎(chǔ)研究抗鼻咽癌質(zhì)粒pFY轉(zhuǎn)化和菌種篩選的研究*翁閃凡，劉 娜，張曉林(佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系，廣東佛山 528000)目的篩選攜帶抗鼻咽癌質(zhì)粒pFY的穩(wěn)定高產(chǎn)菌株。方法以CaCl2法制備大腸桿菌JM109感受態(tài)，將抗鼻咽癌質(zhì)粒pFY轉(zhuǎn)化JM109感受態(tài)，對(duì)瓊脂平板上獲得的菌落進(jìn)行篩選，選出符合標(biāo)準(zhǔn)的單菌落為菌種，進(jìn)行菌種穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。用質(zhì)粒提取試劑盒檢測(cè)質(zhì)粒含量。將抗鼻咽癌質(zhì)粒pFY轉(zhuǎn)染到細(xì)胞CNE-2中，四氮唑藍(lán)(MTT)比色法觀察轉(zhuǎn)染試劑及質(zhì)
重慶醫(yī)學(xué) 2015年26期2015-01-06
- 乳制品乳酸菌遺傳學(xué)概述*
儲(chǔ)存于自主復(fù)制的質(zhì)粒中。乳酸菌遺傳學(xué)研究的主要是它們當(dāng)中的質(zhì)粒和噬菌體，這些質(zhì)粒和噬菌體在乳酸菌中起著比較重要的作用，對(duì)比染色體，采用分子遺傳分析方法來(lái)分析的質(zhì)粒和噬菌體更加容易獲取和研究。眾所周知，好的發(fā)酵劑菌株對(duì)于乳制品發(fā)酵來(lái)說(shuō)至關(guān)重要，但是這些菌株的某些特性并不穩(wěn)定，而大部分原因歸咎于質(zhì)粒的缺失，質(zhì)粒的編碼消除等對(duì)菌株的特性至關(guān)重要。1.1 質(zhì)粒DNA的檢測(cè)及其豐度1972年，Mckay等人［4］推斷乳酸鏈球菌(Str.lactis)喪失利用乳糖的能
食品與發(fā)酵工業(yè) 2014年1期2014-12-16
- GM-CSF 與生長(zhǎng)抑素共表達(dá)基因疫苗的構(gòu)建和鑒定
等以豬的真核表達(dá)質(zhì)粒pGM-CSF 為模板，構(gòu)建GM-CSF 與SS 融合表達(dá)質(zhì)粒(pGM-CSF/SS)，免疫小鼠后，可增強(qiáng)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖能力，提高生長(zhǎng)抑素抗體的P/N 值［2］，提高肌肉組織中GHR 和IGF-I mRNA 的表達(dá)［3］。本研究利用動(dòng)物的生長(zhǎng)軸的原理，采用生物工程的方法，應(yīng)用共表達(dá)載體pIRES 將GM-CSF 基因和SS 基因分別克隆到載體的多克隆位點(diǎn)A 和B，構(gòu)建共表達(dá)基因疫苗，旨在同時(shí)表達(dá)GM-CSF 和SS 兩種蛋白，研
- 螢光素酶表達(dá)質(zhì)粒pEE14.1-luc的構(gòu)建及表達(dá)
探討[4]，其中質(zhì)粒的大小是影響遞送效率的重要因素之一?，F(xiàn)有含螢光素酶報(bào)告基因的質(zhì)粒pGL3-CMV，但分子較小僅為5 kb，不便于模擬分子較大的DNA 質(zhì)粒進(jìn)行電穿孔遞送條件的研究[5]。因此，我們構(gòu)建了螢光素酶表達(dá)質(zhì)粒pEE14.1-luc，其中pEE14.1 是一種高效表達(dá)載體[6]，分子較大約為11 kb，將螢光素酶報(bào)告基因luc克隆入該載體后的質(zhì)粒分子可達(dá)12.7 kb。以此質(zhì)粒作為大分子質(zhì)粒的代表，為進(jìn)一步摸索遞送10 kb 以上質(zhì)粒的電穿孔條
生物技術(shù)通訊 2014年6期2014-11-29
- 優(yōu)化的密度梯度離心法提取質(zhì)粒DNA
050024)質(zhì)粒DNA是一種基因運(yùn)載工具，在分子生物學(xué)、基因工程中有著極為廣泛的應(yīng)用，作為質(zhì)粒載體有3個(gè)共同的特征：一個(gè)復(fù)制子、一個(gè)選擇性標(biāo)志和一個(gè)克隆位點(diǎn).而質(zhì)粒 DNA 的分離提取是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最基本的工作.現(xiàn)在已經(jīng)建立了多種提取純化質(zhì)粒 DNA的方法[1]，這些方法都包括 3個(gè)步驟：培養(yǎng)細(xì)菌，收集和裂解細(xì)菌，純化質(zhì)粒DNA.由于質(zhì)粒的大小不同，收集質(zhì)粒的方法應(yīng)有所區(qū)別，大于15 kb的質(zhì)粒要用溫和的方法.小于15 kb的質(zhì)粒可以用較劇烈的方法
衡水學(xué)院學(xué)報(bào) 2014年4期2014-11-23
- Bach1克隆構(gòu)建及其對(duì)肝癌細(xì)胞藥物敏感性的影響
li.DH5α、質(zhì)粒pBI-EGFP、質(zhì)粒pTet-Off、人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721：本室保存；質(zhì)粒pQE30-Bach1：美國(guó)教授饋贈(zèng)；限制性核酸內(nèi)切酶NheⅠ，MluⅠ，KpnⅠ，HindⅢ：Fermentas公司；PCR產(chǎn)物純化試劑盒：上海捷瑞生物工程股份有限公司；RPMI1640培養(yǎng)基：Gibco公司； 無(wú)支原體胎牛血清：北京索來(lái)寶公司；脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染試劑：Invitrogen公司；cDNA第一鏈合成試劑盒：華北制藥集團(tuán)有限公司。1.2重
中國(guó)老年學(xué)雜志 2014年21期2014-09-13
- 細(xì)菌線性質(zhì)粒的復(fù)制研究
212013）質(zhì)粒是染色體外能夠進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳單位，廣泛存在于許多生物中，習(xí)慣上用來(lái)專指細(xì)菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體以外的DNA 分子，它們能為宿主提供一些額外的功能，如抗藥性和毒力等，絕大多數(shù)的細(xì)菌質(zhì)粒都是閉合環(huán)狀DNA 分子。1979 年，在產(chǎn)抗生素的土壤微生物——婁徹鏈霉菌中發(fā)現(xiàn)了第一例原核生物線性質(zhì)粒［1］，到目前為止，已在數(shù)十種鏈霉菌中發(fā)現(xiàn)了線性質(zhì)粒，其分子大小在12-640 kb 之間［2］。1985 年，在疏螺旋體中發(fā)現(xiàn)了另一大類
生物技術(shù)通報(bào) 2014年5期2014-04-10
- 大腸桿菌外源蛋白表達(dá)載體穩(wěn)定性的研究進(jìn)展
610041）質(zhì)粒穩(wěn)定性是影響基因工程菌外源蛋白表達(dá)的重要因素，同時(shí)外源蛋白的表達(dá)又影響質(zhì)粒的穩(wěn)定性。隨著DNA 重組技術(shù)的發(fā)展，該技術(shù)在科研工作和應(yīng)用生產(chǎn)中占據(jù)著越來(lái)越重要的位置。目前，關(guān)于質(zhì)粒穩(wěn)定性及其改良的論述仍比較少見(jiàn)，且不夠全面。自20 世紀(jì)70 年代以來(lái)，大腸桿菌一直是基因工程中應(yīng)用最為廣泛的表達(dá)系統(tǒng)。大腸桿菌遺傳背景清楚，轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高，成本低廉，生長(zhǎng)繁殖快，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，培養(yǎng)操作簡(jiǎn)便，可以大規(guī)模地快速生產(chǎn)目的蛋白，加之其表達(dá)外源基因產(chǎn)物的水
生物技術(shù)通報(bào) 2014年5期2014-01-14
- Chelex－100法提取真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3－HERG的應(yīng)用體會(huì)
0法提取真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3－HERG的應(yīng)用體會(huì)楊海濤目的 探討Chelex－100法提取先天性長(zhǎng)QT綜合征相關(guān)人類真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3－HERG的可行性。方法 分別用Chelex－100法和堿裂解法提取pcDNA3－HERG質(zhì)粒，將環(huán)狀質(zhì)性DNA酶切為線性，0.8%瓊脂糖凝膠電泳后紫外燈下檢測(cè)質(zhì)粒提取的有效性。結(jié)果 用Chelex－100法和堿裂解法提取的pcDNA3－HERG質(zhì)粒的OD(A260/A280)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［分別為(1.8±
中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新 2012年6期2012-11-15
- 卡介苗穿梭表達(dá)質(zhì)粒p MS MCP－1的構(gòu)建與鑒定＊
，將構(gòu)建穿梭表達(dá)質(zhì)粒，欲將該質(zhì)粒導(dǎo)入BCG，使BCG表達(dá)分泌MCP－1，達(dá)到構(gòu)建重組BCG的目的。1 材料和方法1.1 材料 Taq DNA 聚合酶、Eco RⅠ、SaⅡ、Bam HⅠ、T4DNA連接酶、DNA Marker DL2000、Marker DL15000購(gòu)于上海皓嘉科技發(fā)展有限公司。BCG上海丹麥株由上海市生物制品研究所惠贈(zèng)。質(zhì)粒p M V261（Stover CK博士構(gòu)建）由四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院徐恒教授惠贈(zèng) 。人MCP－1c DNA由上海交
醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐 2012年20期2012-09-11
- 結(jié)核分枝桿菌Rpf－DNA疫苗對(duì)Mtb感染小鼠免疫保護(hù)作用的研究
pf E－DNA質(zhì)粒疫苗的構(gòu)建和表達(dá)：具體方法參考文獻(xiàn)［4］。2．轉(zhuǎn)染質(zhì)粒制備：按照梭華Sofast基因轉(zhuǎn)染試劑盒操作說(shuō)明書(shū)制備。3．免疫動(dòng)物：180只SPF級(jí)4周齡BALB／c雌性小鼠，平均分為6組。即空質(zhì)粒組、Rpf D質(zhì)粒組、Rpf E質(zhì)粒組、BCG組、生理鹽水組、空白對(duì)照組。空質(zhì)粒組、Rpf D質(zhì)粒組、Rpf E質(zhì)粒組和生理鹽水組分別背部皮下接種空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、Rpf D－DNA轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、Rpf E－DNA轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、生理鹽水各200μl；而空白對(duì)照
中國(guó)防癆雜志 2012年8期2012-09-02
- 經(jīng)典堿裂解法質(zhì)粒大量提取方法的改良
高濃度及高純度的質(zhì)粒DNA，且要求DNA的A260/A280值應(yīng)控制在1.8～2.0之間。雖然近些年來(lái)質(zhì)粒大量提取試劑盒層出不窮，但大多費(fèi)用較高，所以目前大多實(shí)驗(yàn)室仍以傳統(tǒng)的手提方法為主，其中以薩姆布魯克[1]提出的經(jīng)典堿裂解法應(yīng)用的最為廣泛。但此方法卻仍存在諸多弊端，例如操作復(fù)雜、耗時(shí)、所得質(zhì)粒純度低等，尤其是多次使用有機(jī)溶劑容易造成質(zhì)粒DNA的污染，且易對(duì)實(shí)驗(yàn)人員構(gòu)成危害，實(shí)驗(yàn)廢液也會(huì)造成不同程度的環(huán)境污染[2]。因此本實(shí)驗(yàn)室在經(jīng)典的堿裂解法基礎(chǔ)上，采
黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào) 2012年2期2012-07-04
- 不同轉(zhuǎn)染條件影響質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率的探討
不同轉(zhuǎn)染條件影響質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率的探討王紅鋼1，林 波2，汪文利3（1.河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院 生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，河南 開(kāi)封 475004；2.河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院 病理生理學(xué)教研室，河南 開(kāi)封 475004；3.開(kāi)封市第二人民醫(yī)院 耳鼻喉科，河南 開(kāi)封 475000）目的通過(guò)插入不同片段質(zhì)粒、不同劑量的轉(zhuǎn)染，研究GFP基因轉(zhuǎn)染效率的變化。方法構(gòu)建插入不同片段的載體，以不同條件轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，以Northern blot分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染入細(xì)胞中各個(gè)質(zhì)粒的表達(dá)水平。結(jié)
- 聚乙二醇修飾多壁碳納米管對(duì)質(zhì)粒DNA的影響
修飾MWNTs與質(zhì)粒DNA的作用情況，并從二者對(duì)質(zhì)粒DNA損傷的角度考察了MWNTs的生物相容性.1 實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)中使用的MWNTs直徑為10～30 nm，長(zhǎng)度為5～50 μm，購(gòu)自深圳市納米港公司.本實(shí)驗(yàn)采用混酸氧化法純化MWNTs，用V(濃硝酸)∶V(濃硫酸)=1∶3的混合酸超聲處理MWNTs，通過(guò)離心分離和真空干燥，得到的黑色固體為純化MWNTs.PEG修飾MWNTs的合成方法為如下：取干燥的50 mg純化MWNTs，加入15 mL pH=7.0的磷酸
- 大腸桿菌hCG核酸疫苗質(zhì)粒擴(kuò)增營(yíng)養(yǎng)條件研究
基因構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒直接導(dǎo)入動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi)，使外源基因通過(guò)機(jī)體內(nèi)源性表達(dá)系統(tǒng)并提呈給免疫系統(tǒng)，誘發(fā)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。由于質(zhì)粒DNA傳遞系統(tǒng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率比較低，估計(jì)提供給細(xì)胞的每1000個(gè)質(zhì)粒分子只有1個(gè)能到達(dá)細(xì)胞核并被表達(dá)，導(dǎo)致徹底治愈疾病需要大量的質(zhì)粒DNA,因此，隨著核酸疫苗進(jìn)入臨床研究，必須開(kāi)發(fā)質(zhì)粒DNA的大規(guī)模生產(chǎn)技術(shù)。質(zhì)粒DNA生產(chǎn)的工藝流程包括質(zhì)粒DNA的構(gòu)建、工程菌發(fā)酵、菌體收集、細(xì)菌裂解、純化濃縮、質(zhì)量檢驗(yàn)與包
化學(xué)與生物工程 2010年1期2010-06-04