膜片鉗
- 皮層局部環(huán)路結(jié)構(gòu)與功能研究綜述
跨突觸標(biāo)記或者膜片鉗技術(shù)可以記錄到介觀水平的神經(jīng)元形態(tài)以及連接,但介觀難以發(fā)現(xiàn)微觀水平上存在的連接細(xì)節(jié),如無法記錄到突觸后連接精細(xì)的亞水平結(jié)構(gòu).并且介觀水平的分辨率受到光學(xué)成像的限制,對(duì)突觸連接的判斷存在一定程度的干擾.所以,微觀連接組學(xué)(Micro-connectomics)應(yīng)運(yùn)而生,分辨率在納米級(jí),主要利用電鏡技術(shù)來獲取納米分辨率下的神經(jīng)元,在局部環(huán)路研究上具有非常大的優(yōu)勢.大腦的連接不僅是腦區(qū)之間的信號(hào)傳遞,在腦認(rèn)知研究中最關(guān)鍵的是皮層密集連接,以及
- 膜片鉗技術(shù)在醫(yī)學(xué)本科生實(shí)驗(yàn)課程中的教學(xué)實(shí)踐探索
400038膜片鉗技術(shù)采用尖端開口在1～5 μm 的硅酸鹽玻璃電極與細(xì)胞膜緊密接觸，形成G 歐姆級(jí)別（10～100 GΩ）的緊密封接，從而實(shí)現(xiàn)高信噪比的記錄[1]。該技術(shù)于1976 年由德國兩位科學(xué)家Neher 和Sakmann 發(fā)明，其出現(xiàn)革命性地推動(dòng)了在單細(xì)胞水平對(duì)可興奮細(xì)胞（神經(jīng)元和心肌細(xì)胞等）放電活動(dòng)及其離子通道基礎(chǔ)的研究，為理解神經(jīng)系統(tǒng)電活動(dòng)打開了微觀世界的入口[2]。自發(fā)明以來，該技術(shù)一直是生理學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科在細(xì)胞、離子通道功能研究
中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2022年28期2022-11-25
- hERG1a突變H70R對(duì)hERG1a單源四聚體和hERG1a/hERG1b二源四聚體通道功能的影響
ch 700B膜片鉗放大器(Axon公司,美國)，Digidata 1322數(shù)模轉(zhuǎn)換器(Axon公司,美國)。Sutter p-97微電極拉制儀(Sutter公司,美國)，MF-830微電極拋光儀(Narishige公司,日本)。1.2 突變誘導(dǎo)，載體表達(dá)應(yīng)用定點(diǎn)突變誘導(dǎo)試劑盒，對(duì)攜帶有野生型KCNH2 cDNA的pcDNA3.1進(jìn)行c. 209 A>G突變誘導(dǎo)。突變誘導(dǎo)后進(jìn)行DNA測序證實(shí)c. 209 A>G突變存在。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，應(yīng)用人胚腎(hu
首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2022年5期2022-10-25
- 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在遺傳性長QT 綜合征和不明原因猝死中的研究進(jìn)展
為重要。全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)（Patch clamp techniques）作為先進(jìn)的細(xì)胞電生理技術(shù)，在研究離子通道疾病中的應(yīng)用日益廣泛，尤其是對(duì)于LQTS 相關(guān)基因突變致病性的評(píng)估、SUD 的預(yù)防和死亡原因鑒定等方面具有重要意義。本文對(duì)全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在LQTS 和SUD 中的應(yīng)用進(jìn)行綜述。1 長QT 綜合征的研究現(xiàn)狀長QT 綜合征是一組以體表心電圖QT 間期延長為主要特征、易引發(fā)尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過速等心律失常、嚴(yán)重者可導(dǎo)致猝死的心臟離子通道疾病。研究表明
昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2022年6期2022-07-04
- ANO1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型的構(gòu)建及生理特性
德國BMG)，膜片鉗(德國HEKA)，倒置熒光顯微鏡(日本Nikon)，流式細(xì)胞儀(美國BD)。1.3 方法1.3.1 細(xì)胞模型的構(gòu)建1.3.1.1 最適抗生素濃度的選擇 將狀態(tài)較好FRT鋪到96孔板中，16 h后細(xì)胞密度達(dá)到70%～90%，分別加入濃度為1 000、800、600、400、200 μg/L和100 μg/L的Zeocin，2周后細(xì)胞全部死亡的濃度即為Zeocin抗生素篩選的最適濃度。G418應(yīng)用相同的方法選擇最適濃度。1.3.1.2 構(gòu)建
中國獸醫(yī)雜志 2021年9期2022-01-17
- 為什么我們能感受溫度和觸覺
則進(jìn)入黃瓜內(nèi)。膜片鉗我們的細(xì)胞為什么能把鈉離子擋在外面呢？無數(shù)科學(xué)家為此撓破頭皮，一直到20世紀(jì)70年代，德國科學(xué)家伯特·薩克曼發(fā)明了一種新的裝置：膜片鉗。膜片鉗的使用方式與顯微鏡有點(diǎn)像。使用顯微鏡時(shí)，我們首先要從研究目標(biāo)上切下一小塊，制成標(biāo)本，然后將標(biāo)本放到顯微鏡下，依靠顯微鏡的放大能力進(jìn)行觀察。膜片鉗可以看作一把很小的鉗子，科學(xué)家用它揪住細(xì)胞的一角，而后放大這一角的電流，觀察其中的規(guī)律。結(jié)果呢？科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞膜上有許多“小門”，它們十分挑剔，有的只對(duì)
科學(xué)大眾 2021年23期2021-12-28
- 利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄大鼠腦片NMDA電流的研究*
030001)膜片鉗技術(shù)在1976年由德國科學(xué)家Nether和Sakmann 發(fā)明，他們首次在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時(shí)記錄到乙酰膽堿激活的單通道離子電流[1]。這種技術(shù)通過記錄細(xì)胞膜上單個(gè)或幾個(gè)離子通道開放或關(guān)閉引起的電流變化來研究細(xì)胞生理功能，已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域，尤其是神經(jīng)科學(xué)的許多方面。如記錄在腦內(nèi)功能活動(dòng)時(shí)神經(jīng)元興奮性的變化，神經(jīng)信號(hào)的產(chǎn)生和傳導(dǎo)，神經(jīng)環(huán)路中突觸的傳遞過程等研究中[2-6]。全細(xì)胞記錄模式下可以獲得細(xì)胞膜上所有離子
中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 2021年5期2021-12-10
- 家福捕鳥蛛毒素-22鈉通道活性與基本性質(zhì)分析
P-HPLC和膜片鉗活性測定，從其粗毒中分離鑒定到1個(gè)對(duì)TTX-R鈉電流具有明顯抑制作的毒素分子（JFTX-22），并進(jìn)行了JFTX-22的基本理化性質(zhì)分析、空間結(jié)構(gòu)預(yù)測和同源序列比對(duì).1 材料與方法1.1 材料1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：家福捕鳥蛛采自廣西寧明縣桐棉鎮(zhèn)和愛店鎮(zhèn)的山區(qū)，SD大鼠購自湘雅醫(yī)學(xué)院動(dòng)物養(yǎng)殖中心.1.1.2 試劑：Sigma公司的葡萄糖、D-glucose、NaOH、KCl、冰乙酸、氯化銫、MgCl2、EGTA、三氟乙酸、胰蛋白酶抑制劑、
懷化學(xué)院學(xué)報(bào) 2021年5期2021-12-01
- 電生理膜片鉗相關(guān)設(shè)備使用規(guī)范
小敏【關(guān)鍵詞】膜片鉗系統(tǒng);微電極拉制儀;儀器設(shè)備;使用規(guī)范一、膜片鉗技術(shù)的工作原理膜片鉗技術(shù)是用于了解離子通道行為的通用型電生理工具，首先用微玻管電極（膜片電極或膜片吸管）接觸細(xì)胞膜，然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖端與細(xì)胞膜封接，通過吸破或者電破的方式使與電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域與其周圍區(qū)域在電學(xué)上分隔，然后細(xì)胞膜破裂，進(jìn)而對(duì)此區(qū)域上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測記錄的方法。該方法廣泛應(yīng)用于神經(jīng)細(xì)胞，肌纖維細(xì)胞，心肌細(xì)胞及高表達(dá)單一通道的卵母細(xì)胞。
消費(fèi)電子 2021年9期2021-11-05
- 利用膜片鉗技術(shù)標(biāo)記腦片神經(jīng)元的方法*
1)在進(jìn)行腦片膜片鉗實(shí)驗(yàn)時(shí)，經(jīng)常需要甄別實(shí)驗(yàn)中選取的是哪一類細(xì)胞。通常是根據(jù)目標(biāo)區(qū)域中細(xì)胞的鏡下形態(tài)、細(xì)胞的靜息電位及一些電生理學(xué)特性來進(jìn)行初步的鑒別和區(qū)分。本實(shí)驗(yàn)室采用了一種通過全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)對(duì)腦片上目標(biāo)神經(jīng)元實(shí)施熒光標(biāo)記的方法。該方法在記錄離子通道電流后經(jīng)過處理就可以更直觀呈現(xiàn)觀察神經(jīng)元胞體和部分突起的形態(tài)，為實(shí)驗(yàn)提供形態(tài)學(xué)的證據(jù)。實(shí)驗(yàn)中用到的兩種染色生物制劑分別為NeurobiotinTMTracer和Streptavidin-Texas Red。
中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 2021年4期2021-10-22
- TRPA1 抑制劑的高通量篩選及新型骨架的發(fā)現(xiàn)
篩選系統(tǒng)和手動(dòng)膜片鉗檢測技術(shù)，靶向TRPA1 通道，對(duì)自建的已上市藥物樣品庫進(jìn)行抑制活性篩選，發(fā)現(xiàn)多種不同特性的三環(huán)類分子具有明顯的TRPA1 抑制活性，且結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)一定的規(guī)律性。在已報(bào)道的TRPA1 抑制劑中，還沒有三環(huán)類骨架，本研究將為TRPA1 抑制劑的藥物研發(fā)提供新的骨架結(jié)構(gòu)。1 材料與方法1.1 試劑AITC 購自Sigma；HC030031 由Biobond 制藥公司合成；酮替芬和苯噻啶蘋果酸酯購自九鼎化學(xué)；米安色林和米氮平購自畢得醫(yī)藥；奧氮平購
科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新 2021年19期2021-07-16
- 不同中藥對(duì)NaV1.7離子通道的抑制率比較
膜，使用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，研究這些藥物分別對(duì)NaV1.7離子通道抑制作用。結(jié)果? 抑制率的比較的結(jié)果：三七的抑制率最高，臨床有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 對(duì)于臨床骨科常用藥物止痛效果有一定的指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞：疼痛? 膜片鉗? 離子通道? 中藥鎮(zhèn)痛中圖分類號(hào)：R73??????????? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ???????????? 文章編號(hào)：1672-3791（2021）01（a）-0250-03Comparison of Inhibition Rates of Di
科技資訊 2021年1期2021-03-24
- 走自制實(shí)驗(yàn)設(shè)備之路 凸顯學(xué)科專業(yè)特色
等［2］創(chuàng)建的膜片鉗技術(shù)就是以細(xì)胞膜電流為研究對(duì)象的電生理學(xué)技術(shù)，該技術(shù)于1991 年獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng)，凸顯該技術(shù)在生命科學(xué)研究中的重要性，廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)、心血管科學(xué)、藥理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理生理學(xué)等領(lǐng)域研究。我院較早將生物物理學(xué)作為重點(diǎn)發(fā)展的學(xué)科方向，2007 年獲批國家重點(diǎn)學(xué)科，2008 年建成“國家理科基礎(chǔ)科學(xué)研究和教學(xué)人才培養(yǎng)基地”，具有較完善的生物物理學(xué)科研平臺(tái)和較強(qiáng)的學(xué)科團(tuán)隊(duì)。為推動(dòng)這方面人才的培養(yǎng)，在第6 學(xué)期為生物科學(xué)專業(yè)學(xué)生開
實(shí)驗(yàn)室研究與探索 2021年2期2021-01-26
- 左歸降糖解郁方對(duì)DD大鼠海馬NVU神經(jīng)元mEPSC的影響
型;采用全細(xì)胞膜片鉗記錄NVU體外共培養(yǎng)體系神經(jīng)元mEPSC，比較各組NVU培養(yǎng)體系神經(jīng)元mEPSC頻率和電流幅度。結(jié)果 經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定，NVU培養(yǎng)體系中細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。與正常組和空白血清組相比，模型組大鼠海馬NVU培養(yǎng)體系神經(jīng)元mEPSC的頻率和幅度均顯著上升（P0.05）。結(jié)論 左歸降糖解郁方可降低DD大鼠海馬NVU體外培養(yǎng)體系神經(jīng)元mEPSC的頻率和幅度，對(duì)海馬NVU培養(yǎng)體系的具有調(diào)控作用。〔關(guān)鍵詞〕 糖尿病;抑郁癥;左歸降糖解郁方;微小興奮性突出
湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào) 2020年7期2020-08-12
- 氫氣影響大鼠神經(jīng)興奮傳導(dǎo)的研究
沒有相關(guān)研究。膜片鉗技術(shù)利用玻璃微電極與細(xì)胞膜進(jìn)行封接，對(duì)細(xì)胞膜表面的離子通道的離子電流和電導(dǎo)等參數(shù)進(jìn)行記錄和分析，在神經(jīng)系統(tǒng)功能研究和藥物研究等生理功能研究中已經(jīng)有了廣泛的應(yīng)用[13]。動(dòng)作電位是神經(jīng)或者心肌細(xì)胞等可興奮細(xì)胞受到刺激信號(hào)時(shí)在靜息條件下的基礎(chǔ)上產(chǎn)生的可擴(kuò)布的電位變化過程，動(dòng)作電位過程中包含著鈉、鉀、鈣和氯離子等的轉(zhuǎn)運(yùn)和相應(yīng)的離子通道的開閉，并且在不同的可興奮細(xì)胞具有特征性的動(dòng)作電位[14-16]。因此，研究神經(jīng)細(xì)胞動(dòng)作電位的變化是研究神經(jīng)功
生物技術(shù)進(jìn)展 2020年4期2020-07-30
- 神經(jīng)科學(xué)的突破性方法:膜片鉗技術(shù)
編譯 李升偉膜片鉗技術(shù)最初是為了記錄離子通過細(xì)胞膜通道蛋白的電流而發(fā)展起來的，現(xiàn)在它已經(jīng)成為神經(jīng)科學(xué)工具箱中真正的中堅(jiān)力量。大腦中的信息被認(rèn)為是由數(shù)千個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生的復(fù)雜電脈沖模式編碼而成的。每個(gè)脈沖，即動(dòng)作電位，是由流經(jīng)神經(jīng)元膜的帶電離子電流調(diào)節(jié)的。但是，這些離子是如何穿過神經(jīng)元的絕緣膜的，多年來一直是個(gè)謎。1976年，埃爾溫·內(nèi)爾（Erwin Neher）和伯特·沙克曼（Bert Sakmann）開發(fā)了膜片鉗技術(shù)，該技術(shù)明確表明電流是由膜中許多通道蛋
世界科學(xué) 2020年2期2020-02-27
- 犬左室三層細(xì)胞的分離和電生理記錄*
芳 宋衛(wèi)峰隨著膜片鉗技術(shù)的逐漸推廣和心肌細(xì)胞電異質(zhì)性等研究領(lǐng)域的發(fā)展，心肌細(xì)胞已成為各類心血管疾病結(jié)構(gòu)重構(gòu)和電重構(gòu)機(jī)制研究的重要部分。尤其是對(duì)犬等大型動(dòng)物的心肌細(xì)胞的電生理特性的研究越來越多，也越來越精細(xì)。目前分離的犬心房肌細(xì)胞即刻存活率為80%～90%，復(fù)鈣至1.0 mmol/L KB液中靜置72 h存活約70%左右[1-2]；分離犬心室肌細(xì)胞即刻存活率為60%～80%[3-4]，復(fù)鈣后存活40%～60%。成功分離出高活性和高產(chǎn)量的犬心室肌三層心肌細(xì)胞并
中國心臟起搏與心電生理雜志 2019年4期2019-08-31
- 碘普羅胺對(duì)心室肌細(xì)胞離子通道的影響
：EPC-10膜片鉗放大器(HEKA，Germany)；微電極玻璃毛細(xì)管(微探極，武漢，中國)；水平拉制儀(Sutter P-97，USA)；拋光儀(Narishige Scientific Instrument Lab.，Japan)。1.2 大鼠心室肌細(xì)胞的分離 Wistar大鼠腹腔注射普通肝素（5000U/kg），20min后腹腔注射1%戊巴比妥（1ml/kg），待麻醉完成后迅速開胸切取心臟，并置于4℃無鈣臺(tái)式液中，沖洗后轉(zhuǎn)入4℃無鈣臺(tái)式液培養(yǎng)皿中，
承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) 2019年4期2019-07-09
- 黃芪湯對(duì)腎臟集合管細(xì)胞ENaC活性的影響作用研究
溶酶刺激后，以膜片鉗測定其膜電流變化。結(jié)果：纖溶酶刺激后，空白對(duì)照組的膜電流顯著增強(qiáng)（P0.05）。該兩組的膜電流增幅間無顯著差異（P>0.05），但均顯著低于空白對(duì)照組（P關(guān)鍵詞 黃芪湯 上皮鈉離子通道 膜片鉗中圖分類號(hào)：R289.5； R256.51 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2019）03-0034-04Study on the effect of Huangqi decoction on ENaC activity in ren
上海醫(yī)藥 2019年3期2019-03-10
- 離子通道電流虛擬仿真實(shí)驗(yàn)在生理教學(xué)中的應(yīng)用
通常依靠昂貴的膜片鉗-離子通道測量平臺(tái)才能實(shí)現(xiàn),而我校教學(xué)實(shí)驗(yàn)室不具備進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)的設(shè)備條件。為此,采用計(jì)算機(jī)仿真技術(shù)模擬實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境,研制了離子通道電流虛擬仿真實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)備,在無膜片鉗-離子通道測量平臺(tái)設(shè)備的情況下開設(shè)了生理學(xué)測量離子單通道電流的教學(xué)實(shí)驗(yàn),建立新型實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式[2]。1 離子通道電流虛擬仿真儀器特點(diǎn)離子通道電流虛擬仿真實(shí)驗(yàn)儀器主要應(yīng)用于生物電生理實(shí)驗(yàn)教學(xué),可用于心臟、肝臟、神經(jīng)、肌肉等多臟器的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目[3-9],對(duì)學(xué)生掌握抽象的離子通道蛋白
實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理 2018年3期2018-03-30
- 探討多離子通道阻斷的抗心律失常中藥研究
最近幾年研究的膜片鉗技術(shù)給心律失?；颊邘砀Ｒ?，同時(shí)這也是細(xì)胞生物學(xué)的一場革命。將膜片鉗技術(shù)與中藥的研究結(jié)合在一起，可以有效的幫助研究出抗心律失常的中藥，且將其研究成果已經(jīng)成功通過臨床實(shí)驗(yàn)。1 利用膜片鉗技術(shù)來深入研究中藥多離子通道作用膜片鉗技術(shù)的問世，就有無數(shù)的專家學(xué)者都投身其中進(jìn)行研究，對(duì)多離通道阻斷的中藥主要包括單體、單味以及一些復(fù)方的中藥等。接下來對(duì)一些學(xué)者的深入研究膜片鉗現(xiàn)狀進(jìn)行介紹。作者張婉在2008年研究了苦參堿來阻斷心肌細(xì)胞通道[1]，并將
中西醫(yī)結(jié)合心血管病雜志(電子版) 2018年24期2018-01-16
- 急性分離的脊髓腹角神經(jīng)元膜片鉗記錄技術(shù)
脊髓腹角神經(jīng)元膜片鉗記錄技術(shù)高凌云， 張環(huán)環(huán)， 查盈盈， 鄭 超， 汪萌芽(皖南醫(yī)學(xué)院 細(xì)胞電生理研究室，安徽 蕪湖 241002)目的：建立急性分離的脊髓腹角神經(jīng)元膜片鉗記錄技術(shù)以深入研究脊髓腹角神經(jīng)元上受體的作用。方法選用6～11 d的新生SD大鼠，麻醉后分離出含腰骶膨大的脊髓，制備切片，給予酶消化，切除背角，將腹角吹打分離出單細(xì)胞，進(jìn)行膜片鉗記錄。結(jié)果①分離的腹角神經(jīng)元形態(tài)良好，胞體呈紡錘形、三角形和多邊形伴多條細(xì)長突起；②7個(gè)神經(jīng)元記錄到自發(fā)動(dòng)作電
皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) 2017年6期2017-12-27
- 膜片鉗技術(shù)在慢性痛大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元電生理學(xué)特性改變中的應(yīng)用*
4）·論 著·膜片鉗技術(shù)在慢性痛大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元電生理學(xué)特性改變中的應(yīng)用*蔡 捷1方 東2李 松1邢國剛1△（1北京大學(xué)神經(jīng)科學(xué)研究所/基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物學(xué)系，北京100191；2河南大學(xué)藥學(xué)院，開封 475004）目的：以骨癌痛大鼠為例，探討全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在慢性痛研究中的應(yīng)用。方法：急性分離背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion, DRG）神經(jīng)元，利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)分別記錄對(duì)照組和骨癌痛組大鼠小直徑DRG神經(jīng)元的動(dòng)作電位及TRPV1
中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志 2017年1期2017-11-20
- 奎尼丁對(duì)HEK293細(xì)胞hERG電流和hERG蛋白的影響
3細(xì)胞,全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄電流和Western blot技術(shù)觀察hERG通道蛋白表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)分組:①HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染進(jìn)質(zhì)粒48 h時(shí)加入不同濃度(0，1，3，10 μmol/L)的奎尼丁,并進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)觀察奎尼丁的瞬時(shí)作用。②HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染進(jìn)質(zhì)粒24 h時(shí)往培養(yǎng)基加入不同濃度(1，3，10 μmol/L)的奎尼丁,繼續(xù)培養(yǎng)24 h洗脫奎尼丁后立即進(jìn)行膜片鉗及Western blot實(shí)驗(yàn)觀察奎尼丁的慢性作用。 結(jié)果 ①1 μmol/L、3
山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2017年4期2017-08-07
- GABAA受體激動(dòng)劑對(duì)AD模型配體門控氯通道的作用
細(xì)胞模型；通過膜片鉗(Patch clamp)技術(shù)在大鼠海馬神經(jīng)元上記錄配體門控氯通道瞬時(shí)外向電流，采用非特異性氯通道阻斷劑(NFA)和無GABA的細(xì)胞外液確定該電流成份為瞬時(shí)外向氯電流；通過膜片鉗技術(shù)觀察GABAA受體激動(dòng)劑蠅蕈醇對(duì)于在大鼠海馬神經(jīng)元上記錄瞬時(shí)外向電流的作用；向AD細(xì)胞模型中加入GABAA受體激動(dòng)劑，采用MTT觀察各組細(xì)胞活力。結(jié)果 加入GABAA受體激動(dòng)劑蠅蕈醇后GABA激活氯電流強(qiáng)度增加；加入濃度為1 mmol/L蠅蕈醇的AD模型細(xì)胞
中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志 2017年4期2017-05-10
- 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測化學(xué)損傷致癇大鼠海馬腦片電生理特性
礎(chǔ)研究·全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測化學(xué)損傷致癇大鼠海馬腦片電生理特性徐祖才 張 駿 黃 浩 王 靜1徐忠祥 彭 燕 陳 婭 徐 平(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，貴州 遵義 563003)目的 應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測化學(xué)損傷致癇大鼠海馬腦片神經(jīng)元基本電生理特性。方法 將成年SD大鼠建立氯化鋰-匹羅卡品模型后，急性分離獲得海馬腦片，應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗電流鉗技術(shù)實(shí)時(shí)觀察化學(xué)損傷致癇大鼠海馬腦片CA1區(qū)錐體神經(jīng)元膜電位及其單位時(shí)間內(nèi)動(dòng)作電位頻率的變化情況；通過全細(xì)胞膜片
中國老年學(xué)雜志 2016年21期2016-12-06
- 大蒜素對(duì)H9c2細(xì)胞鈉電流的作用
， 采用全細(xì)胞膜片鉗記錄鈉電流。觀察Gar對(duì)鈉電流和門控機(jī)制的影響。結(jié)果 Gar對(duì)INa的抑制效應(yīng)呈電壓依賴性。-30 mV時(shí)， 200 μmol/L Gar可使INa由（-98.4±5.6）pA/pF降低為（-66.5±5.3）pA/pF （P0.05）。結(jié)論 大蒜素可能通過減少鈉通道激活， 降低鈉電流。【關(guān)鍵詞】 大蒜素；H9c2細(xì)胞；鈉電流；膜片鉗DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.27.192【Abstract】
中國實(shí)用醫(yī)藥 2016年27期2016-11-30
- 綠色熒光蛋白基因與hERG基因G604S突變共表達(dá)功能研究
內(nèi)的表達(dá)定位；膜片鉗實(shí)驗(yàn)記錄hERG電流。 結(jié)果 在轉(zhuǎn)染pcDNA3-WT-hERG或pEGFP-WT-hERG的細(xì)胞中，hERG蛋白表達(dá)于胞質(zhì)與胞膜；在轉(zhuǎn)染pcDNA3-G604S-hERG或pEGFP-G604S-hERG的細(xì)胞中，hERG蛋白僅在胞質(zhì)表達(dá)。HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA3-WT-hERG后，hERG電流的最大尾電流密度為(75.4±2.2)pA/pF，明顯高于轉(zhuǎn)染pEGFP-WT-hERG的最大尾電流密度[(15.1±0.7)pA/p
山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2016年9期2016-10-29
- 鈣激活氯通道密度調(diào)節(jié)Anoctam in 1電流作用的研究
6 h獲得。膜片鉗方法檢測鈣離子激活的Ano1的全細(xì)胞電流。激活電流曲線以指數(shù)曲線擬合。結(jié)果Ano1質(zhì)粒表達(dá)6 h的電流密度顯著低于表達(dá)24 h的電流密度（P＜0.05）。在低CaCCs密度時(shí)，Ano1的激活電流曲線最適于用單指數(shù)擬合，τslow為（292.71±38.11）ms。在高CaCCs密度時(shí)，Ano1的激活電流曲線最適于用兩指數(shù)擬合，τfast為（47.78±4.58）ms；τslow為（385.74± 71.44）ms。高CaCCs密度下的A
中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2016年4期2016-10-11
- M3受體激動(dòng)劑對(duì)急性缺血性心肌的保護(hù)作用*
血環(huán)境，全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄L-型鈣電流(ICa-L)變化；激光掃描共聚焦技術(shù)觀測細(xì)胞內(nèi)鈣變化，探討膽堿對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣及鈣庫的影響。結(jié)果在膜片鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組比較， 缺血組ICa-L電流密度明顯增高，應(yīng)用膽堿后ICa-L下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P[關(guān)鍵詞]心肌缺血；膽堿；L-型鈣電流；膜片鉗；激光掃描共聚焦心臟是人體的重要器官，維持全身血液的供應(yīng)，心肌缺血及梗死都存在局部供血和代謝障礙，缺血時(shí)的細(xì)胞外體內(nèi)微環(huán)境改變主要是酸性代謝產(chǎn)物排出困難，從而造成堆
重慶醫(yī)學(xué) 2016年17期2016-07-15
- 蛇床子素對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞鈉通道的影響
離和處理。應(yīng)用膜片鉗技術(shù)，觀察給予不同濃度蛇床子素(Ost)后鈉離子通道電流特征的變化。結(jié)果Ost(>100 μmol/L)能明顯抑制鈉電流，其作用呈濃度依賴性(500 μmol/L幾乎完全阻斷)和時(shí)間依賴性(10 min左右抑制力達(dá)到最強(qiáng))。100 μmol/L和300 μmol/L Ost使鈉電流I-V曲線明顯上移，峰值鈉電流(-29.8±4.21) pA/pF分別降為(-20.1±3.7) pA/pF和 (-17.7±5.7 ) pA/pF (P關(guān)鍵
實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志 2016年7期2016-05-13
- 膜片鉗技術(shù)簡述
610041)膜片鉗技術(shù)簡述管一世(成都體育學(xué)院 四川 成都 610041)80年代初發(fā)展起來的膜片鉗技術(shù)(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動(dòng)力學(xué)特征及通透性、選擇性膜信息提供了最直接的手段。該技術(shù)的興起與應(yīng)用，使人們不僅對(duì)生物體的電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象更進(jìn)一步的了解，而且對(duì)于疾病和藥物作用的認(rèn)識(shí)也不斷的更新，同時(shí)還形成了許多病因?qū)W與藥理學(xué)方面的新觀點(diǎn)。膜片鉗;細(xì)胞;膜電位;膜片構(gòu)型;通道一、 膜片鉗技術(shù)的基本原理用一個(gè)尖
福建質(zhì)量管理 2016年13期2016-04-17
- 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在神經(jīng)元鈣通道藥理研究中的應(yīng)用
01)?全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在神經(jīng)元鈣通道藥理研究中的應(yīng)用林智穎,張靜,黃天文,陳曉春(福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院，福建省老年醫(yī)學(xué)研究所，福建省神經(jīng)生物學(xué)研究中心，福建 福州350001)全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)是研究離子通道和藥物對(duì)離子通道影響的最重要的技術(shù)之一，但是由于其對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求高，對(duì)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本制備和實(shí)驗(yàn)環(huán)境、實(shí)驗(yàn)用溶液等條件均有嚴(yán)格要求等原因致使其在實(shí)際運(yùn)用中較為困難。本文報(bào)告了運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)進(jìn)行神經(jīng)元鈣通道藥理研究的一些經(jīng)驗(yàn)。1 材料與方法1.1材料1
中國藥理學(xué)通報(bào) 2016年9期2016-01-31
- 丙泊酚對(duì)大鼠S1區(qū)錐體神經(jīng)元電壓門控鈉離子通道及動(dòng)作電位的影響
片，采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)測定電流及電壓。加入不同濃度（10、30、100、300 μmol/L）丙泊酚，記錄各組神經(jīng)元鈉電流（INa），繪制電流電壓（IV）曲線、穩(wěn)態(tài)激活曲線、穩(wěn)態(tài)失活曲線及去失活曲線并計(jì)算相關(guān)參數(shù)。向神經(jīng)元施加幅度50 pA、刺激時(shí)程30 ms的去極化刺激電流，記錄各組神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢?。結(jié)果：丙泊酚呈濃度依賴性抑制大鼠S1區(qū)神經(jīng)元電壓門控性INa，加快鈉通道的失活過程，使穩(wěn)態(tài)失活曲線向超極化方向移動(dòng)，延緩鈉通道失活后的恢復(fù)，但并不影響鈉通道
溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2015年12期2015-10-13
- 大鼠心室肌細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究生實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
大鼠心室肌細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究生實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)范 茁, 吳振強(qiáng) (華南理工大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院,廣東 廣州 510006)面向生物學(xué)科碩士研究生開設(shè)細(xì)胞電生理實(shí)驗(yàn)可彌補(bǔ)高校細(xì)胞電生理實(shí)驗(yàn)教學(xué)領(lǐng)域的空缺，使學(xué)生更好掌握細(xì)胞電生理理論知識(shí)。論文詳細(xì)闡述了依托于膜片鉗實(shí)驗(yàn)技術(shù)、以大鼠心室肌細(xì)胞動(dòng)作電位為主要研究對(duì)象的細(xì)胞電生理實(shí)驗(yàn)課程的具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，相關(guān)的實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。記錄大鼠心室肌細(xì)胞的動(dòng)作電位、三種主要成分(Na+、K+和Ca2+)離子電流的分離可以使學(xué)生
實(shí)驗(yàn)室研究與探索 2015年2期2015-02-27
- 激活視網(wǎng)膜水平細(xì)胞NMDA受體抑制內(nèi)向整流鉀通道活動(dòng)
膜水平細(xì)胞進(jìn)行膜片鉗全細(xì)胞記錄，在給藥激活NMDA受體前后，分別記錄內(nèi)向整流鉀通道的電流大?。涣硗庠跓o鈣及螯合胞內(nèi)鈣條件下，觀察NMDA受體對(duì)內(nèi)向整流鉀通道的作用。結(jié)果 激活NMDA受體后，內(nèi)向整流鉀通道電流減小，灌流洗脫后電流恢復(fù)；在無鈣和螯合胞內(nèi)鈣的條件下，激活NMDA受體不能改變內(nèi)向整流鉀通道活動(dòng)。結(jié)論 激活視網(wǎng)膜水平細(xì)胞NMDA受體可以通過胞內(nèi)鈣信號(hào)抑制內(nèi)向整流鉀通道電流。關(guān)鍵詞：視網(wǎng)膜；內(nèi)向整流鉀通道；鈣，胞內(nèi)鈣庫；NMDA受體；膜片鉗網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)
中國藥理學(xué)通報(bào) 2015年10期2015-02-26
- 楊梅黃酮對(duì)炎性痛大鼠的外周鎮(zhèn)痛作用
；背根神經(jīng)節(jié)；膜片鉗網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015－7－22 10：42 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20150727．0901．019．html疼痛是身體和內(nèi)臟受到損害的警報(bào)信號(hào)，是許多疾病的共同癥狀，不僅給病人帶來痛苦，而且嚴(yán)重的疼痛可以產(chǎn)生疼痛性休克，威脅病人生命。因此，開發(fā)高效、低毒的鎮(zhèn)痛藥一直受到國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。楊梅黃酮（myricetin）是從常綠灌木楊梅的葉子中提取的黃酮類化合
中國藥理學(xué)通報(bào) 2015年8期2015-02-26
- 血管內(nèi)皮TRPP2/TRPV4通道復(fù)合體參與調(diào)節(jié)鹽敏感性高血壓大鼠血管內(nèi)皮功能*
利用血管開放式膜片鉗，觀察高鹽飲食是否影響MAECs上TRPP2/TRPV4活性;利用分子生物學(xué)和膜片鉗體外觀察高鹽和醛固酮對(duì)該復(fù)合體的影響。結(jié)果: TRPP2/TRPV4在MAECs上天然定位，并介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞NO產(chǎn)生;在SS鼠中，高鹽導(dǎo)致該通道活性和表達(dá)降低;體外實(shí)驗(yàn)證明高鹽和醛固酮均抑制TRPP2/TRPV4活性。結(jié)論:在鹽敏感高血壓發(fā)展過程中，MAECs上TRPP2/TRPV4通道活性和表達(dá)下降，其機(jī)制可能是由高鹽和醛固酮協(xié)同介導(dǎo)。國家自然科學(xué)基金資
中國病理生理雜志 2015年10期2015-01-26
- 穿孔膜片鉗記錄腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞大電導(dǎo)鈣激活鉀通道方法初探
們用常規(guī)全細(xì)胞膜片鉗記錄BKCa和由其開放所介導(dǎo)產(chǎn)生的自發(fā)性瞬時(shí)外向電流（spontaneous transient outward currents，STOCs）時(shí)，發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的推移，BKCa宏觀電流的幅度越來越小且STOCs 很難記錄到，或在很短時(shí)間內(nèi)STOCs就完全自行消失，這可能是電極液和細(xì)胞內(nèi)液相互滲透，造成胞質(zhì)內(nèi)容物被稀釋，特別是維持離子通道功能和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的物質(zhì)被吸到電極內(nèi)，改變了細(xì)胞內(nèi)鈣緩沖能力［1-2］。這極大地局限了我們對(duì)細(xì)胞內(nèi)局部自發(fā)
西南軍醫(yī) 2014年3期2014-11-26
- 研究生細(xì)胞電生理實(shí)驗(yàn)課設(shè)計(jì)與實(shí)踐
由于其所依托的膜片鉗實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)價(jià)格相對(duì)昂貴，操作精細(xì)、復(fù)雜，主要服務(wù)于科研領(lǐng)域，一直是高校生物學(xué)科實(shí)驗(yàn)教學(xué)領(lǐng)域的空缺。本文將根據(jù)華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院現(xiàn)有的教學(xué)和科研條件，闡述利用膜片鉗技術(shù)為生物學(xué)科研究生開設(shè)細(xì)胞電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課程的必要性和可行性，并對(duì)課程的內(nèi)容、設(shè)置及考核方式進(jìn)行詳細(xì)的探討。1 為生物學(xué)科研究生開設(shè)細(xì)胞電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課程的必要性細(xì)胞電生理是組織及機(jī)體電生理現(xiàn)象的基礎(chǔ)，因?yàn)殡y以檢測使之變得更抽象、更難理解。任何一個(gè)學(xué)科，尤其是生物學(xué)科，
實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理 2014年12期2014-04-10
- 小鼠胰腺腺泡細(xì)胞鈣振蕩的激光共聚焦成像研究方法*
要是利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，記錄在細(xì)胞外液中加入興奮劑（如ACh）后胞漿Ca2＋濃度變化所激活的Cl-通道電流，通過Cl-通道電流間接反映 PACCOs的情況［4］。直接法：利用鈣熒光指示劑與胞內(nèi)Ca2＋結(jié)合后在相應(yīng)波長的激發(fā)光作用下可發(fā)出特定波長的熒光的特點(diǎn)，通過熒光顯微鏡、激光共聚焦掃描顯微鏡（laser scanning confocalmicroscope，LSCM）或雙光子顯微鏡等儀器檢測興奮劑作用后引起的鈣熒光變化，直接研究 PACCOs［1，3
中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 2014年4期2014-01-23
- Amphotericin B在全細(xì)胞穿孔膜片鉗技術(shù)中的應(yīng)用研究*
，付崇羅常規(guī)的膜片鉗技術(shù)采用負(fù)壓抽吸或電擊破膜形成全細(xì)胞模式。在此過程中，電極內(nèi)液和細(xì)胞內(nèi)液之間的擴(kuò)散交換常使一些受胞內(nèi)物質(zhì)調(diào)控的通道電流出現(xiàn)時(shí)間依賴性的衰減。1988年Horn等［1］對(duì)傳統(tǒng)全細(xì)胞記錄進(jìn)行了改進(jìn)，建立了穿孔膜片鉗技術(shù)（perforated-patch clamp）：即利用某些抗生素具有在生物膜上形成通透性孔道的性質(zhì)，將這類抗生素充灌在電極液中，在高阻封接形成之后自發(fā)性形成的全細(xì)胞模式。海德氏突觸（calyx）位于哺乳動(dòng)物聽覺腦干斜方體中核
中國應(yīng)用生理學(xué)雜志 2014年1期2014-01-22
- 大鼠海馬神經(jīng)元癲癇樣放電模型的構(gòu)建
h，應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄海馬神經(jīng)元的放電情況。結(jié)果在培養(yǎng)第12天時(shí)，神經(jīng)元突起間彼此接觸形成神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。在“無鎂細(xì)胞外液”處理3 h后神經(jīng)元產(chǎn)生穩(wěn)定的放電，恢復(fù)正常細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h，神經(jīng)元仍可檢測到自發(fā)的“癲癇樣放電”。結(jié)論體外培養(yǎng)第12天海馬神經(jīng)元，在“無鎂細(xì)胞外液”處理后可形成穩(wěn)定的自發(fā)性癲癇樣放電，為今后在細(xì)胞分子水平研究癲癇發(fā)病機(jī)制提供了一種理想模型。海馬;神經(jīng)元;膜片鉗;癲癇樣放電;動(dòng)作電位;原代培養(yǎng)藥物難治性癲癇是神經(jīng)科常見病之一，其發(fā)
河北醫(yī)藥 2014年14期2014-01-19
- 探索應(yīng)用于膜片鉗研究的腦片制備方法
13)有關(guān)腦片膜片鉗技術(shù)最早可追溯至1985年，美國的Gray和Johnston采用酶解撕裂法對(duì)豚鼠海馬腦片GABA受體通道進(jìn)行了研究。而將膜片鉗技術(shù)成熟地應(yīng)用于離體腦片神經(jīng)元?jiǎng)t是1989年，德國馬普研究所Edwards、Sakmann和日本京都大學(xué)Takahashi首次將微分干涉相差技術(shù)應(yīng)用到膜片鉗技術(shù)領(lǐng)域，并對(duì)大鼠(海馬，視皮層，嗅球，小腦，額葉皮層和脊髓等)、小鼠(海馬)、貓(視皮層)神經(jīng)元離子通道特點(diǎn)進(jìn)行了廣泛研究。近年來隨著膜片鉗技術(shù)的日益成熟，
吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào) 2013年5期2013-10-10
- 大鼠心室肌細(xì)胞單通道鈣電流的記錄及其電生理學(xué)特性分析
域的研究熱點(diǎn)。膜片鉗技術(shù)是研究離子通道的主要技術(shù)，共有4種基本記錄模式。由于L-型鈣通道電導(dǎo)小，大多實(shí)驗(yàn)室都采用全細(xì)胞記錄模式研究整個(gè)細(xì)胞中L-型鈣通道的作用，但是單通道記錄模式可以使我們了解到L-型鈣通道的門控機(jī)制、通道性質(zhì)與結(jié)構(gòu)關(guān)系、細(xì)胞內(nèi)通道信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程等，其中細(xì)胞貼附式記錄模式可用于檢測離子通道的特性，內(nèi)膜外記錄模式可以便于更換細(xì)胞內(nèi)液，適于研究離子通道的細(xì)胞內(nèi)成分的效應(yīng)［6］。所以確立穩(wěn)定的心室肌細(xì)胞的膜片鉗單通道的記錄模式尤為重要。本研究在以
中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2013年3期2013-09-07
- 大鼠心室肌細(xì)胞的分離及其單通道鈣電流的記錄
室肌細(xì)胞，應(yīng)用膜片鉗制技術(shù)單通道模式記錄大鼠心室肌細(xì)胞的鈣電流，并進(jìn)行膜片鉗電生理學(xué)研究.心室肌細(xì)胞；膜片鉗；單通道；鈣電流記錄細(xì)胞的電活動(dòng)是生命活動(dòng)的基礎(chǔ)，而這些電活動(dòng)則是通過細(xì)胞膜離子通道而實(shí)現(xiàn)的[1]，離子通道的基本功能是通過維持離子的跨膜運(yùn)動(dòng)，產(chǎn)生生物電現(xiàn)象而完成的.因此研究膜離子通道的通透機(jī)制及各種離子通透性的變化對(duì)闡明細(xì)胞生物電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象的機(jī)制具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值[2].德國生理學(xué)家Neher和Sakmann（1976）[3]首
- 肺癌干細(xì)胞中存在容積激活氯通道*
上機(jī)檢測。2 膜片鉗記錄電流采用全細(xì)胞膜片鉗記錄方法，應(yīng)用膜片鉗放大器(HEKA，EPC－9，German)和 PULSE軟件(HEKA，Lambrecht，German)在電壓鉗制狀態(tài)下記錄CSCs上的容積激活氯電流。吸取細(xì)胞液少許，加入1 mL細(xì)胞池內(nèi)，該細(xì)胞不易貼壁，故待細(xì)胞沉底行封接后，再以細(xì)胞外液灌流。玻璃電極(外徑1．2 mm)經(jīng)微電極拉制儀分二步拉制而成，充灌電極內(nèi)液進(jìn)入細(xì)胞外液后阻抗為2．0～3．0 MΩ。電極接觸細(xì)胞前補(bǔ)償液接電位，輕施負(fù)
中國病理生理雜志 2012年5期2012-11-13
- 膜片鉗技術(shù)在高血壓研究中的應(yīng)用1）
楊 沙，王 舒膜片鉗技術(shù)（patch－clamp technique）是1976年由Nehetr和Sakroann在電壓鉗的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的一種記錄細(xì)胞膜離子通道電生理活動(dòng)的技術(shù)。通過微電機(jī)與細(xì)胞膜之間形成緊密接觸，采用電壓鉗或電流鉗技術(shù)對(duì)生物膜上離子通道的電活動(dòng)進(jìn)行記錄。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起，已成為現(xiàn)代細(xì)胞電生理研究的常規(guī)方法，使人們對(duì)于疾病和藥物作用的認(rèn)識(shí)不斷更新。膜片鉗技術(shù)用于心血管領(lǐng)域的研究也越來越多。本文擬對(duì)
中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志 2012年1期2012-08-15
- 慢性缺氧時(shí)足細(xì)胞上調(diào)β4-亞基而抑制BKCa通道的活性
清楚。本文通過膜片鉗技術(shù)檢測到足細(xì)胞暴露于2%的O224 h后，可以引起明顯的BKCa通道電流的降低。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，慢性缺氧提高了BKCa通道β4-亞基mRNA和蛋白的表達(dá)，但是未提高與孔道形成有關(guān)的α-亞基或β3-亞基mRNA和蛋白的表達(dá)。同時(shí)，慢性缺氧使通道激活移向去極化方向，并降低其激活動(dòng)力學(xué)，產(chǎn)生類似于β4-亞基的特性。本文結(jié)果表明BKCa通道通過上調(diào)β4-亞基的表達(dá)量，參與足細(xì)胞對(duì)慢性缺氧的應(yīng)答反應(yīng)。這些發(fā)現(xiàn)為研究足細(xì)胞對(duì)缺氧的細(xì)胞學(xué)反應(yīng)機(jī)
天津醫(yī)藥 2012年8期2012-08-15
- 新生大鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)及膜片鉗全細(xì)胞記錄＊
速發(fā)展，特別是膜片鉗技術(shù)在神經(jīng)學(xué)科的應(yīng)用以來，對(duì)原代培養(yǎng)的神經(jīng)元狀態(tài)要求越來越高，本實(shí)驗(yàn)在參照文獻(xiàn)［1－4］的培養(yǎng)方法基礎(chǔ)上稍作改進(jìn)，培養(yǎng)出細(xì)胞膜上各離子通道功能良好的且適應(yīng)于膜片鉗全細(xì)胞記錄的海馬神經(jīng)元，現(xiàn)報(bào)道如下。1 材料與方法1.1材料1.1.1動(dòng)物與主要實(shí)驗(yàn)儀器 1d內(nèi)新生Wistar大鼠購自重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；SW－CJ－2FD型超凈工作臺(tái)購自蘇凈集團(tuán)安泰公司，細(xì)胞培養(yǎng)箱購自美國Thenno Fonna，細(xì)胞培養(yǎng)板購自美國Costar，TE
重慶醫(yī)學(xué) 2012年31期2012-06-29
- 豚鼠心肌細(xì)胞中Kir2.1對(duì)內(nèi)向整流鉀電流組成的貢獻(xiàn)
1.3 儀器 膜片鉗放大器Axon 200B為美國Axon公司產(chǎn)品;電極拉制器和三位操縱器均為Sutter公司產(chǎn)品;倒置顯微鏡TE2000-S為Nikon公司產(chǎn)品。1.4 方法 豚鼠心肌細(xì)胞的急性分離:將豚鼠麻醉后快速開胸取出心臟，至于冰無鈣臺(tái)式液中進(jìn)行主動(dòng)脈插管，連于Langendorff灌流裝置上，進(jìn)行恒壓恒溫逆行灌流。灌流液溫度37℃，流速7 ml/min，用前用100%O2飽和。先用無鈣臺(tái)氏液灌流5 min，沖洗心臟中殘留的血液，然后灌以含12 m
河北醫(yī)藥 2011年13期2011-07-16
- 穿孔膜片鉗方法記錄L型鈣通道及脫氫紫堇堿對(duì)其影響的研究
)在采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)對(duì)L型鈣通道電流記錄時(shí)，L型鈣通道電流會(huì)發(fā)生隨時(shí)間的經(jīng)過而逐漸減小的“rundown”現(xiàn)象，對(duì)觀察藥物對(duì)L型鈣通道效應(yīng)造成很大影響。而穿孔的膜片鉗方法的使用減少了“rundown”現(xiàn)象的發(fā)生。此文比較了全細(xì)胞膜片鉗和穿孔膜片鉗方法記錄L型鈣通道電流隨時(shí)間經(jīng)過的變化差異，并觀察了脫氫紫堇堿(dehydrocorydaline，DHC)對(duì)L型鈣通道的影響。1 材料與方法1.1心室肌細(xì)胞的分離采用急性酶分法獲得單個(gè)心室肌細(xì)胞［1］。1.2
中國藥理學(xué)通報(bào) 2011年8期2011-05-31
- Ouabain對(duì)髓袢升支粗段管周膜50pS鉀通道活性的影響
實(shí)驗(yàn)利用單通道膜片鉗技術(shù)，觀察鈉－鉀泵抑制劑ouabain對(duì)髓袢升支粗段管周膜50pS鉀通道活動(dòng)的影響，探討50pS鉀通道是否在功能上與鈉－鉀泵偶聯(lián)。1 材料與方法1.1 腎小管的分離 SD大鼠，體質(zhì)量70～120 g，♀♂不拘。由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。大鼠經(jīng)10%的水合氯醛(400 mg·kg－1)腹腔麻醉后，立即打開腹腔取出腎臟，去除包膜，從腎臟的中間部分用刀片切出厚約0.5～1 mm的冠狀切片，浸入濃度為1 g·L－1膠原酶溶液，放進(jìn)37℃恒溫
中國藥理學(xué)通報(bào) 2011年1期2011-02-10
- 急性分離大鼠皮層神經(jīng)元的方法與體會(huì)
動(dòng)的主要方法是膜片鉗技術(shù)，而獲得活力好的神經(jīng)元便成為應(yīng)用膜片鉗技術(shù)的重要先決條件。許多離子通道研究是需要單個(gè)分散的神經(jīng)元，人工培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞易受培養(yǎng)環(huán)境的影響，自身特性改變較大，而急性分離的細(xì)胞卻能相對(duì)保持完好的生理特性[1-3]。筆者結(jié)合文獻(xiàn)并加以改進(jìn)，摸索出一種簡便易行的適用于全細(xì)胞膜片鉗研究的大鼠頂葉皮層神經(jīng)元急性分離方法，現(xiàn)報(bào)道如下：1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，10～16 d，雌雄不限，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院動(dòng)物研究中心提供。
中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2011年18期2011-01-30
- ＊ 基于小波包分解的細(xì)胞膜離子電流重構(gòu)
)級(jí)離子電流,膜片鉗技術(shù)可以記錄到離子電流信號(hào).在膜片鉗測量系統(tǒng)中,通常采用閾值檢測方法消除噪聲,由于該方法不僅需要人為設(shè)定閾值,并且在信噪比較低(SNR＜5.0)時(shí),電流恢復(fù)誤差不能滿足膜片鉗測量系統(tǒng)的精度要求.基于隱馬爾可夫模型(HMM)的離子單通道電流恢復(fù)是在強(qiáng)噪聲背景下,從膜片鉗記錄中得到理想化通道電流的一種有效方法[1].然而,HMM算法中的狀態(tài)重估公式只有在確知通道狀態(tài)數(shù)目的條件下才能應(yīng)用,在強(qiáng)背景噪聲下,這一先驗(yàn)知識(shí)往往很難獲得,并且 HMM
- ATP對(duì)髓袢升支粗段管周膜50pS鉀通道的調(diào)節(jié)
實(shí)驗(yàn)利用單通道膜片鉗技術(shù)，觀察ATP對(duì)髓袢升支粗段管周膜50 pS鉀通道活動(dòng)的影響，進(jìn)一步闡明髓袢升支粗段對(duì)NaCl的重吸收機(jī)制，為開發(fā)新的高效、安全利尿藥提供理論依據(jù)。1 材料與方法1.1 腎小管的分離 健康SD(Sprague-Dawley)大鼠，體質(zhì)量70～100 g，♀♂不限。由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。大鼠在頸關(guān)節(jié)脫位后，立即打開腹腔取出腎臟，去除包膜，從腎臟的中間部分用刀片切出厚0.5～1 mm的冠狀切片，浸入濃度為1 g·L
中國藥理學(xué)通報(bào) 2010年10期2010-06-09
- 豚鼠心室肌細(xì)胞的分離及其基本電生理特性的觀察
代［1］，隨著膜片鉗制技術(shù)的發(fā)展及其在心肌細(xì)胞上的應(yīng)用，特別是以鈣離子內(nèi)流為主的慢內(nèi)向電流的發(fā)現(xiàn)，帶動(dòng)了心肌電生理學(xué)的進(jìn)一步深入發(fā)展。心肌細(xì)胞動(dòng)作電位的研究是心肌電生理學(xué)研究必要的第一步。1964年Trautwein第一次用雙電極電壓鉗制技術(shù)在犬的Purkinje纖維上記錄出了心肌細(xì)胞的離子流，Hamill等［2］改進(jìn)了Neher和Sakmann的膜片鉗技術(shù)［3］，使其能夠適用于心肌細(xì)胞電流的記錄，20世紀(jì)80年代研究者發(fā)現(xiàn)并闡明了心肌細(xì)胞各種主要離子流的
中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2010年4期2010-05-25
- 三種實(shí)用而簡單的急性酶分離動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的方法＊
研究,常應(yīng)用到膜片鉗技術(shù)、共聚焦顯微技術(shù)、胞內(nèi)物質(zhì)的測定、流式細(xì)胞儀技術(shù)等研究領(lǐng)域。這些研究對(duì)單個(gè)細(xì)胞的要求都非常高,需要細(xì)胞獲取率高、活性好、膜光滑、膜的折光性好。而影響急性酶分離法的關(guān)鍵因素在于控制酶的濃度、消化時(shí)間、消化溫度等。那怎么樣才能獲取單個(gè)的高質(zhì)量的動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞呢?現(xiàn)就筆者從事多年的動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的研究工作的經(jīng)驗(yàn),以單個(gè)人體腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞應(yīng)用于膜片鉗技術(shù)中為例,介紹幾種實(shí)用的急性酶分離動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的方法,以供大家參考。1 材料與方法
四川生理科學(xué)雜志 2010年4期2010-05-07
- 慢性房顫患者心肌瞬時(shí)外向鉀通道電流密度變化
耳。采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究心房肌瞬時(shí)外向鉀通道電流密度的變化。結(jié)果 慢性心房顫動(dòng)患者心房肌瞬時(shí)外向鉀通道電流密度降低，在測試電位-20 mV以上各電位水平時(shí)均有顯著性差異(n=16，P【關(guān)鍵詞】瞬時(shí)外向鉀通道；膜片鉗；人體心房肌細(xì)胞；心房顫動(dòng)心房顫動(dòng)是一種常見的慢性心律失常，60歲以上人群中的發(fā)病率為2%~4%，隨著人口的老齡化，心房顫動(dòng)變得更加常見[1]。心房有效不應(yīng)期的縮短[2-4]和折返環(huán)的存在[5-7]在心房顫動(dòng)中起重要作用。瞬時(shí)外向鉀通道電流(
中國實(shí)用醫(yī)藥 2009年3期2009-02-19