朱肖磊

摘 要：目的：建立一種液相色譜法測定食品中合成著色劑的方法。方法：用乙醇氨水溶液提取食品中的合成著色劑，經(jīng)固相萃取柱凈化后，用液相色譜儀（配二極管陣列檢測器）測定，外標(biāo)法定量。結(jié)果：11種合成著色劑在0.2～10.0 μg·mL-1線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 4～1.000 0，加標(biāo)回收率為94.2%～109.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.55%～5.52%。檸檬黃、喹啉黃、日落黃、胭脂紅、新紅和赤蘚紅的檢出限均為0.5 mg·kg-1，定量限均為1.5 mg·kg-1；莧菜紅、誘惑紅、亮藍(lán)、酸性紅和靛藍(lán)的檢出限均為0.3 mg·kg-1，定量限均為1.0 mg·kg-1。結(jié)論：該方法的重復(fù)性好、靈敏度高、實(shí)用性強(qiáng)，可以同時測定食品中多種合成著色劑的含量。

關(guān)鍵詞：合成著色劑；液相色譜法；固相萃取

Determination of Synthetic Colorants in Food by Liquid Chromatography

ZHU Xiaolei

（Guangdong Dongguan Quality Supervision & Testing Center， Dongguan 523000， China）

Abstract： Objective： To establish a method for the determination of synthetic colorants in food by liquid chromatography. Method： The synthetic colorants in food were extracted with ethanol ammonia solution， purified by solid phase extraction column， determined by liquid chromatography （ with diode array detector ）， and quantified by external standard method. Result： The linear range of 11 synthetic colorants was 0.2～10.0 μg·mL-1， the linear correlation coefficient was 0.999 4～1.000 0， the recovery rate was 94.2%～109.6%， and the relative standard deviation was 0.55%～5.52%. The detection limits of tartrazine， quinoline yellow， sunset yellow， carmine， new red and erythrosine were 0.5 mg·kg-1， and the limits of quantification were 1.5 mg·kg-1. The limits of detection of amaranth， allura red， brilliant blue， acid red and indigo were 0.3 mg·kg-1， and the limits of quantitation were

1.0 mg·kg-1. Conclusion： The method has good repeatability， high sensitivity and strong practicability， and can simultaneously determine the content of various synthetic colorants in food.

Keywords： synthetic colorants; liquid chromatography; solid-phase extraction

著色劑在食品加工過程中可以改善食品的口感和外觀，但過量使用會對人們的健康造成不良影響。本文用乙醇氨水溶液提取11種食品中合成著色劑，經(jīng)固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜儀測定（配有二極管陣列檢測器），使用外標(biāo)法定量[1-2]。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀（配有二極管陣列檢測器），安捷倫；天平、固相萃取裝置、氮?dú)鉂饪s裝置、天平、pH計。

1.2 材料與試劑

檸檬黃、喹啉黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、赤蘚紅、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，

1 000 μg·mL-1；靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，1 000 μg·mL-1；甲醇，色譜純；石油醚，沸程30～60 ℃；無水乙醇；氨水，含量20%～25%；乙酸銨，色譜純；甲酸，含量98%。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 溶液配制

氨水乙醇溶液：700 mL乙醇、4 mL氨水，溶于1 L水。5%甲醇水溶液：一定量甲醇用水稀釋定容至1 L。

1.3.2 樣品處理

稱取2 g充分混勻的液體試樣于50 mL離心管中，加入50 mL氨水乙醇溶液，渦旋1 min，5 000 r·min-1離心5 min，取上清液10 mL，50 ℃氮吹至3 mL左右，分3次加入10 mL的5%甲醇水溶液，得到待凈化液。

1.3.3 試樣凈化

活化固相萃取柱的活化方法用甲醇和水各

6 mL，依次活化，將柱體保持濕潤。立即將待凈化液以2～3 s/滴的流速加載到固相萃取柱上。用

6 mL 2%甲酸水溶液和甲醇淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，真空抽2 min至柱體近千。用2%氨化甲醇溶液6 mL洗脫，分兩次加入，每次3mL，流速低于

2～3 s/滴，收集洗脫液，于50 ℃氮?dú)鉂饪s至近千，準(zhǔn)確加入pH=9.0的乙酸銨緩沖溶液2 mL溶解，溶液用針筒過濾器，孔徑0.45 μm的濾膜過濾，將最初的2～5滴濾液舍棄，待測液為續(xù)濾液。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的配制

靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.0 mg·mL-1）：準(zhǔn)確移取一定量靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，得到濃度為1.0 mg·mL-1的靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲備液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（50.0 μg·mL-1）：吸取檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、酸性紅、喹啉黃和赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液

1 000 μg·mL-1以及靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.0 mg·mL-1）各5.00 mL于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得到混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（各合成著色劑濃度均為

50.0 μg·mL-1），現(xiàn)用現(xiàn)配。

標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：精密移取一定量混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（50.0 μg·mL-1），配制成濃度分別為0.2 μg·mL-1、0.5 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1和10.0 μg·mL-1的工作液。以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.5 儀器條件

色譜柱：BetasilTM C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），

設(shè)置柱溫箱溫度為30 ℃，進(jìn)樣體積10 μL，二極管陣列檢測器波長范圍（400～800 nm），其中檸檬黃、喹啉黃檢測波長為415 nm，新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅和赤蘚紅檢測波長為520 nm，靛藍(lán)、亮藍(lán)檢測波長為610 nm。洗脫條件見表1。

1.3.6 樣品測試

將試樣注入液相色譜中，按上述儀器條件檢測，待測液中各物質(zhì)濃度的計算公式為

（1）

式中：X為試樣中合成著色劑的含量，g·kg-1；c為由曲線計算得到的待測液中合成著色劑濃度，μg·mL-1；V1為凈化洗脫后的樣品最終定容體積，mL；V2為提取液體積，mL；V3為用于凈化分取的樣品提取液的體積，mL；m為試樣的取樣量，g；1 000為換算系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

11種著色劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)見表2。

2.2 檢出限和定量限

稱取空白樣品2 g，加入一定量混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，得到濃度分別為0.3 mg·kg-1和1.0 mg·kg-1的莧菜紅、誘惑紅、亮藍(lán)1、亮藍(lán)2、酸性紅、靛藍(lán)，濃度分別為0.5 mg·kg-1和1.5 mg·kg-1的檸檬黃、新紅、胭脂紅、日落黃、喹啉黃1、喹啉黃2、喹啉黃3、喹啉黃4、赤蘚紅[3-4]。

按照前處理過程制備樣液，上機(jī)進(jìn)行實(shí)測，分別驗(yàn)證不同著色劑的信噪比是否滿足方法要求，驗(yàn)證結(jié)果見表3、表4。由表3、表4可知，檸檬黃、新紅、胭脂紅、日落黃、喹啉黃1、喹啉黃2、喹啉黃3、喹啉黃4、赤蘚紅的檢出限均為0.5 mg·kg-1，定量限均為1.5 mg·kg-1；莧菜紅、誘惑紅、亮藍(lán)1、亮藍(lán)2、酸性紅、靛藍(lán)的檢出限均為0.3 mg·kg-1，定量限均為1.0 mg·kg-1。

2.3 加標(biāo)回收率及精密度

為了評價方法的正確度和重復(fù)性，在空白樣品中進(jìn)行3個濃度水平（2.5 mg·kg-1、5.0 mg·kg-1、

50.0 mg·kg-1）的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個濃度水平進(jìn)行6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行前處理和測定，得出加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差[5]（見表5）。由表5可知，11種著色劑的回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均滿足方法分析要求。

2.4 實(shí)際樣品分析

以配制酒作為實(shí)際樣品進(jìn)行檢測，實(shí)際樣品中11種著色劑均未檢出。

3 結(jié)論

本文建立了一種使用液相色譜同時測定食品中的11種合成著色劑含量的方法。該方法簡化了樣品預(yù)處理步驟，重復(fù)性好、檢出限低，加標(biāo)回收率也滿足分析方法的測定要求，證明本方法可用于食品中合成著色劑的檢測。

參考文獻(xiàn)

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