陳一鑫+馮清勝+王曉中+李蘭杰+李緒文+金永日

摘 要 采用固載1甲基3己基咪唑六氟磷酸（[C6MIM][PF6]）的硅膠作為基質(zhì)固相分散劑， 與超聲霧化提取及C18固相萃取相結(jié)合，對(duì)人參提取物進(jìn)行提取和凈化； 采用高效液相色譜法，建立了人參中5種三嗪類除草劑的檢測(cè)方法。樣品前處理的最優(yōu)條件為：300 mg人參粉末與150 mg硅膠（[C6MIM][PF6]含量2.0 mmol/g）研磨5 min，以20.0 mL去離子水（pH 7，含1.0% NaCl）超聲霧化提取10 min，再以 5.0 mL 乙腈洗脫萃取小柱（300 mg C18）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，目標(biāo)物的檢出限為0.020～0.035 g/g，線性相關(guān)系數(shù)r2≥0.9992， 實(shí)際樣品加標(biāo)回收率為78.2%～95.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.5%～6.0%。本方法快速高效、凈化效果好、提取率高，為中藥中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)提供了新的樣品前處理方法。

關(guān)鍵詞 人參； 三嗪除草劑； 離子液體； 基質(zhì)固相分散； 超聲霧化； 固相萃取

20160124收稿；20160406接受

Email： jinyr@jlu.edu.cn

1 引 言

超聲霧化提取（UANE）是基于超聲輔助提取的一種新型提取方法，除具有超聲輔助提取法所具有的空化效應(yīng)、機(jī)械效應(yīng)和熱效應(yīng)外，還具有噴泉效應(yīng)，可利用產(chǎn)生的氣溶膠和噴泉加速目標(biāo)分析物的傳質(zhì)，便于與其它技術(shù)聯(lián)用[1]，富集與凈化可同時(shí)完成。目前，超聲霧化提取技術(shù)主要應(yīng)用于植物成分提取[2～8] 和農(nóng)藥殘留物分析[9]等； 但存在霧化功率較小以及氣溶膠分布不均勻等問題，穩(wěn)定性略差且氣溶膠的利用率較低，因此難以在農(nóng)藥殘留分析中廣泛應(yīng)用。

三嗪類除草劑應(yīng)用較廣，在土壤和水體中殘留時(shí)間較長(zhǎng)，因此會(huì)污染人參種植地， 使人參帶有三嗪除草劑。目前，針對(duì)三嗪類除草劑的檢測(cè)方法比較成熟[10～13]，相關(guān)的樣品前處理方法已有大量報(bào)道[14～16]。但是因?yàn)槿藚⒅谐煞謴?fù)雜，采用高效液相分析三嗪除草劑時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)與人參成分的吸收波長(zhǎng)比較相近， 所以需要高效的前處理方法，以減少人參成分的干擾。

離子液體固載基質(zhì)固相分散（ILMSPD）[17]是基于基質(zhì)固相分散（MSPD）[18，19]發(fā)展起來的一種新的樣品處理技術(shù)，具有提取率高、有機(jī)溶劑用量少的特點(diǎn)，但是存在操作過程繁瑣、洗脫溶劑難于濃縮與定容等問題。為提高UANE的穩(wěn)定性和樣品凈化效果，簡(jiǎn)化ILMSPD操作過程，縮短提取時(shí)間，同時(shí)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的提取、富集與凈化，本實(shí)驗(yàn)采用固載離子液體的基質(zhì)固相分散與超聲霧化提取以及固相萃取相結(jié)合的方法提取人參中常用5種三嗪類除草劑，并利用高效液相色譜法測(cè)定其含量，建立了人參中三嗪類除草劑殘留量的快速、準(zhǔn)確、靈敏的分析方法。本方法可作為一種新的農(nóng)藥殘留樣品前處理方法，用于中藥中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

Aglient 1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），配Aglient 1200工作站、紫外檢測(cè)器（VWD）。超聲霧化提取裝置（圖1）由超聲霧化加濕器（北京亞都科技有限公司）改造而成； 超聲功率最大為35 W，頻率為1.7 MHz； 超聲霧化提取瓶?jī)?nèi)徑6 cm，底端開口用PVC薄膜密封，頂端開口用于填加樣品、提取液及安裝固相萃取裝置。

莠滅凈（Ametryn）、阿特拉津（Atrazine）、敵草凈（Desmetryn）、撲滅津（Propazine）和西瑪津（Simazine）5種三嗪類除草劑標(biāo)準(zhǔn)品（純度>99%，Dr. Ehrenshtofer公司）； 色譜級(jí)甲醇和乙腈（Sigmaalrich公司）； C18（200～300目，綠百草科技發(fā)展有限公司）； 硅膠（200～300目，青島海洋化工廠）； 中性氧化鋁（200～300目）和硅藻土（200～300目， 上海國藥集團(tuán)）； 固相萃取小柱及篩板（天津博納艾杰爾科技有限公司）。 3種離子液體： 1丁基3甲基咪唑六氟磷酸鹽{[C4MIM][PF6]}、1甲基3己基咪唑六氟磷酸鹽{[C6MIM][PF6]}、1甲基3辛基咪唑六氟磷酸鹽{[C8MIM][PF6]}（純度均大于98.0%，上海成捷化學(xué)有限公司）。其它試劑均購自北京化學(xué)試劑廠。

2.2 儀器條件

HPLC色譜分離條件： Aglient Zorbax SBC18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫30℃；流動(dòng)相為乙腈（A）水（B）；流速0.8 mL/min；梯度洗脫：0～8 min，35%～50% A；8～15 min，50% A；15～20 min，50%～55% A；檢測(cè)波長(zhǎng)228 nm；進(jìn)樣量20 μL。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法

將300 mg 人參粉末、200 μL去離子水和150 mg表面固載有[C6MIM][PF6]的硅膠一同研磨5 min，混合物轉(zhuǎn)移至超聲霧化提取瓶中，加入20.0 mL去離子水作為提取劑。將填裝有300 mg已活化的C18固定相的固相萃取小柱安裝到提取瓶上，連接真空泵。開啟真空泵，打開提取器開關(guān)，調(diào)節(jié)功率至35 W，提取10 min； 取下固相萃取小柱，加入10 mL去離子水沖洗，以真空泵抽干，用6.0 mL乙腈洗脫，收集洗脫液，40℃減壓蒸干； 加入200 μL甲醇復(fù)溶，過0.22 μm濾膜，進(jìn)樣高效液相色譜儀分析。

2.4 超聲霧化固相萃?。║ANESPE）

將300 mg加標(biāo)樣品粉末和20.0 mL去離子水加入超聲霧化提取瓶中，后續(xù)操作過程同2.3節(jié)，僅提取時(shí)間調(diào)整為15 min。

2.5 硅膠基質(zhì)固相分散超聲霧化固相提?。⊿GMSPDUANESPE）

將300 mg 加標(biāo)樣品粉末、200 μL去離子水和150 mg硅膠研磨5 min，混合物轉(zhuǎn)移至超聲霧化提取瓶中，后續(xù)操作過程同2.3節(jié)。

2.6 基質(zhì)固相分散（MSPD）

將300 mg 加標(biāo)樣品粉末、200 μL去離子水和150 mg表面固載有[C6MIM][PF6]的硅膠加入瑪瑙研缽，研磨5 min。將粉末加入裝有300 mg C18的固相萃取柱中，用20.0 mL去離子水淋洗，吹干，后續(xù)操作過程同2.3節(jié)。

3 結(jié)果與討論

3.1 固化載體選擇

按文獻(xiàn)[20，21]的方法考察了4種固化載體：硅膠、中性氧化鋁、硅藻土和C18。結(jié)果表明，硅膠對(duì)離子液體的固載效果最好，這與硅膠的比表面積較大及SiOH吸附作用力強(qiáng)有關(guān)，所以選擇硅膠作為固化載體。

3.2 離子液體種類和吸附量的選擇

硅膠表面固載離子液體方法采用直接浸漬法[20，21]。離子液體的烷烴鏈對(duì)提取存在影響，烷烴鏈長(zhǎng)雖然有助于MSPD過程中小極性物質(zhì)的提取，但是在UANE過程中，會(huì)增加提取液對(duì)固相萃取小柱的洗脫能力，降低分析物的回收率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，質(zhì)量和固載濃度（0.0015 mol/g）相同，而烷烴鏈長(zhǎng)度不同的離子液體（[C4MIM][PF6]，[C6MIM][PF6]，[C8MIM][PF6]）固載的硅膠中，[C6MIM][PF6]固載的硅膠對(duì)5種除草劑的回收率較高，故選擇[C6MIM][PF6]。

離子液體的吸附量越多，同等質(zhì)量的分散劑，固體成分越少，MSPD的提取效果越差，而UANE霧化效果越好，固載量由1.0～2.5 mmol/g的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2a， 當(dāng)離子液體的固載量為2.0 mmol/g時(shí)，分析物的回收率最高，因此離子液體固載量選擇2.0 mmol/g。

3.3 分散劑的質(zhì)量

在MSPD過程中，分散劑主要是破壞樣品組織結(jié)構(gòu)。但在超聲霧化過程中，分散劑則會(huì)吸收超聲波，減弱超聲霧化提取的噴泉效應(yīng)，阻礙氣溶膠的形成。實(shí)驗(yàn)中考察了0.05～0.25 g分散劑對(duì)5種三嗪除草劑回收率的影響（圖2b）。結(jié)果表明，分散劑質(zhì)量為0.15 g時(shí)，分析物的回收率最高。因此，樣品量為300 mg時(shí)，分散劑的質(zhì)量選擇為0.15 g。

3.4 pH值和離子強(qiáng)度的影響

考察了提取液pH值和離子強(qiáng)度對(duì)5種分析物回收率的影響。實(shí)驗(yàn)中使用HCl和NaOH調(diào)節(jié)溶液pH值。結(jié)果表明，當(dāng)提取液pH值在6～7之間時(shí)，分析物的回收率較高，所以選擇提取液pH值為7。

離子強(qiáng)度會(huì)影響分析物的回收率[22]，為防止引入其它離子，實(shí)驗(yàn)選擇NaCl調(diào)節(jié)提取液的離子強(qiáng)度。結(jié)果表明，當(dāng)NaCl的濃度為1%時(shí)，5種分析物的回收率最大，故選擇提取液中的NaCl的濃度為1.0%。

3.5 固相萃取洗脫劑和體積的影響

因乙腈對(duì)人參中內(nèi)源性物質(zhì)溶解度較差，而對(duì)目標(biāo)物洗脫效果較好，故選擇乙腈作為洗脫劑，當(dāng)乙腈體積超過5.0 mL時(shí)，目標(biāo)物回收率變化不大，說明5.0 mL乙腈可以將目標(biāo)物完全洗脫，所以洗脫體積選擇5.0 mL。

3.6 工作曲線、檢出限和定量限

按最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下提取不同加標(biāo)濃度（0.10～20.00 μg/g）的人參加標(biāo)樣品，并進(jìn)行高效液相分析，將得到的各目標(biāo)分析物的峰面積對(duì)含量作圖，繪制工作曲線，得到5種三嗪類除草劑回歸方程和線性范圍。按信噪比（S/N）為3和10測(cè)定各目標(biāo)物的檢出限和定量限，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，定量限色譜圖見圖3。

3.7 加標(biāo)回收率和實(shí)際樣品分析

采用本方法對(duì)購買的其它5個(gè)批次人參樣品中的三嗪類除草劑進(jìn)行檢測(cè)，均未檢出三嗪類除草劑。為了考察實(shí)際樣品的基質(zhì)效應(yīng)，在人參中添加3個(gè)濃度水平（0.50， 5.00和15.00 μg/g）的除草劑，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，加標(biāo)回收率為78.2%～95.4%，RSD為3.5%～6.0%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法可以用于檢測(cè)人參中的三嗪類除草劑。

3.8 方法對(duì)比

3水平（0.50， 5.00和15.00 μg/g）的加標(biāo)樣品按照2.4～2.6節(jié)方法進(jìn)行處理，結(jié)果見表3。結(jié)果表明，基質(zhì)固相分散超聲霧化提取的回收率均高于單一使用超聲霧化提取法或基質(zhì)固相分散法，尤其是使用離子液體固載的硅膠作為分散劑時(shí)，目標(biāo)物的回收率高于硅膠作為分散劑時(shí)的回收率。

4 結(jié) 論

本研究使用離子液體基質(zhì)固相分散超聲霧化固相萃取法提取人參中的5種三嗪類除草劑， 經(jīng)考察相關(guān)影響因素，確立了最優(yōu)提取條件，對(duì)6批次人參樣品中的三嗪除草劑進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，與對(duì)比方法相比，本方法具有回收率高、操作簡(jiǎn)單、提取時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。本研究結(jié)果表明， 離子液體基質(zhì)固相分散超聲霧化固相萃取法可作為一種有效的中藥中農(nóng)藥殘留的提取方法。

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徐能斌， 馮加永， 朱麗波， 錢飛中， 徐立紅， 陳鐘佺， 汪晟樂. 分析化學(xué)， 2016， 44（1）： 117-123

Abstract A new ultrasonicassisted nebulization extraction （UANE） method coupled with silicasupported ionic liquid based matrix solid phase dispersion（SSILbased MSPD） and solid phase extraction（SPE） was established for the extraction of five triazine herbicides from root of Panax ginseng C.A.Mey. High performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine these analytes. Experimental parameters， which affect the recoveries of the analytes， were studied and optimized. The sample powder （300 mg） was mixed with 150 mg of silica gel （[C6MIM][PF6] 2.0 mmol/g）. After MSPD for 5 min， the mixtures were extracted in water （pH 7， NaCl 1.0%） by UANE for 10 min， and then eluted by 5.0 mL of acetonitrile from the SPE column （C18， 300 mg）. Under the optimized conditions， the LODs of these five triazine herbicides are in the ranges of 0.020-0.035 μg/g， the concentration range of linear relationship of analytes （r2≥0.9992） are in the ranges of 0.15-20.00 μg/g. The recoveries of these five triazine herbicides are in the ranges of 78.2%-95.2%， the RSDs are in the range of 3.5%-6.0%. The method shows a quick， efficient， high purifying effect and high extraction rate for the target analytes， and can be used to extract pesticide residues in traditional Chinese medicine.

Keywords Panax ginseng C.A.Mey； Trzaine herbicides； Ionic liquid； Matrix solid phase dispersion； Ultrasonicassisted nebulization extraction； Solid phase extraction