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乳腺癌組織胰島素受體底物 -1、胰島素受體底物 -2表達(dá)及其與患者臨床病理特征的關(guān)系研究

2022-10-20 04:08趙穎潔
關(guān)鍵詞:底物淋巴結(jié)染色

關(guān) 霞,趙穎潔

(四川省婦幼保健院病理科,四川 成都 610041)

乳腺癌是一種發(fā)生在乳房腺上皮組織的惡性腫瘤,患者早期沒有典型癥狀,容易與乳腺增生和乳腺纖維瘤混淆,不易引起重視。隨著病情進(jìn)展,其可能出現(xiàn)周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,也可以通過血行轉(zhuǎn)移,到達(dá)肺、腦等重要的生命器官,嚴(yán)重威脅患者生命安全。有研究顯示,多種基因的異常表達(dá)和機(jī)體微環(huán)境眾多細(xì)胞因子的相互作用與乳腺癌的轉(zhuǎn)移、疾病進(jìn)展密切相關(guān)[1]。胰島素受體底物-1(IRS-1)、胰島素受體底物-2(IRS-2)均屬于胰島素受體絡(luò)氨酸激酶底物家族中的成員,參與多種細(xì)胞因子的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),通過與受體結(jié)合發(fā)生自身磷酸化為下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)提供結(jié)合位點(diǎn),從而激活下游轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信號通路],調(diào)控細(xì)胞的生長、存活、分化及代謝,且高表達(dá)時(shí)可使細(xì)胞發(fā)生癌變,參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[2-3]。本研究旨在探討IRS-1、IRS-2在乳腺癌組織中的表達(dá)情況,及其與患者臨床病理特征的關(guān)系,以期為臨床上診治乳腺癌提供參考,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料回顧性分析四川省婦幼保健院2019年8月至2021年7月收治的60例乳腺癌患者的臨床資料,分別取其乳腺癌組織標(biāo)本與乳腺癌癌旁正常組織標(biāo)本進(jìn)行檢測。診斷標(biāo)準(zhǔn):參照《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范(2017年版)》[4]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn),并經(jīng)病理學(xué)檢測確診;未接受放化療治療;行乳腺癌根治術(shù)治療者;臨床資料完整者等。排除標(biāo)準(zhǔn):既往有惡性腫瘤史或伴隨其他惡性腫瘤者;合并急、慢性炎癥疾病或基礎(chǔ)疾病者;影像學(xué)檢查存在可疑遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;合并血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾病者等。四川省婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會已批準(zhǔn)此研究。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集于乳腺癌根治術(shù)術(shù)中切除病灶組織,并采集距離病灶組織大于5 cm的癌旁正常組織2~3塊(經(jīng)病理診斷確診無癌細(xì)胞殘留),30 min內(nèi)使用濃度4%的多聚甲醛溶液進(jìn)行固定1~2 d,使用乙醇脫水后再使用甲苯溶液對切片進(jìn)行清洗,石蠟包埋制作成組織蠟塊。

1.2.2免疫組化檢測對組織蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片(厚度:4 μm),并將組織切片貼附在預(yù)先處理的載玻片上,隨后將其放在60 ℃干燥箱中進(jìn)行烘烤2 h,室溫保存;使用二甲苯進(jìn)行脫蠟和梯度酒精進(jìn)行水化處理;在室溫避光下,使用3%過氧化氫處理10 min,山羊血清封閉(濃度10%)孵育30 min;磷酸鹽緩沖鹽溶液(PBS)浸泡2次,5 min/次。分別加入單克隆抗體,對照組以PBS代替一抗4 ℃孵育過夜,室溫復(fù)溫(45 min) →二抗(37 ℃孵育20 min) →三抗(37 ℃孵育20 min);在1滴二氨基聯(lián)苯胺顯色液與1滴親和素生物素過氧化物酶復(fù)合物(約50 μL)的混合液中加入1 mL雙蒸水并混勻,在顯微鏡下觀察切片組織顏色和強(qiáng)度適中后,立即使用自來水終止顯色,蘇木素復(fù)染細(xì)胞核5 min,中性樹膠封片。使用全自動熒光免疫分析儀(Radiometer Medical ApS,型號:AQT90 FLEX)檢測IRS-1、IRS-2表達(dá)水平。細(xì)胞染色情況通過顯微鏡進(jìn)行判定,同時(shí)統(tǒng)計(jì)其表達(dá)情況。由兩名病理科醫(yī)師對所有病理切片的免疫組化染色情況進(jìn)行觀察確認(rèn)。

1.2.3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)IRS-1與IRS-2高表達(dá):呈棕黃色或棕褐色,根據(jù)標(biāo)本染色強(qiáng)度[無著色(0分,陰性)、淺黃色(1分,弱陽性)、棕黃色(2分,陽性)、棕褐色(3分,強(qiáng)陽性)]及范圍[棕黃色染色范圍≤ 25%為1分,25% < 染色范圍≤ 50%為2分,50% < 染色范圍≤ 75%為3分,染色范圍 > 75%為4分]判定,免疫組化評分=染色強(qiáng)度×染色范圍, ≤ 1分為低表達(dá),>2分為高表達(dá)(5~8分、9~12分別為中度陽性、強(qiáng)陽性)[5]。

1.3觀察指標(biāo)①觀察乳腺癌組織與乳腺癌癌旁組織IRS-1、IRS-2表達(dá)情況。②分析乳腺癌組織IRS-1、IRS-2陽性表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系。其中臨床病理特征包括組織學(xué)分期(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期)、腫瘤直徑(<2 cm或≥ 2 cm)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(有或無)、T分期[T1:腫瘤最大直徑≤ 20 mm;T2:20 mm<腫瘤最大直徑≤ 50 mm;T3:腫瘤最大直徑>50 mm]、N分期[N0:無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;N1~2:同側(cè)Ⅰ、Ⅱ級腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,可移動(N1)、同側(cè)Ⅰ、Ⅱ級腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,固定或融合(N2);N3:同側(cè)鎖骨下淋巴結(jié)(Ⅲ級腋窩淋巴結(jié))轉(zhuǎn)移,伴或不伴Ⅰ、Ⅱ級腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移][6];組織學(xué)分期標(biāo)準(zhǔn):按照腺管形成[腺管形成>75%(1分),10% ≤腺管形成≤ 75%(2分),腺管形成<10%(3分)]、核的多形性[1分(與腫瘤周圍正常乳腺組織比較,細(xì)胞規(guī)則,核小或稍大)、2分(較正常上皮細(xì)胞大,有中度異形性,可見空泡核及核仁)、3分(瘤細(xì)胞有明顯的多形性,可見巨核及畸形核)]及核分裂計(jì)數(shù)[核分裂計(jì)數(shù)評估,在細(xì)胞生長活躍區(qū),計(jì)數(shù)10個高倍視野(400×),然后算出每10個高倍視野的核分裂數(shù)(1分:0~1個;2分:2~3個;3分:>3個] 3項(xiàng)總分進(jìn)行評估,總分為3者之和,3~5分為Ⅰ級,6~7分為Ⅱ級,8~9分為Ⅲ級[7]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料使用[ 例(%)]表示,行χ2檢驗(yàn),多組間比較采用χ2趨勢檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1乳腺癌組織IRS-1、IRS-2表達(dá)情況乳腺癌組織中IRS-1、IRS-2的高表達(dá)率均顯著高于乳腺癌旁組織,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),見表1。IRS-1、IRS-2在乳腺癌組織中均有廣泛表達(dá),呈棕褐色,陽性細(xì)胞占比≥ 51%,定位于細(xì)胞漿內(nèi),見圖1-A、圖1-B。

表1 乳腺癌組織中組織IRS-1、IRS-2表達(dá)情況比較[ 例(%)]

圖1 乳腺癌組織IRS-1、IRS-2免疫組織化學(xué)染色陽性圖片(×200)

2.2乳腺癌組織IRS-1、IRS-2表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系乳腺癌組織IRS-1、IRS-2高表達(dá)患者中T3期、N3期占比均顯著高于IRS-1、IRS-2低表達(dá)患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),見表2、表3。

表2 乳腺癌組織IRS-1表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[ 例(%)]

表3 乳腺癌組織IRS-2表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[ 例(%)]

3 討論

大部分乳腺癌患者在早期一般不會出現(xiàn)明顯的不適癥狀,因此容易被患者忽視,當(dāng)病情發(fā)展到一定程度時(shí),進(jìn)行相關(guān)檢查才發(fā)現(xiàn)病灶,但是為時(shí)已晚,癌細(xì)胞已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,進(jìn)而導(dǎo)致多器官出現(xiàn)病變,嚴(yán)重威脅患者生命安全。此外,乳腺癌患者不同的疾病進(jìn)展階段,也會有不同的治療方式與預(yù)后。因此,尋找一種積極有效的乳腺癌診斷方法,對指導(dǎo)臨床采取及時(shí)有效的治療措施與改善患者預(yù)后意義重大。隨著臨床對乳腺癌研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)基因突變是其分子發(fā)病機(jī)制,并且在疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中均有多基因參與。因此,了解細(xì)胞增殖標(biāo)志物水平,對診斷乳腺癌具有積極意義。

IRS是被激活的胰島素受體酪氨酸激酶作用的底物,具有較多的殘基,發(fā)生磷酸化,參與了細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的磷酸化蛋白,控制下游信號的傳導(dǎo),參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及免疫調(diào)節(jié)等作用,其異常時(shí)可使細(xì)胞發(fā)生癌變,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[8];而IRS-1、IRS-2屬于胰島素受體底物家族中的主要成員,可作為胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中的關(guān)鍵中介分子,在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用;同時(shí),該蛋白參與多種激素、細(xì)胞因子的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),以維持細(xì)胞的基本功能。相關(guān)研究顯示,IRS-1、IRS-2蛋白與乳腺癌的臨床癥狀和預(yù)后有著重要的關(guān)系[9]。本研究中,乳腺癌組織中IRS-1、IRS-2的高表達(dá)率均顯著高于乳腺癌旁組織,提示IRS-1、IRS-2在乳腺癌癌組織和癌旁組織中的表達(dá)具有較大的差異,參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。

IRS-1可通過調(diào)控多聚嘧啶區(qū)結(jié)合蛋白(PTB)的表達(dá),消除胰島素樣生長因子受體-1(IGF-1R)對細(xì)胞分化的作用,從而促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,IRS-1在乳腺癌中持續(xù)被激活,高表達(dá)IRS-1會促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞增殖[10]。IRS-2高表達(dá)于乳腺癌中,主要通過調(diào)節(jié)下游通路PI3K促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂,從而導(dǎo)致惡性腫瘤的增殖,同時(shí)還可以促進(jìn)間皮瘤細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移[11]。本研究中,IRS-1、IRS-2表達(dá)均與組織學(xué)分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期、N分期有關(guān),說明IRS-1、IRS-2表達(dá)與臨床病理特征有關(guān),能夠在一定程度上反映乳腺癌患者的惡性程度,這與上述指標(biāo)在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用有關(guān)。

綜上,IRS-1、IRS-2在乳腺癌組織中呈高表達(dá)水平,且上述指標(biāo)表達(dá)水平與患者臨床病理特征(乳腺癌T、N分期等)關(guān)系密切,可在臨床上診斷和治療乳腺癌方面起協(xié)助作用。但本研究也存在一定不足之處,未對患者疾病治療和預(yù)后情況進(jìn)行隨訪,因此需擴(kuò)大樣本量,延長隨訪周期,對疾病治療和預(yù)后情況做深入研究。

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