於瀟瀟，張玲玲，張小霞，金 慧

（1.南通市腫瘤醫(yī)院檢驗科；2.南通市腫瘤醫(yī)院乳腺科，江蘇 南通 226361）

乳腺癌是源于乳腺腺體、血管、淋巴及乳頭等乳腺相關的組織病變，該疾病早期癥狀不明顯，導致患者很難及時就醫(yī)，從而使得治療效果不理想，甚至導致死亡。目前，對乳腺癌的診斷方法主要是通過影像學檢查與腫瘤標志物檢查，影像學檢查方式簡單，但容易造成漏診，血清腫瘤標志物檢測具有簡便無創(chuàng)、測定結果定量客觀、費用相對低廉等優(yōu)點，且患者接受高，在臨床上應用廣泛。糖類抗原153（CA153）是腫瘤細胞產(chǎn)生的特異性糖蛋白抗原，具有抗原性，可以用于早期發(fā)現(xiàn)乳腺癌、判斷療效和檢測預后[1]。前列腺特異抗原（PSA）是一種具有組織特異性的絲氨酸蛋白酶，包括總前列腺特異性抗原（TPSA）、游離前列腺特異性抗原（FPSA），有研究表明PSA可作為乳腺癌患病風險的評估指標[2]。神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是神經(jīng)組織和神經(jīng)內(nèi)分泌組織中特有的酸性蛋白酶，參與神經(jīng)內(nèi)分泌組織相關的腫瘤的發(fā)展[3]。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）通過誘導血管生成和淋巴管生成來促進乳腺癌的進展。本研究旨在探討血清PSA、CA153、NSE在乳腺癌中的表達及其與新生血管和預后的相關性，為后期疾病的臨床治療提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料回顧性分析南通市腫瘤醫(yī)院2017年9月至2019年8月收治的176例乳腺癌患者和92例良性乳腺結節(jié)患者的臨床資料，分別將其作為惡性組與良性組；另回顧性分析同期120例健康體檢者的體檢資料，將其作為健康組。健康組研究對象年齡31～59歲，平均（46.29±10.79）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）20～25 kg/m2，平均（22.09±1.21） kg/m2。良性組患者年齡29～59歲，平均（47.36±10.28）歲；BMI 20～26 kg/m2，平均（22.26±1.27） kg/m2。惡性組患者年齡31～62歲，平均（49.29±11.62）歲；BMI 20～26 kg/m2，平均（21.96±1.19） kg/m2；TNM分期[4]：Ⅰ ～ Ⅱ期84例，Ⅲ期51例，Ⅳ期41例。對比3組研究對象一般資料（年齡、BMI），差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），組間可比。納入標準：惡性組患者符合《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范（2015版）》[5]中的相關診斷標準；良性組患者符合《乳腺疾病防治指南》[6]中的診斷標準者；良性組與惡性組患者均經(jīng)影像學檢查、病理組織活檢等確診；入院前未接受乳腺癌相關治療者等。排除標準：妊娠期與哺乳期女性；合并心腦血管疾??；合并全身性重度感染性疾病、其他良惡性腫瘤者；合并血液系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)及自身免疫系統(tǒng)重度病變者等。本研究經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2血清PSA、CA153、NSE水平檢測方法采集3組研究對象空腹靜脈血5 mL，經(jīng)3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min后取血清，利用全自動化學發(fā)光免疫分析儀（Roche Diagnostics GmbH，型號：cobas 6000 e 601）檢測血清TPSA、FPSA、CA153及NSE水平。各指標參考值：TPSA（0～0.36 ng/mL），F(xiàn)PSA（0～0.02 ng/mL），CA153（0～25 U/mL），NSE（0～17.0 ng/mL），高于參考值上限為陽性[7-8]。

1.3免疫組織化學染色采用免疫組織化學染色檢測惡性組和良性組患者病理組織VEGF陽性表達情況。以乳腺癌患者癌組織和乳腺結節(jié)患者結節(jié)組織作石蠟包埋標本。將標本制成3～4 μm厚的切片，經(jīng)脫蠟、水化、煮沸、修復后，利用抗VEGF單克隆抗體進行SP染色，DAB顯色，最后進行復染，出現(xiàn)在細胞膜和細胞質(zhì)內(nèi)的棕黃色顆粒為陽性表達標準。根據(jù)陽性細胞百分比計分，無陽性細胞為0分；陽性細胞占比≤ 10%為1分；10%＜陽性細胞占比≤ 50%為2分；50%＜陽性細胞占比≤ 75%為3分；陽性細胞占比＞75%為4分；根據(jù)著色強度由淺到深分別記為0、1、2、3分。將上述2項評分相乘，最終得分0～2分為（-），3～5分為（+），6～9分為（++），10～12分為（+++），≤ 2分為陰性，＞2分為陽性[9]。

1.4隨訪通過電話和門診對惡性組和良性組患者定期進行為期2年的隨訪，計算1、2年生存率。

1.5觀察指標①比較3組研究對象血清PSA、CA153、NSE水平。②比較惡性組與良性組患者血清VEGF表達水平。③比較惡性組與良性組患者生存情況。④分析血清PSA、CA153、NSE表達水平與VEGF表達情況、生存率的相關性。

1.6統(tǒng)計學方法使用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，使用S-W法檢驗計量資料數(shù)據(jù)是否服從正態(tài)分布，對于符合正態(tài)分布的計量資料以(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗；計數(shù)資料以[ 例(%)]表示，采用χ2檢驗；應用K-M法繪制患者隨訪2年內(nèi)的生存曲線，并采用log-rank檢驗進行比較；采用Pearson相關系數(shù)法分析血清PSA、CA153、NSE表達水平與VEGF表達情況、生存率的相關性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 3組研究對象血清PSA、CA153、NSE水平比較與健康組比，良性組和惡性組患者血清TPSA、FPSA、CA153及NSE水平均升高，且惡性組高于良性組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05），見表1。

表1 3組研究對象血清PSA、CA153、NSE水平比較( ±s)

表1 3組研究對象血清PSA、CA153、NSE水平比較( ±s)

注：與健康組比，*P＜0.05；與良性組比，#P＜0.05。TPSA：總前列腺特異性抗原；FPSA：游離前列腺特異性抗原；CA153：糖類抗原153；NSE：神經(jīng)元特異性烯醇化酶。

組別 例數(shù)TPSA(ng/mL)FPSA(ng/mL)CA153(U/mL)NSE(ng/mL)健康組120 0.26±0.10 0.02±0.01 18.65±4.43 7.04±2.12良性組 92 0.52±0.18* 0.04±0.01* 32.26±9.57*18.56±4.61*惡性組176 0.84±0.21*# 0.09±0.02*# 45.59±12.95*# 25.32±6.65*#F值 397.929 808.993 251.061 450.192 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2惡性組與良性組患者VEGF水平比較惡性組患者VEGF陽性表達率高于良性組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 惡性組與良性組患者VEGF水平比較[ 例(%)]

2.3惡性組與良性組患者生存曲線比較隨訪第1年內(nèi)，惡性組患者出現(xiàn)21例死亡病例（11.93%），良性組患者出現(xiàn)2例死亡病例（2.17%）；隨訪第2年內(nèi)，惡性組患者出現(xiàn)13例死亡病例（7.39%），良性組未出現(xiàn)死亡病例；隨訪2年內(nèi)惡性組患者總生存率80.68%（142/176）低于良性組97.83%（90/92），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=15.272，P＜0.05），見圖1。

圖1 惡性組與良性組患者生存曲線

2.4血清PSA、CA153、NSE表達水平與VEGF陽性表達水平、生存率的相關性Pearson相關系數(shù)法分析結果顯示，血清TPSA、FPSA、CA153、NSE表達水平與VEGF均呈正相關（r= 0.663、0.617、0.652、0.587），與生存率呈負相關（r= -0.514、-0.493、-0.501、-0.472），差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05），見表3。

表3 血清PSA、CA153、NSE水平與VEGF、生存率的相關性

3 討論

乳腺癌是臨床上常見的惡性腫瘤，該疾病的致病因素多而雜，包括內(nèi)分泌激素的分泌水平、生活方式、遺傳因素以及基因突變等，早期乳腺癌可以在乳腺上摸到腫塊，大多不伴有疼痛，有些患者同時伴有乳腺脹痛，甚至雙側(cè)乳腺脹痛，部分乳腺癌病灶可遠端轉(zhuǎn)移至肺、肝、腦等位置，造成治療難度進一步增大[10]。因此，要提高乳腺癌治愈率，恢復患者健康，需要盡早對疾病進行確診。目前，腫瘤標志物診斷乳腺癌相對便捷，在臨床上應用較為廣泛。

PSA為激肽釋放酶（KLK）基因家族中KLK3的一種表達物，能夠?qū)毎L進行有效的刺激，促進血管形成，對細胞基層進行降解，在惡性腫瘤特別是前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌等性激素相關腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中均會產(chǎn)生顯著作用[11]；PSA具有兩種分子形式，分別為TPSA和FPSA，有研究表明，在乳腺惡性腫瘤切除術后，F(xiàn)PSA表達水平低，提示了游離狀態(tài)的PSA的產(chǎn)生與腫瘤密切相關[12]。CA153是黏蛋白1（MUC-1）分泌到血液中一種可溶性片段，在細胞癌變后，細胞膜表面的唾液酸酶和蛋白酶活性會增強，從而破壞細胞骨架，導致CA153從細胞脫落進入血清中；相關研究顯示，CA153對于早期乳腺癌的診斷雖特異性高但靈敏度較低，臨床常用于浸潤性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌的監(jiān)測[13]；NSE主要特異性地存在于神經(jīng)內(nèi)分泌細胞的胞質(zhì)中，其在起源于神經(jīng)內(nèi)分泌細胞的惡性腫瘤中也有異常表達信號[14]。VEGF是一種對血管生長有促進作用的細胞因子，其在癌細胞中能夠通過促進內(nèi)皮細胞增殖和構建血管來推動腫瘤發(fā)展；同時還能增加微血管的滲透性，加速細胞進出血管，從而促進癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[15]。本研究中，與健康組比，良性組和惡性組患者血清中TPSA、FPSA、CA153及NSE表達水平均升高，且惡性組高于良性組；惡性組患者VEGF陽性表達率高于良性組，提示TPSA、FPSA、CA153、NSE及VEGF在乳腺癌病情診斷中有十分重要的意義，且VEGF在乳腺癌患者體內(nèi)的高表達，反映了乳腺癌患者體內(nèi)血管生長速度較良性乳腺結節(jié)患者快，且微血管密度更高。

雷巧等[16]研究中對100例乳腺癌患者進行了7～24個月的術后隨訪，結果發(fā)現(xiàn)，發(fā)生術后轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清F-PSA、TPSA及CA153水平均顯著高于未轉(zhuǎn)移組，提示血清FPSA、PSA及CA153均可作為預測乳腺癌預后的重要標志物。裴生新等[17]研究中，將86例乳腺癌患者分為良性組與惡性組，并對比分析了兩組患者的PSA、CA153等指標的表達情況，結果發(fā)現(xiàn)，PSA、CA153在惡性組患者體內(nèi)顯著高于良性組，說明PSA、CA153的升高能夠提示乳腺癌的疾病進展和預后情況。本研究結果顯示，隨訪2年內(nèi)惡性組患者總生存率80.68%低于良性組97.83%，提示乳腺癌患者預后質(zhì)量明顯低于良性乳腺結節(jié)患者。通過相關性分析得出，血清TPSA、FPSA、CA153、NSE表達水平與VEGF呈正相關，與生存率呈負相關，提示血清TPSA、FPSA、CA153、NSE水平越高，VEGF水平也越高，進而促進腫瘤血管的生長，導致預后質(zhì)量下降。

綜上，腫瘤標志物血清TPSA、FPSA、CA153、NSE與VEGF均呈正相關，與生存率呈負相關，表明可通過檢測PSA、CA153、NSE表達水平來反映血管新生速度，對乳腺癌的發(fā)展與預后具有重要意義，值得臨床推廣應用。