■薩茹麗 楊 斌 玉 梅 王翠芳 敖長(zhǎng)金*

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，內(nèi)蒙古呼和浩特010031）

沙蔥為百合科蔥屬植物，又稱為蒙古韭菜(allium mongolicum regel)、胡穆利(蒙語(yǔ))[1]等，沙蔥屬于多年生長(zhǎng)的鱗莖草本植物，其根莖，鱗莖柱形且粗短，簇生。基生葉的形狀為細(xì)線形?；ㄇo的形狀為圓柱形直立?；ㄊ怯啥鄠€(gè)小花聚集在一起，呈現(xiàn)為傘形，花的顏色一般呈鮮淡紫色或者紫紅色。沙蔥的開花期為每年的6～8月。因其外貌特征極像幼蔥，因此被稱之為沙蔥。沙蔥的適應(yīng)力、抗旱以及抗寒能力特別強(qiáng)。廣泛生長(zhǎng)在海拔較高的砂壤戈壁、干旱沙漠及戈壁荒漠等干旱的地區(qū)。在我國(guó)主要分布于內(nèi)蒙古西北部、遼寧(西部)、陜西(北部)、甘肅、青海(北部)、新疆(東北部)和寧夏（北部）等地區(qū)，國(guó)外則分布于俄羅斯、哈薩克斯坦、東西伯利亞以及蒙古西南部等干旱荒漠地區(qū)。沙蔥的葉子、嫩莖和花苞都是可以食用的野生蔬菜，具有辛辣味，然而沙蔥的辛辣味道要比其他蔥韭更鮮更濃，具極高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，享有“沙原佳蔬”、“大漠野菜”、“菜中靈芝”[2]等美譽(yù)。張宇宏[3]研究指出沙蔥可提高肉羊血清中堿性磷酸酶（ALP）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）以及T3和T4的水平。哈斯其木格[4]發(fā)現(xiàn)在飼料中添加沙蔥提取物能夠顯著提高肉仔雞的生產(chǎn)性能、血清總抗氧化能力、谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶的活力，并且能夠顯著提高肉仔雞免疫能力。趙春艷[5]證明沙蔥中黃酮類化合物能提高試驗(yàn)小鼠機(jī)體總超氧化物歧化酶（T-SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）含量，降低機(jī)體丙二醛（MDA）的含量?？妬喚闧6]報(bào)道沙蔥異黃酮能夠?qū)υ囼?yàn)小鼠血清與肝臟中GSH-Px活性、T-SOD活性、CAT活性、T-AOC能力產(chǎn)生一定的促進(jìn)作用，降低MDA含量，提高機(jī)體抗氧化能力與免疫力。薩茹麗等[7]研究指出沙蔥中各個(gè)部位中的提取物都有一定的體外抗氧化與抗菌的作用，其中沙蔥葉中提取物的總黃酮含量是最高的，并且其體外抗氧化及抗菌活性也是相對(duì)其他部位而言較好的，對(duì)DPPH自由基的清除率可達(dá)到52.2%、對(duì)羥基自由基的清除率可達(dá)到84.4%、對(duì)沙門氏菌的抑制率可達(dá)到86.6%。進(jìn)一步研究認(rèn)為沙蔥總黃酮中35%乙醇洗脫組分的抗氧化與免疫調(diào)節(jié)活性最強(qiáng)，其所含的7-O-5,4′-二甲氧基-3′-羥基黃酮及3′,4′-環(huán)氧基-7-O-5-甲氧基黃酮醇的活性結(jié)構(gòu)是其抗氧化活性的關(guān)鍵基團(tuán)[8]。沙蔥作為天然優(yōu)質(zhì)牧草有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值以及藥用價(jià)值。本試驗(yàn)通過研究沙蔥總黃酮體外抗氧化、抗菌、抗病毒能力，旨在為后續(xù)沙蔥及沙蔥相關(guān)天然產(chǎn)物的研究與開發(fā)提供一些幫助和思路。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

本試驗(yàn)中所用沙蔥均采自內(nèi)蒙古自治區(qū)鄂爾多斯市鄂托克旗天然牧場(chǎng)。沙蔥總黃酮參照薩茹麗[8]報(bào)道的方法由本實(shí)驗(yàn)室自制，-20℃保存?zhèn)溆?，使用前用蒸餾水配制成10 mg/ml的原液。

綿羊偽狂犬病病毒與BHK-21細(xì)胞株（用于感染病毒）由內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院提供。

大腸桿菌（ATCC-25922）、綠膿桿菌（ATCC-27853）、金黃色葡萄球菌（ATCC-25923）、沙門氏菌(ATCC-50096)由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)免疫研究室提供。

人肺癌A549細(xì)胞株為內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院微生物與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室傳代保存株）。

DMEM/low Glucose培養(yǎng)基、RPMI1640培養(yǎng)基、胰酶、胎牛血清、Hank's液、青鏈霉素母液(PS)均購(gòu)自GIBCO公司；DMSO購(gòu)自Sigma公司

MTT(Sigma公司)的制備：5 mg MTT粉溶于1 mol/l的PBS溶液制得5 mg/ml的應(yīng)用液，過濾除菌后在4℃避光保存（一周內(nèi)用完），最好是現(xiàn)用現(xiàn)配。

環(huán)磷酰胺（CTX，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)：20080902）溶液的配制：稱取0.2 g環(huán)磷酰胺后用4 ml生理鹽水溶解，得50 mg/ml環(huán)磷酰胺溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2 試驗(yàn)儀器

RE52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；HEPA class 100CO2培養(yǎng)箱（Thermo公司）；Synergy H4型全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀（BIOTEK公司）；AC2-4S1生物安全柜（ESCO公司）；IX71倒置相差顯微鏡（Olympus公司）；YS100普通光學(xué)顯微鏡（Nikon公司）；離心機(jī)（BD公司）；恒溫水浴鍋（上海亞榮儀器廠）；冷凍干燥機(jī)（Millipore公司）等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 沙蔥總黃酮體外抗病毒活性的研究

1.3.1.1 細(xì)胞的復(fù)蘇與傳代

將凍存的BHK-21細(xì)胞在水浴鍋快速融化后加入到離心管中，以1 000 r/min離心5 min，棄掉上清液，用培養(yǎng)液沖洗后把細(xì)胞液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中，搖勻后在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)之后用一次性滴管吸出培養(yǎng)液，加入適量PBS溶液沖洗，用胰酶消化后加入新的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。分裝后放入37℃5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

1.3.1.2 含藥血清的制備

取40只試驗(yàn)小鼠，隨機(jī)分配為5個(gè)試驗(yàn)組，雌雄各一半，每個(gè)試驗(yàn)組中有8只小鼠。連續(xù)6 d給小鼠灌胃給藥。其中，生理鹽水試驗(yàn)組為對(duì)照組給予生理鹽水，利巴韋林組給予75 μg/g利巴韋林，沙蔥總黃酮組給予沙蔥總黃酮110、220、330 μg/g（給藥液劑量按體重計(jì)算）。當(dāng)最后一次給藥之后1 h，將所有的試驗(yàn)小鼠深度麻醉，在無菌條件下進(jìn)行心臟采血，將采來的血放入離心管后以3 000 r/min離心10 min，將同組血清歸并在一起，把水浴鍋的溫度調(diào)到56℃將血清水浴30 min，用0.22 μm的濾膜過濾除菌之后，對(duì)血清進(jìn)行分裝，在超低溫的冰箱保存，備用。

1.3.1.3 病毒的半數(shù)感染量(TCID50)的測(cè)定

細(xì)胞在96孔板中長(zhǎng)成薄單層后，將原培養(yǎng)液吸取丟棄，用Hank's液沖洗2次。將病毒解凍之后，用DMEM培養(yǎng)液稀釋成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5和10-6稀釋度，之后將100 μl/孔的病毒分別接種于細(xì)胞上，每個(gè)濃度設(shè)置三個(gè)重復(fù)，在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h后棄去上清液，再用Hank's液洗2次，加入含有10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)液 150 μl/孔。在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48～72 h后在倒置顯微鏡下觀察病變(CPE)的情況。

1.3.1.4 沙蔥總黃酮體外抗病毒作用

細(xì)胞在96孔板中長(zhǎng)成薄單層后，將原有培養(yǎng)液吸取丟棄，后用Hank's液沖洗2次。含藥血清和空白血清分別與10-2.5/0.1 ml量病毒同等體積混合，在5%CO2培養(yǎng)箱中37℃孵育1 h后，分別接種于細(xì)胞上，150 μl/孔，每試驗(yàn)組設(shè)3復(fù)孔，然后在相同條件下繼續(xù)孵育。倒置顯微鏡下待病毒對(duì)照孔的CPE達(dá)到三至四個(gè)加號(hào)時(shí)使用，MTT法檢測(cè)病毒抑制率。

病毒抑制率(%)=[(藥物OD570nm-病毒OD570nm)/(正常OD570nm均值-病毒OD570nm均值)]×100

1.3.2 沙蔥總黃酮體外抗菌活性的研究

1.3.2.1 細(xì)菌的復(fù)蘇培養(yǎng)與定植

在超凈工作臺(tái)內(nèi)將保存完好的菌株用接種環(huán)劃線接種于制作好的培養(yǎng)基中，37℃過夜培養(yǎng)，選擇菌落生長(zhǎng)較好的培養(yǎng)皿，接種于制備好的培養(yǎng)皿中。37℃培養(yǎng)18 h后，再挑選菌落生長(zhǎng)較為典型的培養(yǎng)基，加入5 ml的滅菌后的生理鹽水，輕輕刮起菌苔，制成細(xì)菌混懸液。吸取100 μl于比濁管中，通過比濁法配制成后續(xù)試驗(yàn)所需的1×106個(gè)/ml菌液。

1.3.2.2 抑菌試驗(yàn)

在超凈工作臺(tái)中用滅菌棉簽蘸取制備好的細(xì)菌培養(yǎng)液均勻涂布于預(yù)備好的培養(yǎng)基上，將滅菌的牛津杯用鑷子垂直放置于涂滿菌液的培養(yǎng)基表面，使其與培養(yǎng)基接觸緊密。每個(gè)培養(yǎng)基放置三個(gè)牛津杯，分別加入200 μl沙蔥總黃酮溶液、200 μl無菌蒸餾水、200 μl雙抗（青霉素100 IU+鏈霉素100 IU混合液）。無菌蒸餾水為空白對(duì)照，雙抗為陽(yáng)性對(duì)照。將培養(yǎng)基置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 h，觀察結(jié)果。試驗(yàn)結(jié)果通過抑菌圈直徑的大小來反映抑菌效果。判定標(biāo)準(zhǔn)：D≤8 mm為不敏感，8 mm＜D≤13 mm為低度敏感，13 mm＜D≤19 mm為中度敏感，D＞19 mm為高度敏感。用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈的直徑D，試驗(yàn)重復(fù)三次取平均值。

1.3.2.3 最小抑菌濃度的測(cè)定

本次試驗(yàn)采用試管法進(jìn)行MIC的測(cè)定。準(zhǔn)備若干小試管，蒸餾水洗凈，確保試管洗凈，每管中用移液槍加入1 ml的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放入高壓鍋中121℃，滅菌時(shí)間為25 min。配制具有濃度梯度的沙蔥總黃酮溶液，分別為5、2.5、1.25、0.625 mg/ml。然后各加入100 μl菌液，最后放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 h。觀察無細(xì)菌生長(zhǎng)試管所含最低沙蔥總黃酮濃度即為最小抑菌濃度，試驗(yàn)重復(fù)3次，求取平均值。

1.3.2.4 抑菌率的測(cè)定

沙蔥總黃酮的體外抑菌率試驗(yàn)方法參照許穎等[9]報(bào)道的方法略加改進(jìn)。試驗(yàn)組：用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基以倍比稀釋法將沙蔥總黃酮配成濃度為：100、50、25、12.5 μg/ml。陰性對(duì)照組:生理鹽水。在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上分別建立大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌模型,每孔加入1×106個(gè)/ml的菌液50 μl、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基50 μl，按以上試驗(yàn)分組加入藥液100 μl，37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)20 h。上述96孔板培養(yǎng)結(jié)束前4 h，取出在每孔中加入20 μl配好的MTT溶液（避光），震蕩混勻繼續(xù)在37℃避光培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束后加入150 μl DMSO，震蕩混勻后于酶標(biāo)儀上檢測(cè)其490 nm處的吸光值。

1.3.3 沙蔥總黃酮體外抗腫瘤活性的研究

1.3.3.1 體外細(xì)胞培養(yǎng)

A549細(xì)胞株為貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，以適量濃度接種于培養(yǎng)瓶中，使用加有10%胎牛血清的DMEM高糖細(xì)胞完全培養(yǎng)液在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。視培養(yǎng)情況2～3 d換液一次，待有80%的細(xì)胞貼壁后，按1傳4的比例進(jìn)行傳代。試驗(yàn)時(shí)選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。

1.3.3.2 MTT法測(cè)定沙蔥總黃酮對(duì)A549腫瘤細(xì)胞增殖抑制率

將細(xì)胞以1×105個(gè)/ml的密度接種于96孔板中，每孔100 μl，每組設(shè)5個(gè)重復(fù)。沙蔥總黃酮組分別加入1.0 mg/ml沙蔥總黃酮溶液100、50、20 μl，環(huán)磷酰胺組分別加入50 mg/ml環(huán)磷酰胺溶液100、40、20 μl，后用DMEM高糖培養(yǎng)液補(bǔ)齊體積，使每孔最終體積均為200 μl。后37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，加入20 μl的MTT應(yīng)用液，37 ℃、5%CO2條件下繼續(xù)反應(yīng)4 h，后使用平板離心機(jī)1 500 r/min、10 min，棄上清留沉淀，加入150 μl DMSO，振蕩15 min，待結(jié)晶完全溶解后490 nm處測(cè)定吸光度值，計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（inhibitive rate，IR），IR(%)=(D對(duì)照-D試驗(yàn))/D對(duì)照×100，以上試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4 數(shù)據(jù)處理

本試驗(yàn)的數(shù)據(jù)使用EXCEL及SAS 9.0軟件進(jìn)行處理。

2 結(jié)果

2.1 沙蔥總黃酮體外抗病毒活性的研究

2.1.1 病毒的半數(shù)感染量(TCID50)的測(cè)定結(jié)果(見表1)

表1 病毒的半數(shù)感染量(TCID50)的測(cè)定結(jié)果

根據(jù)表1中細(xì)胞的病變情況，采用Reed-Muench法計(jì)算，可知TCID50為10-2.9/0.1 ml，在接種病毒之后，細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)出不同程度的病變狀態(tài)，并且會(huì)跟著稀釋濃度的增長(zhǎng)而增長(zhǎng)，當(dāng)稀釋比列僅為10-1時(shí)，所有試驗(yàn)孔中細(xì)胞均出現(xiàn)了病變狀態(tài)。

2.1.2 沙蔥總黃酮體外抗病毒活性測(cè)定結(jié)果（見表2）由表2可知在本次試驗(yàn)中，病毒對(duì)細(xì)胞具有較強(qiáng)的病變作用，對(duì)照組與病毒組的抑制率均為0%。利巴韋林組抗病毒的能力最好，能夠抑制63.43%的病毒。沙蔥總黃酮組也具有一定的抑制病毒的作用，并且此作用會(huì)隨著含藥血清添加濃度的增加而增加，但是無顯著的臨床意義。

表2 沙蔥總黃酮體外抗病毒作用

2.2 沙蔥總黃酮體外抗菌活性的研究

2.2.1 沙蔥總黃酮抑菌圈直徑的測(cè)定結(jié)果（見表3）

表3 沙蔥總黃酮抑菌環(huán)直徑的測(cè)定

抑菌圈直徑越大表明藥物的抑菌能力越強(qiáng)，因此試驗(yàn)研究中常常使用抑菌圈直徑大小來表示藥物的抑菌活性強(qiáng)弱。由表3可知，在試驗(yàn)劑量條件下（沙蔥總黃酮濃度為10 mg/ml）時(shí)，沙蔥總黃酮對(duì)沙門氏菌抑菌圈直徑為9.5 mm，屬于低度敏感，但顯著高于對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌的抑菌圈。沙蔥黃酮對(duì)大腸桿菌的抑菌圈直徑可達(dá)到7.3 mm，而對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制能力屬于不敏感，對(duì)綠膿桿菌無明顯的抑制作用。

2.2.2 沙蔥總黃酮最小抑菌濃度的測(cè)定（見表4）

表4 沙蔥總黃酮最小抑菌濃度的測(cè)定

沙蔥總黃酮對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度為5.0 mg/ml，對(duì)綠膿桿菌無明顯的抑制作用，這一結(jié)果與抑菌圈試驗(yàn)結(jié)果相對(duì)應(yīng)，說明沙蔥總黃酮對(duì)大腸桿菌有一定的的抑制作用，在所用劑量范圍內(nèi)對(duì)綠膿桿菌無抑制作用。沙蔥總黃酮對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度為5.0 mg/ml，對(duì)沙門氏菌的最小抑菌濃度為2.5 mg/ml，這一結(jié)果與抑菌圈試驗(yàn)結(jié)果相對(duì)應(yīng)。

圖1 沙蔥總黃酮抑菌率的測(cè)定

2.2.3 沙蔥總黃酮抑菌率的測(cè)定（見圖1）MTT檢測(cè)抑菌率的試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)細(xì)菌濃度定值為1×106個(gè)/ml時(shí)，隨著沙蔥總黃酮濃度的升高，其對(duì)金黃色葡萄球菌、沙門氏菌的抑制作用均呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，當(dāng)沙蔥黃酮添加劑量相同時(shí)，對(duì)沙門氏菌的抑制作用更強(qiáng)一點(diǎn)，且顯著高于其他幾組（P＜0.05）。隨著沙蔥總黃酮的濃度升高，其對(duì)大腸桿菌和綠膿桿菌的抑制率具有一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。相同濃度條件下對(duì)大腸桿菌的抑制作用強(qiáng)于綠膿桿菌，且差異顯著（P＜0.05）。

2.3 沙蔥總黃酮體外抗腫瘤活性的研究（見圖2）

圖2 沙蔥總黃酮對(duì)A549腫瘤細(xì)胞抑制率的測(cè)定

由圖2可知，當(dāng)沙蔥總黃酮作用于A549腫瘤細(xì)胞48 h時(shí)其抑制活性最強(qiáng)，隨著添加時(shí)間的延長(zhǎng)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用明顯降低。在24 h時(shí)隨著添加劑量的增加抑制率呈上升趨勢(shì)，但到達(dá)48 h后沙蔥總黃酮對(duì)A549腫瘤細(xì)胞的抑制作用并沒有顯示出明顯的計(jì)量效應(yīng)關(guān)系。

3 討論

3.1 沙蔥總黃酮體外抗病毒作用的研究

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于植物提取物體外抗病毒作用的研究報(bào)道較為廣泛。如姚干等[10]通過研究黃芩總黃酮和梔子總環(huán)烯醚萜在體外對(duì)H1N1感染的A549細(xì)胞抑制率，發(fā)現(xiàn)黃芩總黃酮和梔子總環(huán)烯醚萜苷組合物具有明顯的抗病毒效應(yīng)，其作用機(jī)制可能是抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的增殖和對(duì)病毒的直接殺滅作用，而單獨(dú)使用黃芩總黃酮或梔子總環(huán)烯醚萜苷，其抗病毒作用低于組合效應(yīng)。高川等[11]研究顯示白穎苔草丙酮-乙酸乙酯粗提物對(duì)RSV和Flu A的細(xì)胞病變效應(yīng)具有顯著的抑制作用。由本次的試驗(yàn)結(jié)果分析可以看出沙蔥總黃酮具有一定的體外抗病毒的作用。這可能與本次選用的病毒株對(duì)沙蔥總黃酮不敏感有關(guān)，或者是沙蔥總黃酮中抗病毒活性成分較少，繼續(xù)進(jìn)行分離提純，加大抗病毒成分的濃度或許可以獲得更為滿意的效果。

3.2 沙蔥總黃酮體外抗菌作用的研究

諸多研究證明酚類衍生物具有使生物細(xì)胞壁及細(xì)胞膜破碎或是細(xì)胞膜通透性改變的作用，從而能讓細(xì)胞內(nèi)容物擴(kuò)散、導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)與信息的傳遞失調(diào)，使微生物生長(zhǎng)停止、導(dǎo)致微生物死亡[12]。由黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)來看，黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中擁有與酚類衍生物相似的結(jié)構(gòu)，因此有研究者們認(rèn)為黃酮類物質(zhì)也具有一定的抗菌作用，且證明了有些植物提取黃酮類物質(zhì)對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌以及霉菌、真菌等具有一定的抑制作用，具有廣譜抗菌活性[13]。本次試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)沙蔥總黃酮對(duì)試驗(yàn)所選的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌均有一定的抑制作用，其中對(duì)沙門氏傷寒菌的抑制作用最強(qiáng)，對(duì)綠膿桿菌無抑制作用。正如物質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)決定其高級(jí)結(jié)構(gòu)，高級(jí)結(jié)構(gòu)決定其生物活性一樣，有研究認(rèn)為黃酮類化合物的抗菌活性主要與其官能團(tuán)組成和黃酮類物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中有無電荷密度較高的部位有關(guān)，與其整個(gè)分子結(jié)構(gòu)中電荷分布有關(guān)[14]。

3.3 沙蔥總黃酮體外抗腫瘤活性的研究

細(xì)胞凋亡是腫瘤研究的一個(gè)重要方向，近年來研究表明許多抗腫瘤藥物均可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生[15]。如張羽男等[16]指出紫花苜?？傸S酮可誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SMMC7721凋亡，呈現(xiàn)出較為顯著的體外抗腫瘤活性。董蒙蒙等[17]通過比較五種中華補(bǔ)血草黃酮類化合物的抗腫瘤作用發(fā)現(xiàn)，在該試驗(yàn)條件下木樨草素的抗腫瘤活性最強(qiáng)，其次為槲皮素，異鼠李素、芹菜素第三，異槲皮苷抗腫瘤活性最低，且認(rèn)為黃酮類化合物抗腫瘤活性與其抗氧化活性有關(guān)。腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(%)=(1-OD實(shí)驗(yàn)/OD對(duì)照)×100。以同一樣品的不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線，從中求出樣品的半數(shù)殺傷濃度IC50。合成化合物或植物提取純品的IC50＜10 μg/ml或植物粗提物的IC50＜20 μg/ml時(shí)，則判斷樣品在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用。由本次試驗(yàn)可知沙蔥總黃酮對(duì)A549腫瘤細(xì)胞無顯著抑制作用。這可能與本實(shí)驗(yàn)室制備沙蔥總黃酮的提取工藝有關(guān)，或是沙蔥總黃酮中具有抑制A549腫瘤細(xì)胞的有效成分含量過少，進(jìn)一步提純制備有望獲得抗腫瘤效果較好的成分。

4 結(jié)論

由本試驗(yàn)結(jié)果可知，沙蔥總黃酮具有一定的抗病毒、抗菌和抗腫瘤活性。其中對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌均有一定的抑菌作用，對(duì)沙門氏菌的抑制作用最強(qiáng)，對(duì)綠膿桿菌無抑制作用。本試驗(yàn)結(jié)果顯示沙蔥總黃酮對(duì)A549腫瘤細(xì)胞和綿羊偽狂犬病毒有一定的抑制作用。