王禹錕，郭婧玉，秦 喜，吳 婷

(牡丹江醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院口腔科，黑龍江 牡丹江 157000)

·論 著·

成釉細(xì)胞瘤中基質(zhì)金屬蛋白酶12和細(xì)胞角蛋白7的表達(dá)及其臨床病理學(xué)研究Δ

王禹錕*，郭婧玉，秦 喜，吳 婷#

(牡丹江醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院口腔科，黑龍江 牡丹江 157000)

目的：探討成釉細(xì)胞瘤中基質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP-12)和細(xì)胞角蛋白7(CK-7)的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義。方法：收集39例成釉細(xì)胞瘤患者的手術(shù)標(biāo)本，均經(jīng)組織病理證實(shí)，設(shè)為觀察組；同時(shí)，收集40例正?？谇火つそM織作為對(duì)照組。利用標(biāo)本制作石蠟切片，實(shí)施蘇木精-伊紅染色，并利用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法測(cè)定MMP12和CK7的表達(dá)。結(jié)果：MMP-12在對(duì)照組中無陽性表達(dá)(陽性表達(dá)率為0)，在觀察組中呈現(xiàn)出一定的陽性表達(dá)[陽性表達(dá)率為74.36%(29/39)]，2組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CK-7在對(duì)照組中的陽性表達(dá)率為2.50%(1/40)，顯著低于觀察組的61.54%(24/39)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)不同病理情況下的MMP-12與CK-7表達(dá)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示，隨著腫瘤的復(fù)發(fā)與惡變，MMP-12與CK-7的陽性表達(dá)水平相應(yīng)地不斷升高，病理程度越高，相應(yīng)的，MMP-12與CK-7的陽性表達(dá)率也越高，且組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：成釉細(xì)胞瘤中MMP-12和CK7會(huì)呈現(xiàn)出明顯的陽性表達(dá)，且與臨床病理情況之間存在密切的聯(lián)系，隨著腫瘤的復(fù)發(fā)與惡變，MMP-12與CK-7的陽性表達(dá)水平也不斷升高。

成釉細(xì)胞瘤； 基質(zhì)金屬蛋白酶； 細(xì)胞角蛋白； 病理學(xué)

成釉細(xì)胞瘤是一種口腔頜面部十分常見的腫瘤，具有很高的復(fù)發(fā)率，多會(huì)表現(xiàn)出局部侵襲性生物學(xué)行為[1]。分析成釉細(xì)胞瘤局部侵襲性原理，涉及到多方面的內(nèi)容[2-3]。本研究從成釉細(xì)胞瘤局部侵襲性相關(guān)因素入手，探討成釉細(xì)胞瘤中基質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP-12)和細(xì)胞角蛋白7(CK-7)在成釉細(xì)胞瘤組織的表達(dá)水平及其臨床意義，進(jìn)而從分子層面上解讀成釉細(xì)胞瘤局部侵襲性的機(jī)制，為成釉細(xì)胞瘤的診治提供更多的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料來源

收集39例成釉細(xì)胞瘤患者的手術(shù)標(biāo)本作為觀察組，均經(jīng)組織病理證實(shí)，其中男性患者20例、女性患者19例，中位年齡58.15歲；按照病理情況，將觀察組細(xì)分為原發(fā)性成釉細(xì)胞瘤組(n=13)、復(fù)發(fā)性成釉細(xì)胞瘤組(n=21)、惡性成釉細(xì)胞瘤(n=6)。同時(shí)，收集40例正?？谇火つそM織作為對(duì)照組，其中男性20例、女性20例，中位年齡59.35歲。觀察組與對(duì)照組參與者的性別、年齡等基線資料的均衡性較高，具有可比性。本研究的相關(guān)研究形式和內(nèi)容等均向醫(yī)院倫理學(xué)部門進(jìn)行匯報(bào)，接受審核，并經(jīng)批準(zhǔn)準(zhǔn)予實(shí)施。

1.2 方法

1.2.1 石蠟切片制作：每例標(biāo)本行4 μm連續(xù)切片4張，分別行蘇木精-伊紅染色，MMP-12與CK-7行免疫組化染色。

1.2.2 蘇木精-伊紅染色：切片常規(guī)脫蠟，二甲苯 Ⅰ、二甲苯 Ⅱ、100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ各10 min；95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精各10 min，蒸餾水沖洗；蘇木素染色1 min，自來水沖洗；1%鹽酸分化，自來水沖洗；常規(guī)酒精脫水，伊紅染色2 min；梯度70%、80%、90%、95%酒精脫水，100%酒精 Ⅰ、100%酒精Ⅱ各10 min，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.2.3 免疫組化染色鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法：利用3%甲醇-雙氧水于室溫(25 ℃)環(huán)境下對(duì)切片進(jìn)行孵育，孵育10 min后利用蒸餾水進(jìn)行洗滌；進(jìn)行微波抗原修復(fù)，并自然冷卻；待恢復(fù)至室溫(25 ℃)條件后，添加10%正常山羊血清，置于37 ℃環(huán)境下進(jìn)行反應(yīng)；添加一抗，置于4 ℃環(huán)境下過夜；過夜后利用0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗滌，添加生物素標(biāo)記的二抗進(jìn)行水??；添加0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗滌，并滴加過氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液(三抗)水?。灰?.001 mol/L磷酸鹽緩沖液洗滌后添加二氨基聯(lián)苯胺進(jìn)行顯色，并利用自來水對(duì)顯色予以終止；利用梯度酒精進(jìn)行脫水處理，添加二甲苯予以透明處理，常規(guī)中性樹膠封片。陰性對(duì)照片用0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液代替一抗，其余步驟同上。

1.2.4 結(jié)果判定：MMP-12陽性染色為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色顆粒狀物質(zhì)，CK-7陽性染色為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用EpiData 3.1.0軟件對(duì)各項(xiàng)數(shù)據(jù)結(jié)果予以完整輸入，并采用雙人錄入法，配合一致性檢驗(yàn)工具，以保證數(shù)據(jù)錄入的準(zhǔn)確性。數(shù)據(jù)錄入之后采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并將P<0.05設(shè)定為兩組數(shù)據(jù)之間經(jīng)比較差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的判定標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組組織中MMP-12的表達(dá)情況

經(jīng)檢測(cè)，MMP-12在對(duì)照組組織中無陽性表達(dá)，在觀察組組織中呈現(xiàn)出一定的陽性表達(dá)，兩組組織中MMP-12 陽性表達(dá)率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組組織中MMP-12的表達(dá)情況Tab 1 Expression of MMP-12 in different tissues of two groups

2.2 兩組組織中CK-7的表達(dá)情況

經(jīng)檢測(cè)，CK-7在對(duì)照組組織中的陽性表達(dá)率顯著低于觀察組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組組織中MMP-12的表達(dá)情況Tab 2 Expression of MMP-12 in different tissues of two groups

2.3 不同病理情況下MMP-12與CK-7的表達(dá)情況

對(duì)不同病理情況下MMPV12與CK-7的表達(dá)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示，隨著腫瘤的復(fù)發(fā)與惡變，MMP-12與CK-7的陽性表達(dá)水平不斷升高，病理程度越高，對(duì)應(yīng)的MMP-12與CK-7陽性表達(dá)率也越高，且組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，見表3。

表3 不同病理情況下MMP-12與CK-7的表達(dá)情況[例(%)]Tab 3 Expression of MMP-12 of two groups under different pathological conditions[cases(%)]

注：與原發(fā)性成釉細(xì)胞瘤組進(jìn)行組間比較，*P<0.05；與復(fù)發(fā)性成釉細(xì)胞瘤組進(jìn)行組間比較，#P<0.05

Note：vs. primary hemangioma group,*P<0.05；vs. recurrent hemangioma group,#P<0.05

3 討論

成釉細(xì)胞瘤是一種臨床上常見的牙源性上皮性良性腫瘤，是牙齒在發(fā)育過程中，由于發(fā)育牙體的組織退化不完全，殘留在頜骨組織里，在某些因素刺激下形成的[4]。成釉細(xì)胞瘤如果切除不徹底，復(fù)發(fā)率很高。多次復(fù)發(fā)易惡變。成釉細(xì)胞瘤侵襲性的機(jī)制是多因素的[4-5]。

隨著分子腫瘤學(xué)及相關(guān)學(xué)科的飛速發(fā)展，臨床開始積極地從分子學(xué)角度對(duì)相關(guān)的腫瘤侵襲復(fù)發(fā)機(jī)制進(jìn)行研究[6-7]。CK-7為人細(xì)胞角蛋白家族中一個(gè)十分重要的亞型，主要表達(dá)于腺上皮，包括胰腺、膀胱等，在胃腸腺上皮中一般不表達(dá)[8]。有研究結(jié)果顯示，部分胃腸道腺癌中CK-7表達(dá)陽性[9-10]。MMP-12屬于基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的巨噬細(xì)胞金屬?gòu)椥缘鞍酌?，作用底物為彈性蛋白、型膠原及纖維連接蛋白[11-12]。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移在很大程度上依賴于微環(huán)境的允許作用，各種蛋白水解酶在其中發(fā)揮了十分重要的作用。基質(zhì)金屬蛋白酶是一個(gè)大家族，在細(xì)胞的增殖、血管形成、腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用[13]。根據(jù)底物專一性，基質(zhì)金屬蛋白酶可分為膠原酶、明膠酶、基質(zhì)降解素和模型基質(zhì)金屬蛋白酶等4大類[14-15]。本研究結(jié)果顯示，MMP-12在對(duì)照組中無陽性表達(dá)，在觀察組中呈現(xiàn)出一定的陽性表達(dá)(陽性表達(dá)率為74.36%)；CK-7在對(duì)照組中的陽性表達(dá)率為2.50%，顯著低于觀察組的61.53%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本研究還對(duì)不同病理情況下MMP-12與CK-7的表達(dá)情況進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示，隨著腫瘤的復(fù)發(fā)與惡變，MMP-12與CK-7的陽性表達(dá)水平也呈現(xiàn)出不斷升高的趨勢(shì)，且組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。上述結(jié)果也表明，MMP-12與CK-7的表達(dá)與成釉細(xì)胞瘤的臨床生物學(xué)行為之間存在著一定的密切聯(lián)系。提示，臨床在對(duì)成釉細(xì)胞瘤的病理學(xué)情況進(jìn)行分析的時(shí)候，可以檢測(cè)上述指標(biāo)，以獲得更多的參考依據(jù)。

綜上所述，通過本研究可以初步證實(shí)，釉細(xì)胞瘤中MMP-12和CK-7會(huì)呈現(xiàn)出明顯的陽性表達(dá)，且其與臨床病理情況之間存在密切的聯(lián)系，隨著腫瘤的復(fù)發(fā)與惡變，相應(yīng)的MMP-12與CK-7的陽性表達(dá)水平也不斷升高。

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Expression of MMP-12 and CX-7 in Enamel Cells and Clinical Pathological Significance StudyΔ

WANG Yukun, GUO Jingyu, QIN Xi, WU Ting

(Dept.of Dental, the Second Affiliated Hospital of Mudanjiang Medical University, Heilongjiang Mudanjiang 157000, China)

OBJECTIVE：To probe into the expression and clinical pathological significance of MMP-12 and CX-7 in enamel cells. METHODS: The surgical specimens of 39 patients with tumor of the enamel collected and confirmed by histopathology were set as observation group. Meanwhile, 40 cases of normal tissue were collected as control group. The paraffin sections were made and HE staining was carried out. MMP-12 and CK-7 were determined by SP method. RESULTS: There was no positive expression of MMP-12 in normal tissues in control group(the positive rate was 0), yet the positive rate in observation group was 74.36%(29/39), with statistically significant difference(P<0.05). The positive rate of CK-7 in control group was 2.50%(1/40), significantly lower than that of observation group [61.54%(24/39)], with statistically significant difference(P<0.05). According to the statistical expression data of MMP-12 and CK-7 under different pathological conditions, with recurrence and malignant transformation of tumor, the expression level of MMP-12 and CK-7 increased, the positive rate were increasing with the degree of pathology, with statistically significant difference between two groups(P<0.05). CONCLUSIONS: MMP-12 and CK-7 in enamel cells shows positive expression significantly, which has close relationship between the clinical pathological conditions. With tumor recurrence and malignant transformation, the positive expression level of MMP-12 and CK-7 are increasing.

Hemangioma; Matrix metalloproteinases; Keratin; Pathology

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(No.12541851)

R739.81

A

1672-2124(2017)03-0309-03

2016-12-12)

*主治醫(yī)師。研究方向：成釉細(xì)胞瘤侵襲性相關(guān)因素研究。E-mail：52927597@qq.com

#通信作者：副主任醫(yī)師。研究方向：牙周病促進(jìn)因素相關(guān)研究。E-mail：wyukun456@126.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.03.007