周洪彬，黃煥森，何榮芝，鄧玉萍，王曉俏，吳鈿生

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院麻醉科，廣東 廣州 510260)

肢體缺血后處理聯(lián)合烏司他丁對(duì)大鼠腦缺血再灌注腦水腫的緩解作用研究Δ

周洪彬*，黃煥森，何榮芝，鄧玉萍，王曉俏，吳鈿生

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院麻醉科，廣東 廣州 510260)

目的：探討肢體缺血后處理聯(lián)合烏司他丁對(duì)大鼠腦缺血再灌注腦水腫的緩解作用。方法：選取健康雄性成年SD大鼠300只作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注組(IR)、烏司他丁組(Ul)、肢體缺血后處理組(Lp)、肢體缺血后處理聯(lián)合烏司他丁組(LpUl)。采用線栓閉塞大腦中動(dòng)脈法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型；烏司他丁于腦缺血2 h后再灌注即刻尾靜脈注射給藥；肢體缺血后處理在腦缺血1.5 h后進(jìn)行，即結(jié)扎5 min，再灌注5 min，重復(fù)3次。測(cè)定五組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦梗死體積分?jǐn)?shù)、腦水腫程度、腦組織水通道蛋白4的表達(dá)、腦組織細(xì)胞凋亡等指標(biāo)。結(jié)果：IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦梗死體積分?jǐn)?shù)均依次減少，且兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與Sham組大鼠比較，IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠缺血側(cè)腦含水量均明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠組內(nèi)腦缺血2 h后再灌注6、12、24 h時(shí)缺血側(cè)腦含水量的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與Sham組大鼠比較，IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠缺血側(cè)腦組織水通道蛋白4的表達(dá)均明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與IR組大鼠比較，Ul、Lp、LpUl組大鼠的凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率均明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：肢體缺血后處理聯(lián)合烏司他丁治療，可減輕大鼠腦缺血再灌注腦水腫。

烏司他?。?肢體缺血后處理； 腦缺血再灌注； 腦水腫； 水通道蛋白4； 大鼠

烏司他丁是一種糖蛋白，可從尿液中分離純化得到，對(duì)多種Kunitz型蛋白酶和脂水解酶均有抑制作用[1]。相關(guān)研究結(jié)果表明，烏司他丁對(duì)手術(shù)刺激產(chǎn)生的器官損傷具有明顯的保護(hù)作用，可改善微循環(huán)狀態(tài)，調(diào)節(jié)患者術(shù)后凝血功能。理論上，肢體缺血后處理聯(lián)合烏司他丁治療可減輕腦缺血再灌注損傷[2-3]，但目前尚無(wú)明確報(bào)道。本研究通過(guò)建立大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型，觀察肢體缺血后處理聯(lián)合烏司他丁對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦水腫的緩解作用，及對(duì)大鼠腦組織水通道蛋白4(AQP4)表達(dá)水平的影響[4]，為圍術(shù)期腦缺血再灌注損傷后腦水腫的防治提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 藥品與試劑

烏司他丁注射液(廣東天普生化醫(yī)藥公司)；鼠抗AQP4(Abcam公司)；鼠抗β肌動(dòng)蛋白(Abcam公司)；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG(Abcam公司)；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(Sigma公司)；TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試驗(yàn)盒(上海ROCHE公司)；2，3，5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride，TTC)和二氨基聯(lián)苯胺或聯(lián)苯二胺(DAB)顯色試劑盒(博士德生物工程公司)；AR-2140型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；5427R型低溫高速離心機(jī)(Eppendorf中國(guó)有限公司)；多功能酶標(biāo)儀(Sigma中國(guó)有限公司)；-80 ℃超低溫冰柜(Haier公司)；微量移液槍德(Eppendorf公司)；Western Blotting電泳設(shè)備(通用電氣公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

300只健康雄性成年SD大鼠(清潔級(jí))，體質(zhì)量235～250 g，自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)入。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組

將所有大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注組(IR)、烏司他丁組(Ul)、肢體缺血后處理組(Lp)、肢體缺血后處理聯(lián)合烏司他丁組(LpUl)等五組，每組60只。根據(jù)缺血2 h后再灌注時(shí)間，將每組大鼠隨機(jī)分為三個(gè)亞組(分別為再灌注6、12、24 h)，每組20只。

2.2 動(dòng)物模型的建立

Sham組大鼠只分離頸總動(dòng)脈與頸外動(dòng)脈，即不做栓塞，僅暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈(common carotid artery，CCA)、頸外動(dòng)脈(external carotid artery，ECA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(internal carotid artery，ICA)，然后逐層縫合。IR、Ul、Lp、LpUl組大鼠參照Z(yǔ)ea-Longa等線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型：給予大鼠水合氯醛腹腔注射麻醉，于顱骨中線旁右側(cè)處鉆取直徑1 mm小孔，深度3 mm，探頭插入至皮層表面，采用激光多普勒血流灌注成像系統(tǒng)監(jiān)測(cè)血流；將大鼠仰臥固定于操作臺(tái)，于頸正中切口，分離前頸部肌肉組織，暴露右側(cè)CCA、ECA和ICA，分離CCA周邊神經(jīng)叢，CCA預(yù)留單股手術(shù)縫線，分離ICA顱外分支，用微動(dòng)脈夾夾閉；再用微動(dòng)脈夾夾閉CCA和ICA，將4—0號(hào)尼龍外科手術(shù)縫合線由ECA切口處插入ICA，用縫線結(jié)扎ECA防止出血，松開(kāi)微動(dòng)脈夾，將尼龍線送入顱內(nèi)后，松開(kāi)CCA和翼腭突動(dòng)脈上動(dòng)脈夾，至監(jiān)測(cè)到皮層腦血流量驟降，完成局部腦缺血模型構(gòu)建[5-6]。Ul組大鼠于腦缺血2 h再灌注即刻尾靜脈注射烏司他丁10萬(wàn)U/kg(采用0.9%氯化鈉溶液稀釋)；Lp組大鼠行肢體缺血后處理，即腦缺血1.5 h后，用彈性止血帶于雙后肢中、上1/3部位結(jié)扎雙后肢，以后肢遠(yuǎn)端表面皮膚溫度降低、顏色呈絳紫色為標(biāo)準(zhǔn)判斷后肢缺血成功，每次結(jié)扎5 min，再灌注5 min，重復(fù)3次；LpUl組大鼠在肢體缺血后處理的基礎(chǔ)上，于腦缺血2 h再灌注即刻尾靜脈注射烏司他丁10萬(wàn)U/kg(采用0.9%氯化鈉溶液稀釋)。

2.3 觀察指標(biāo)與療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦水腫程度檢測(cè)、腦梗死體積檢測(cè)、AQP4蛋白質(zhì)表達(dá)Western Blotting印跡法檢測(cè)和TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)。

2.3.1 神經(jīng)功能缺損評(píng)分：大鼠缺血2 h開(kāi)始再灌注后且已經(jīng)清醒，參考Longa評(píng)分法對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)價(jià)。0分，無(wú)神經(jīng)損傷癥狀；1分，不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪；2分，向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈；3分，向?qū)?cè)傾倒；4分，不能自發(fā)行走、意識(shí)喪失；1—3分為造模成功。大鼠未達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)、麻醉未醒、經(jīng)解剖發(fā)現(xiàn)存在腦蛛網(wǎng)膜下腔出血均視為模型建立失敗。

2.3.2 腦梗死體積檢測(cè)：完成腦缺血2 h再灌注后，每個(gè)亞組隨機(jī)取5只大鼠，通過(guò)TTC染色法進(jìn)行腦梗死體積檢測(cè)。大鼠過(guò)度麻醉處死后，快速取出腦組織，除去大腦外部分(嗅球、小腦、低位腦干等)，低溫冷藏10 min，將腦組織置于切片槽中，以2 mm間隔行冠狀連續(xù)切片；將腦切片置于10 g/L(約2%)的TTC溶液中，經(jīng)37 ℃避光恒溫溫育30 min，取出后，給予40 g/L的多聚甲醛固定1 h后，梗死灶區(qū)呈白色，正常組織呈紅色。拍照后，采用Auto CAD圖象處理軟件計(jì)算腦梗死相關(guān)數(shù)值[7]，得到不同組大鼠缺血側(cè)梗死區(qū)域的體積及梗死區(qū)域占大腦半球的百分比(腦梗死體積分?jǐn)?shù))。

2.3.3 腦水腫程度測(cè)定：采用干濕質(zhì)量法于大鼠腦缺血再灌注損傷后不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定大腦半球不同區(qū)域(皮質(zhì)區(qū)、皮質(zhì)下區(qū))的水腫程度。每個(gè)亞組隨機(jī)取5只大鼠，開(kāi)顱后取損傷側(cè)大腦半球，準(zhǔn)確稱取記錄濕質(zhì)量，經(jīng)24 h烘箱(100～110 ℃)干燥至質(zhì)量恒定，稱取記錄干質(zhì)量，以Sham組為對(duì)照，比較IR、Ul、Lp、LpUl組大鼠腦水腫程度的變化。公式為腦水腫程度(%)=(濕質(zhì)量-干質(zhì)量)/濕質(zhì)量×100%[8]，計(jì)算大鼠腦各部分的水腫程度，以每100 g濕質(zhì)量腦組織中所含水的質(zhì)量(g)表示，即腦含水量。

2.3.4 腦內(nèi)AQP4表達(dá)水平檢測(cè)：采用蛋白免疫印跡法(Western Blot，WB)半定量檢測(cè)大鼠腦組織AQP4表達(dá)水平：每個(gè)亞組隨機(jī)取5只大鼠，取各組大鼠梗死側(cè)腦皮質(zhì)，在超低溫度下(-80 ℃)保存4 h，取出凍存后組織，研磨腦組織后將組織勻漿加入細(xì)胞裂解液中，在4 ℃、10 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心6 min，取上清液待用；根據(jù)BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，使用酶標(biāo)儀測(cè)定AQP4濃度[9]。計(jì)算出WB反應(yīng)體系加樣量，保證各體系上樣等量的樣品蛋白，經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)膜，逐步孵育第一抗體及對(duì)應(yīng)第二抗體并進(jìn)行免疫反應(yīng)，轉(zhuǎn)移至暗室內(nèi)操作，采用電化學(xué)發(fā)光試劑盒發(fā)光，X線片經(jīng)過(guò)特定時(shí)間顯影定影，晾干相應(yīng)X線底片后(或凝膠成像儀)分析。根據(jù)之前測(cè)定的蛋白濃度及β肌動(dòng)蛋白參考得出AQP4蛋白的相對(duì)表達(dá)水平[10]。

2.3.5 腦細(xì)胞凋亡數(shù)檢測(cè)：腦缺血2 h再灌注后，每個(gè)亞組隨機(jī)取5只大鼠，按上述步驟制成腦組織切片后采用DNA原位末端標(biāo)記法(TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡數(shù)：(1)厚度5 μm的腦切片經(jīng)二甲苯潤(rùn)洗2次，每次約10 min，然后經(jīng)梯度磷酸鹽緩沖溶液(PBS)-乙醇沖洗2次，每次2 min；(2)室溫(25 ℃)下，玻片標(biāo)本經(jīng)蛋白酶K(20 μg/ml)消化處理45 min；(3)玻片標(biāo)本經(jīng)PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min，后加入TUNEL反應(yīng)混合液50 μl(陰性對(duì)照組加50 μl熒光標(biāo)記dUTP)，37 ℃下濕盒避光反應(yīng)1 h；(4)PBS緩沖液沖洗，玻片干燥后加POD轉(zhuǎn)化劑50 μl于標(biāo)本上，37 ℃下濕盒避光孵育30 min；(5)PBS緩沖液沖洗后，在玻片標(biāo)本上加DAB反應(yīng)底物50 μl，37 ℃下反應(yīng)30 min，采用蘇木精復(fù)染；(6)進(jìn)行脫水、透明、封片、光鏡觀察。細(xì)胞核中出現(xiàn)的棕黃染色顆粒代表TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。對(duì)單張切片標(biāo)本進(jìn)行5次單獨(dú)的油鏡視野觀察計(jì)數(shù)(×400)，得出單張切片樣本的陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)。最終TUNEL陽(yáng)性率即為T(mén)UNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 五組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分及腦梗死體積比較

Sham組大鼠無(wú)神經(jīng)功能缺損及腦梗死出現(xiàn)。IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦梗死體積分?jǐn)?shù)依次減少，兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

組別神經(jīng)功能缺損評(píng)分/分腦梗死體積分?jǐn)?shù)/%Sham組(n=5)00IR組(n=5)2.62±0.3943.21±2.86Ul組(n=5)2.34±0.3536.83±2.37Lp組(n=5)1.36±0.2228.76±1.54LpUl組(n=5)1.19±0.1427.53±1.38

3.2 五組大鼠腦水腫程度比較

與Sham組大鼠比較，IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠缺血側(cè)腦含水量均明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠組內(nèi)腦缺血2 h后再灌注6、12、24 h時(shí)缺血側(cè)腦含水量的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2；而其健康側(cè)腦含水量的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠缺血側(cè)腦含水量隨再灌注時(shí)間增加而呈上升趨勢(shì)。

組別再灌注時(shí)間皮質(zhì)區(qū)皮質(zhì)下區(qū)水腫程度/%BBB通透率/(μg/g)水腫程度/%BBB通透率/(μg/g)Sham組(n=5)無(wú)76.53±1.256.94±0.2978.41±1.787.55±0.49IR組(n=5)6h83.26±2.2526.26±0.7586.38±2.2630.32±0.8112h85.83±2.4339.68±0.9190.03±1.9442.17±1.4624h89.32±2.7259.36±1.2793.24±2.1365.72±2.43Ul組(n=5)6h80.37±1.9621.42±0.9384.27±1.5626.11±0.6212h82.63±1.7336.55±1.1387.12±1.4941.83±1.2524h85.93±1.8655.81±1.3890.75±2.0560.84±2.17Lp組(n=5)6h79.14±1.5718.74±1.0480.92±1.2122.36±1.3412h80.72±1.8531.60±0.8382.45±1.6238.02±1.5124h82.66±1.5750.37±1.2585.35±1.8656.34±1.86LpUl組(n=5)6h77.56±1.6215.17±0.8578.84±1.2418.71±1.3412h78.87±1.4829.06±1.1380.13±1.1334.25±1.2624h79.67±1.8245.25±1.4681.62±1.5251.37±1.72

3.3 五組大鼠AQP4表達(dá)量比較

IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠在腦缺血2 h后再灌注6、12、24 h時(shí)，缺血側(cè)腦組織中AQP4的表達(dá)量均較Sham組明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖1、表3；五組大鼠健康側(cè)腦組織AQP4表達(dá)水平的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠缺血側(cè)腦組織中AQP4表達(dá)水平隨再灌注時(shí)間的增加而呈上升趨勢(shì)，與缺血側(cè)腦含水量的變化趨勢(shì)一致，對(duì)缺血側(cè)腦組織中AQP4表達(dá)水平、缺血側(cè)腦含水量的數(shù)據(jù)進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，腦含水量和AQP4表達(dá)水平呈正相關(guān)性(P=0.037)，相關(guān)性顯著。

圖1 五組大鼠灌注后缺血側(cè)腦組織AQP4蛋白表達(dá)比較Fig 1 Comparison of AQP4 expression after cerebral ischemia reperfusion in the ischemic brain between five groups

組別6h12h24hSham組(n=5)0.038±0.0170.038±0.0150.039±0.017IR組(n=5)0.098±0.0230.115±0.0350.135±0.041Ul組(n=5)0.083±0.0250.095±0.0320.112±0.038Lp組(n=5)0.057±0.0190.064±0.0260.078±0.017LpUl組(n=5)0.052±0.0120.059±0.0160.071±0.020

3.4 五組大鼠腦細(xì)胞凋亡情況比較

Sham組大鼠可見(jiàn)到極少量的凋亡細(xì)胞，IR、Ul、Lp和LpUl組大鼠凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率分別為(26.98±2.25)%、(23.59±1.78)%、(18.25±1.83)%、(17.23+2.02)%，均明顯高于Sham組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。IR組大鼠凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率明顯高于Ul、Lp、LpUl組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與Sham組大鼠比較，Lp、LpUl組大鼠凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率均明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖2。

A.假手術(shù)組；B.肢體缺血后處理組；C.肢體缺血后處理聯(lián)合烏司他丁組A.sham operation group(sham), B. limb ischemia postconditioning group(Lp), D. limb ischemia postconditioning combined with ulinastatin group(LpUl)圖2 大鼠腦組織細(xì)胞凋亡情況比較Fig 2 Comparison of cells apoptosis in rats brain tissues

4 討論

本研究采用成熟的線栓法制備SD大鼠大腦中動(dòng)脈局灶性腦缺血再灌注模型，探討了單次尾靜脈注射低劑量烏司他丁聯(lián)合肢體缺血后處理對(duì)腦缺血再灌注損傷的協(xié)同抵抗作用。根據(jù)臨床上烏司他丁體表面積用藥劑量換算，烏司他丁注射劑量選擇10萬(wàn)U/kg。烏司他丁的作用機(jī)制可能與其抑制炎癥因子釋放、抑制部分凝血因子功能、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞而間接調(diào)節(jié)滲透壓，從而減輕腦水腫發(fā)生程度等有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，烏司他丁靜脈注射、肢體缺血后處理均可在一定程度上改善腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能缺陷評(píng)分，減輕腦水腫發(fā)生程度，縮小腦梗死面積，降低腦組織中水通道蛋白AQP4表達(dá)量，減少腦細(xì)胞凋亡，而兩者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，上述指標(biāo)均可明顯改善[11]。肢體缺血后處理聯(lián)合烏司他丁的作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)而減輕腦缺血再灌注損傷，其中烏司他丁可通過(guò)抑制炎癥因子釋放間接刺激機(jī)體應(yīng)激保護(hù)，減少炎癥因子的表達(dá)及炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，減輕組織炎性損傷[12-13]；而肢體缺血后處理則通過(guò)誘導(dǎo)內(nèi)源性κ阿片受體激動(dòng)劑釋放，激活線粒體ATP敏感性鉀通道，減輕線粒體內(nèi)鈣超載，抑制線粒體滲透性轉(zhuǎn)換孔發(fā)生滲透性轉(zhuǎn)換，從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用，還能促進(jìn)腦缺血區(qū)熱休克蛋白70的表達(dá)，抑制腦缺血再灌注大鼠腦皮層神經(jīng)元凋亡[14-15]。

綜上所述，肢體缺血后處理聯(lián)合烏司他丁治療，可有效減輕腦缺血再灌注大鼠腦水腫程度，改善神經(jīng)功能缺陷，縮小腦梗死面積。

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Study on Remission Effects of Limb Ischemia Postconditioning Combined with Ulinastatin on Brain Water Content Induced by Cerebral Ischemia/Reperfusion Injury in RatsΔ

ZHOU Hongbin, HUANG Huansen，HE Rongzhi，DENG Yuping，WANG Xiaoqiao，WU Diansheng

(Dept.of Anesthesiology, the Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangdong Guangzhou 510260, China)

OBJECTIVE：To probe into the remission effects of limb ischemia postconditioning combined with ulinastatin on brain water content induced by cerebral ischemia/reperfusion injury in rats. METHODS: 300 healthy male SD rats were randomly selected to be divided into sham operation group(sham), ischemia reperfusion group(IR), ulinastatin group(Ul), limb ischemia postconditioning group(Lp) and limb ischemia postconditioning combined with ulinastatin group(LpUl). The focal cerebral ischemia/reperfusion rat model was set up by using the middle cerebral artery occlusion method. After cerebral ischemia of 2 h, ulinastatin was administrated by instillation in tail vein injection; the ischemic postconditioning was conducted after ischemia of 1.5 h, namely, ligation of 5 min with instillation of 5 min, for repetition of three times. The neurological deficit score, cerebral infarction volume, brain water content, Aquaporin-4(AQP4) expression and neuron apoptosis were detected. RESULTS: The neurological deficit score, cerebral infarction volume decreased gradually in IR, Ul, Lp and LpUl group, with statistically significant difference between two groups(P<0.05). Compared with Sham group, the ischemic side of brain water content in IR, Ul, Lp and LpUl group increased significantly, with statistically significant difference(P<0.05). There was statistically significant difference among IR, Ul, Lp and LpUl group in ischemic side of brain water content with instillation of 6 h, 12 h and 24 h after ischemia of 2 h(P<0.05). Compared with Sham group, the AQP4 expression in IR, Ul, Lp and LpUl group increased significantly, with statistically significant difference(P<0.05). Compared with IR group, the positive rate of apoptosis cells in IR, Ul, Lp and LpUl group decreased significantly, with statistically significant difference(P<0.05). CONCLUSIONS: Limb ischemia postconditioning combined with ulinastatin can relieve the cerebral injury induced by cerebral ischemia reperfusion.

Ulinastatin; Limb ischemia postconditioning; Cerebral ischemia reperfusion; Brain water content; Aquaporin-4; Rats

廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技一般引導(dǎo)項(xiàng)目(No：20151A010095)

R965

A

1672-2124(2017)03-0314-04

2016-11-17)

*主治醫(yī)師。研究方向：麻醉與組織器官保護(hù)。E-mail：maxiahongbin@163.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.03.009