曹福羊，郭永馨，郭舒婷，周志康，曹江北，仝 黎，米衛(wèi)東

1解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心麻醉科，北京 100853；2解放軍總醫(yī)院第六醫(yī)學(xué)中心麻醉科，北京100048

全身麻醉應(yīng)用于外科手術(shù)已有近180年的歷史，關(guān)于全麻藥物相關(guān)分子機制的研究已有諸多進展，然而我們對麻醉藥物如何導(dǎo)致意識喪失的神經(jīng)生物機制還知之甚少［1］。關(guān)于全麻機制的研究對麻醉領(lǐng)域及神經(jīng)科學(xué)意識研究都至關(guān)重要，神經(jīng)環(huán)路研究發(fā)現(xiàn)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)多種神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)以及多個核團之間形成的錯綜復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，參與調(diào)節(jié)麻醉-覺醒意識狀態(tài)的轉(zhuǎn)換［2］。因此，神經(jīng)環(huán)路研究成為解析全身麻醉機制的關(guān)鍵。

有研究報道，藍斑核、中腦腹側(cè)被蓋區(qū)、腹外側(cè)視前區(qū)、中縫背核等參與麻醉-覺醒的調(diào)控［3-6］。丘腦未定帶（ZI）是位于丘腦網(wǎng)狀核旁的丘腦下核團，富集γ-氨基丁酸（GABA）能神經(jīng)元，與諸多大腦區(qū)域形成相互連接，并參與調(diào)控意識、睡眠、注意力等功能［7-9］，但其是否參與麻醉-覺醒的調(diào)控尚不清楚。

丙泊酚和七氟醚作為臨床中常用的靜脈麻醉藥和吸入麻醉藥，其作用機制不完全相同，有研究證實七氟醚、丙泊酚能夠誘導(dǎo)連續(xù)的α震蕩和慢波震蕩，可能提示其具有共同的分子和神經(jīng)環(huán)路機制誘導(dǎo)無意識狀態(tài)［10,11］，兩種麻醉藥物是否通過相同的神經(jīng)環(huán)路機制發(fā)揮麻醉效應(yīng)有待研究，揭示不同麻醉藥物通過腦區(qū)核團發(fā)揮的共同效應(yīng)將對理解麻醉誘導(dǎo)意識消失的機制有重要意義。

本研究通過利用特異性轉(zhuǎn)基因病毒轉(zhuǎn)染，結(jié)合化學(xué)遺傳學(xué)及光遺傳學(xué)的方法選擇性的激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元，驗證其在七氟醚及丙泊酚麻醉-覺醒中的作用，同時記錄腦電（EEG）信號，從而證實ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元可能是介導(dǎo)這兩種藥物促進全麻意識消失的關(guān)鍵核團。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

雄性C57BL/6J小鼠（8～10）周齡，20～23 g，購于解放軍總醫(yī)院實驗動物中心。飼養(yǎng)在解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心麻醉科實驗動物室，室溫22±2 ℃，12/12 h明暗循環(huán)，自由進食水。行為學(xué)測試在北京時間09∶00～18∶00之間進行。所有實驗程序和操作都符合《實驗動物和動物實驗管理條例》。注射病毒后的4～6周內(nèi)進行翻正反射和EEG監(jiān)測。實驗方案得到了動物實驗倫理委員會的批準（SQ 2021139），并根據(jù)本研究所的動物實驗指南進行。

1.2 實驗動物分組

將48只雄性小鼠用隨機數(shù)字表法隨機分為8組。七氟醚、丙泊酚兩種不同麻醉藥物研究各分4組，利用立體定位技術(shù)進行小鼠ZI腦區(qū)不同病毒注射造模。研究七氟醚麻醉時，化學(xué)遺傳學(xué)實驗分為2 組，實驗組（hM3Dq組，n=6）注射攜帶hM3Dq基因片段的腺相關(guān)病毒，對照組（mCherry組，n=6）注射僅攜帶mCherry基因片段的對照病毒。光遺傳學(xué)實驗分為兩組，實驗組（ChR2 組，n=6）注射攜帶ChR2 基因片段的腺相關(guān)病毒，對照組(GFP組，n=6)注射僅攜帶GFP基因片段的對照病毒。研究丙泊酚麻醉時分組方式同上，化學(xué)遺傳學(xué)實驗分為2 組，實驗組（hM3Dq 組，n=6）注射攜帶hM3Dq基因片段的腺相關(guān)病毒，對照組（mCherry組，n=6）注射僅攜帶mCherry基因片段的對照病毒。光遺傳學(xué)實驗分為兩組，實驗組（ChR2 組，n=6）注射攜帶ChR2基因片段的腺相關(guān)病毒，對照組（GFP組，n=6）注射僅攜帶GFP基因片段的對照病毒。

1.2 立體定位手術(shù)

應(yīng)用2%戊巴比妥鈉（40 mg/kg～50 mg/kg）腹腔注射麻醉和1%羅哌卡因頭部局部麻醉后，將小鼠頭部固定于立體定位儀(RWD，深圳)中，使用恒溫毯將體溫維持在35～36 ℃。使用微注射泵（Harvard Apparatus）及10 μL微注射器將病毒以30 nL/min的速度注射至目的核團。總注射量為100 nL。注射完成后，靜置10 min后取出注射針。然后將3個腦電電極植入顱骨，隨后將直徑200μm的陶瓷插芯光纖放置到注射光遺傳學(xué)病毒的目標腦區(qū)上方100μm。完成所有步驟后，將稀釋的牙科水泥緩慢涂抹在顱骨表面，以固定腦電電極和光纖。微注射坐標為：ZI，AP-1.75，ML+1.0，DV-4.4；三個腦電電極坐標分別為AP+1.0 mm，ML-2.0 mm；Ap-4.0，ML-2.5 mm；AP-4.0 mm，ML+2.5 mm。

1.3 麻醉誘導(dǎo)與覺醒時間計算

翻正反射圓桶通過桶上方中間的圓孔與麻醉氣體監(jiān)測儀連接（氧氣流量：2 L/min，氧氣濃度：40%）。首先讓小鼠在翻正反射桶中自由活動15min，然后給予2.0%七氟醚吸入麻醉或2%丙泊酚（100 mg/kg）腹腔注射麻醉。評估翻正反射，麻醉開始后每15 s將桶旋轉(zhuǎn)180度。如果小鼠處于異常姿勢（四肢向上），不能主動恢復(fù)到正常姿勢，則認為翻正反射消失（LORR），該時間定義為麻醉誘導(dǎo)時間。LORR后七氟醚麻醉繼續(xù)吸入七氟醚維持麻醉，30 min后關(guān)閉揮發(fā)罐維持氧濃度，并監(jiān)測翻正反射。如果小鼠自動恢復(fù)正常姿勢（四肢觸地），則認為恢復(fù)了翻正反射。從麻醉終止到恢復(fù)翻正反射（RORR）的時間定義為麻醉蘇醒時間。丙泊酚麻醉則誘導(dǎo)后持續(xù)吸入40%氧氣觀察至其覺醒，從LORR到RORR時間定義為麻醉蘇醒時間。

1.4 腦電監(jiān)測記錄

翻正反射實驗結(jié)束后5 d，將小鼠置入桶內(nèi)連接腦電電極至監(jiān)測儀，應(yīng)用信號放大系統(tǒng)（AD）和LabChart軟件(Analog Devices)監(jiān)測腦電活動。以250 Hz的采樣率采集EEG信號，小鼠自由活動15 min后開始1.5%七氟醚吸入麻醉，穩(wěn)定20 min后給予光刺激，持續(xù)2 min（圖1），麻醉總時長為30 min。使用MatLab（R2014a,MathWorks）進行分析。消除任何帶有偽影的數(shù)據(jù)，過濾掉50 Hz的交流干擾，提取0.3 Hz～50 Hz的數(shù)據(jù)進行分析。計算0.3 Hz～50 Hz范圍內(nèi)的功率譜密度，分別分析兩組小鼠光刺激時與光刺激前后δ（0.3 Hz～4 Hz）、θ（4 Hz～10 Hz）、α（10 Hz～15 Hz）、β（15 Hz～25 Hz）和γ（25 Hz～50 Hz）這5個頻段在總功率譜中各占的百分比。

圖1 腦電監(jiān)測方法示意圖Fig. 1 Schematic diagram of the timeline of EEG monitoring in mice with optogenetic activation of the GABAergic neurons of ZI receiving 1.5%sevoflurane anesthesia

1.5 化學(xué)遺傳學(xué)技術(shù)

研究七氟醚麻醉時，實驗組（hM3Dq組，n=6）將腺相關(guān)病毒（rAAV2/9-EF1a-GAD67-hM3Dq-mCherry-WPRE-pA）注射到ZI區(qū)（圖2A），以表達hM3Dq受體，從而能夠選擇性的激活ZI區(qū)GAGA能神經(jīng)元。對照組（mCherry 組，n=6）注射空白病毒（rAAV2/9-EF1a-GAD67-mCherry-WPRE-pA）。經(jīng)過4 周的轉(zhuǎn)染與表達，腹腔注射1 mg/mL CNO（1 mg/kg）45 min后將小鼠置于圓桶中適應(yīng)環(huán)境（圖2B），15 min 后應(yīng)用2%七氟醚麻醉小鼠，記錄LORR與RORR時間。

圖2 研究七氟醚麻醉時，化學(xué)遺傳學(xué)方法示意圖Fig2 Schematic diagram of chemogenetic methods for studying sevoflurane anesthesia.A:Virus injection in the ZI. B: Righting reflex detection in the anesthesia barrel (upper) and detection of anesthesia induction and emergence time through chemogenetic activation of the ZI in 2.0%sevoflurane anesthesia(lower).

研究丙泊酚麻醉時，實驗組（hM3Dq組，n=6）將腺相關(guān)病毒（rAAV2/9-EF1a-GAD67-hM3Dq-mCherry-WPRE-pA）注射到ZI 區(qū)（圖3A），可以選擇性激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元。對照組（mCherry組，n=6）注射空白病毒（rAAV2/9-EF1a-GAD67-mCherry-WPRE-pA）。腹腔注射1 mg/mL CNO（1 mg/kg），45 min 后將小鼠置于桶中適應(yīng)環(huán)境（圖3B），15 min后應(yīng)用2%丙泊酚（100 mg/kg）腹腔注射麻醉小鼠，記錄LORR與RORR時間。

圖3 研究丙泊酚麻醉時，化學(xué)遺傳學(xué)方法示意圖Fig. 3 Schematic diagram of chemogenetic methods for studying propofol anesthesia.A:Virus injection in the ZI.B:Righting reflex detection in the anesthesia barrel(upper)and detection of anesthesia induction and emergence time through chemogenetic activation of the ZI in 2.0%propofol ip anesthesia(lower).

1.6 光遺傳學(xué)技術(shù)

研究七氟醚麻醉時，實驗組（CHR2組，n=6）將腺相關(guān)病毒（rAAV2/9-EF1a-GAD67-ChR2-GFP-WPREpA）注入ZI區(qū)，陶瓷插芯插入病毒注射區(qū)上方100μm（圖4A）。對照組（GFP組，n=6）注射空白病毒（rAAV2/9-EF1a-GAD67-GFP-WPRE-pA）。小鼠在光遺傳病毒轉(zhuǎn)染和表達4周后進行檢測。在光刺激之前，小鼠在桶內(nèi)自由活動適應(yīng)桶內(nèi)環(huán)境，15 min后開始2%七氟醚麻醉，同時應(yīng)用473-nm藍色激光刺激（5 mW、20 Hz、持續(xù)時間20 ms、1s-on/1s-off周期）并記錄麻醉誘導(dǎo)時間。5 d后，我們對小鼠進行麻醉蘇醒時間測定，在吸入2%七氟醚麻醉30min后關(guān)閉揮發(fā)罐，同時進行光刺激以記錄麻醉蘇醒時間（圖4B）。

圖4 研究七氟醚麻醉時，光遺傳學(xué)方法示意圖Fig. 4 Schematic diagram of optogenetic experiment for studying sevoflurane anesthesia. A: Virus injection in the ZI. B: Righting reflex detection in the anesthesia barrel (upper) and detection of anesthesia induction and emergence time through optogenetic activation the GABAergic neurons of ZI in 2.0%sevoflurane anesthesia(lower).

研究丙泊酚麻醉時，實驗組（ChR2 組，n=6）將腺相關(guān)病毒注入ZI 區(qū)，陶瓷插芯插入病毒注射區(qū)上方100μm（圖5A）。對照組（CON組，n=6）注射空白病毒（rAAV2/9-EF1a-GAD67-GFP-WPRE-pA）。經(jīng)過4周的轉(zhuǎn)染與表達，將小鼠置于桶中適應(yīng)環(huán)境，15 min后開始2%丙泊酚（100 mg/kg）腹腔注射麻醉小鼠，同時應(yīng)用473-nm藍色激光刺激（5 mW、20 Hz、持續(xù)時間20 ms、1s-on/1s-off周期）。并記錄麻醉誘導(dǎo)時間，LORR后則持續(xù)行光刺激（5 mW、20 Hz、持續(xù)時間20 ms、5s-on/25s-off周期）并記錄麻醉蘇醒時間（圖5B）。

圖5 研究丙泊酚麻醉時，光遺傳學(xué)方法示意圖Fig. 5 Schematic diagram of optogenetic experiment for studying propofol anesthesia. A: Virus injection in the ZI. B: Righting reflex detection in the anesthesia barrel (upper) and detection of anesthesia induction and emergence time through optogenetic activation of the ZI in 2.0%propofol ip anesthesia(lower).

1.7 免疫熒光染色

應(yīng)用1×PBS將腦切片連續(xù)清洗3次（5 min/次）以去除OCT，應(yīng)用BSA室溫孵育30 min，然后應(yīng)用稀釋后的一 抗GABA antibody（1:500，GeneTex,GTX125988,Rabbit）、Anti-c-fos antibody（1:1000，Abcam,ab208942,mouse）4 ℃孵育過夜，應(yīng)用1×PBS清洗一抗（連續(xù)3 次，5 min/次）。添加二抗（1∶200；Alexa Fluor488標記山羊抗小鼠lgG、Alexa Fluor 488標記山羊抗兔IgG、Cy3 標記驢抗小鼠IgG、Cy3 標記驢抗兔IgG（武漢塞維爾生物科技有限公司1），在室溫下避光孵育2 h。之后再次應(yīng)用1×PBS清洗。應(yīng)用DAPI覆蓋載玻片，15 min 后，在熒光顯微鏡上拍攝圖片（DP73,Olympus,Japan）。進行顯微鏡分析的實驗人員對分組情況實施盲法。

1.8 統(tǒng)計分析

統(tǒng)計分析繪圖軟件GraphPad 采用Prism 7.0對行為學(xué)結(jié)果和免疫熒光計數(shù)進行分析。各組間比較采用單因素方差分析Bonferroni's方差分析和多重比較檢驗。兩組間比較應(yīng)用t檢驗。數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 化學(xué)遺傳學(xué)激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元能夠促進七氟醚的麻醉誘導(dǎo)時間

腹腔注射CNO后2 h斷頭取腦，進行免疫熒光染色，結(jié)果顯示，與mCherry組比hM3Dq組ZI區(qū)c-fos表達顯著增加（P<0.0001，圖6A右）。免疫熒光染色顯示病毒在ZI 區(qū)成功轉(zhuǎn)染（圖6B）。與mCherry 組比hM3Dq組麻醉誘導(dǎo)時間顯著縮短（P<0.05，圖6C左），麻醉覺醒時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，圖6C右）。

圖6 通過化學(xué)遺傳學(xué)方法激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元促進七氟醚麻醉誘導(dǎo)Fig. 6 Chemogenetic activation of ZI GABAergic neurons accelerates sevoflurane anesthesia induction. A: Left,Co-labelled immunofluorescence of virus autofluorescence (mCherry,red) and c-fos (green);right,the propotion of GABAergic neurons co-expressing c-fos/mCherry in the hM3Dq group is significantly higher.****P<0.0001 vs CON group. B: Expression of chemogenetic virus (mCherry,red) in the GABAergic neurons (green). C: Left,anesthesia induction time is shorter in the hM3Dq group.*P<0.05 vs mCherry group;right,anesthesia emergence time is not significantly different between the two groups.

2.2 光遺傳學(xué)激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元能夠促進七氟醚的麻醉誘導(dǎo)效應(yīng)，但對麻醉維持沒有顯著影響

所有行為學(xué)實驗結(jié)束后斷頭取腦，進行免疫熒光染色。結(jié)果顯示，與GFP組比ChR2組ZI區(qū)c-fos表達顯著增加（P<0.001，圖7A右），表明ChR2組GABA能神經(jīng)元能夠被顯著激活。免疫熒光染色顯示病毒在ZI區(qū)轉(zhuǎn)染成功（圖7B）。與GFP組比ChR2組七氟醚麻醉誘導(dǎo)時間顯著縮短（P<0.01，圖7C左），麻醉覺醒時間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05，圖7C右）。無論是ChR2組還是GFP組各個頻段在光刺激前后均沒有顯著變化（圖8），說明調(diào)控ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元活性對七氟醚麻醉期間的腦電變化沒有顯著影響。

圖7 通過光遺傳學(xué)方法激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元促進七氟醚麻醉誘導(dǎo)Fig. 7 Optogenetic activation of ZI GABAergic neurons accelerates sevoflurane anesthesia induction.A:Left,co-labelled immunofluorescence of virus autofluorescence(GFP,green)and c-fos(red)right,the propotion of GABAergic neurons co-expressing c-fos/GFP in the CHR2 group is significantly higher.***P<0.001 vs CON group.B: Expression of optogenetic virus(GFP,green)in the GABAergic neurons(red).C:Left,anesthesia induction time is shorter in CHR2 group.**P<0.01 vs GFP group;right,anesthesia emergence time show no significant difference between the two groups.

圖8 光遺傳激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元對七氟醚麻醉維持沒有顯著影響Fig. 8 Optogenetic activation of the ZI GABAergic neurons has no significant effect on sevoflurane anesthesia maintenance.A:The percentages of power in all bands show no significant changes in either GFP group or CHR2 group.B:Representative EEG spectra for GPF group and CHR2 group.

2.3 化學(xué)遺傳學(xué)激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元能夠促進丙泊酚的麻醉誘導(dǎo)效應(yīng)

與mCherry 組比，hM3Dq 組麻醉誘導(dǎo)時間顯著縮短（P<0.05，圖9 左），麻醉覺醒時間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05，圖9右）。

圖9 通過化學(xué)遺傳學(xué)方法激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元促進丙泊酚麻醉誘導(dǎo)Fig. 9 Chemogenetic activation of ZI GABAergic neurons accelerates propofol anesthesia induction.Left,anesthesia induction time is shorter inhM3Dq group.*P<0.05 vs mCherry group;right,anesthesia emergence time shows no significant difference between the two groups.

2.4 光遺傳學(xué)激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元能夠縮短丙泊酚的誘導(dǎo)時間

ChR2組小鼠經(jīng)過光遺傳激活后，丙泊酚麻醉誘導(dǎo)時間顯著縮短（P<0.01，圖10A），麻醉覺醒時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，圖10B）。

圖10 通過光遺傳學(xué)方法激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元促進丙泊酚麻醉誘導(dǎo)Fig. 10 Optical activation of ZI GABAergic neurons accelerates propofol anesthesia induction.Left: Anesthesia induction time is shorter in CHR2 group.**P<0.01 vs GFP group;Right:Anesthesia emergence time shows no significant difference between the two groups.

3 討論

GABA受體是全身麻醉藥物的重要靶點［1］，探究大腦GABA能神經(jīng)元參與麻醉覺醒的作用，對意識形成與恢復(fù)機制研究具有重大的意義。在本研究中，我們驗證了激活ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元不僅能夠促進七氟醚麻醉的誘導(dǎo)，而且能夠促進丙泊酚麻醉的誘導(dǎo)過程，然而調(diào)控ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元活性并不影響七氟醚和丙泊酚麻醉后的覺醒過程。在七氟醚麻醉維持期，光刺激ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元前后，腦電頻譜比例無明顯變化。這些證據(jù)表明ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元對七氟醚/丙泊酚的麻醉誘導(dǎo)起到了重要的調(diào)控作用。

ZI位于丘腦下區(qū)域，是主要包含GABA能神經(jīng)元的抑制性核團，研究表明ZI參與調(diào)控內(nèi)臟活動、意識以及姿勢和運動［12-14］。既往有研究認為ZI參與睡眠覺醒過程，在解剖結(jié)構(gòu)上，ZI對基底前腦、大腦皮層等調(diào)控睡眠覺醒區(qū)域有投射［15］。另一種觀點認為ZI能接受大量的包括聽覺在內(nèi)的感覺信息，通過將感覺信息整合后投向更高階的核團，如丘腦背側(cè)核以及板內(nèi)核［16］。最近有研究報道ZI區(qū)Lhx6陽性的GABA能神經(jīng)元能促進覺醒向睡眠的轉(zhuǎn)換［8］，與ZI有豐富神經(jīng)纖維聯(lián)系的丘腦也被證實在麻醉-覺醒之間的轉(zhuǎn)化起重要的調(diào)控作用［17-19］。我們的研究證實ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元在麻醉誘導(dǎo)過程中起重要的促進作用。

GABA是腦內(nèi)重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，然而不同核團抑制性GABA能神經(jīng)元在吸入麻醉中可以發(fā)揮截然不同的作用，激活吻內(nèi)側(cè)核GABA神經(jīng)元能夠促進七氟醚麻醉［20］，在異氟醚麻醉中，下丘腦外側(cè)GABA能神經(jīng)元通過投射到丘腦網(wǎng)狀核對麻醉后覺醒起重要作用［21］。同樣，側(cè)間隔GABA能神經(jīng)元參與清醒控制，促進異氟醚麻醉后的覺醒［22］。研究表明，在丙泊酚麻醉中，下丘腦腹外側(cè)視前區(qū)GABA能神經(jīng)元通過投射到如結(jié)節(jié)乳頭狀核、腹外側(cè)中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)，對麻醉及覺醒起重要的調(diào)節(jié)作用［23］。這些研究表明，不同核團的抑制性GABA神經(jīng)元在麻醉中發(fā)揮不同的作用。我們的研究繼續(xù)豐富了大腦核團抑制性GABA能神經(jīng)元在麻醉誘導(dǎo)中的作用。

麻醉的誘導(dǎo)與覺醒可能是由不同的神經(jīng)核團與通路介導(dǎo)的，而不是單純的鏡像作用［24］，麻醉的誘導(dǎo)、維持、覺醒三個主要過程中，不同核團參與的過程也不盡相同［25-27］。研究神經(jīng)核團參與麻醉不同階段的差異為研究大腦意識狀態(tài)調(diào)節(jié)提供重要的依據(jù)。本研究中，ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元只參與兩種不同麻醉藥物的誘導(dǎo)而不參與覺醒的恢復(fù)，對臨床中麻醉藥作用機制及暈厥猝倒等機制的研究具有重要意義。

有研究證實γ-氨基丁酸A型受體（GABAAR）是大多數(shù)現(xiàn)代靜脈麻醉藥物的主要受體，如丙泊酚和依托咪酯，七氟醚和地氟醚亦可通過作用于GABAAR 發(fā)揮麻醉作用［28］。七氟醚和丙泊酚具有共同的分子和系統(tǒng)水平機制誘導(dǎo)麻醉后的無意識狀態(tài)［10,11］。本研究發(fā)現(xiàn)，增強ZI區(qū)的GABA能神經(jīng)元活性可促進丙泊酚和七氟醚的麻醉誘導(dǎo)作用，進一步驗證了兩種藥物發(fā)揮作用具有共同的受體機制。七氟醚與丙泊酚是否通過其他共同的神經(jīng)通路進行麻醉與覺醒調(diào)節(jié)需要進一步證實。

ZI位于丘腦下區(qū)域，與大腦的不同區(qū)域具有往返神經(jīng)聯(lián)系，ZI背側(cè)區(qū)GABA能神經(jīng)元可投射至皮層和丘腦，ZI腹側(cè)區(qū)GABA能神經(jīng)元能夠投射至基底前腦和腦干［29］。本研究重點關(guān)注ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元胞體在全麻機制中的調(diào)控作用，在未來研究中會進一步探索ZI區(qū)GABA能神經(jīng)元內(nèi)部微環(huán)路，以及其上下游核團在睡眠及全麻機制中的作用，有利于探究GABA作為抑制性神經(jīng)遞質(zhì)在意識消失中的作用。