王會(huì)杰，孫珍貴，趙文英，耿 彪

皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院1腫瘤內(nèi)科，2呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，安徽 蕪湖241000

肺癌是世界上最常見的腫瘤，每年導(dǎo)致約170萬人死亡［1,2］。肺癌包括非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）和小細(xì)胞肺癌，大約80%～85%的肺癌屬于非小細(xì)胞肺癌［3］。近年來，隨著分子靶向治療以及免疫檢測點(diǎn)抑制劑的應(yīng)用，肺癌患者的生存率有了提高，但是大多數(shù)肺癌患者診斷時(shí)已是晚期，因此五年生存率仍較差［4,5］。

S100蛋白家族是一組相對分子質(zhì)量較小的鈣結(jié)合蛋白，通過與靶蛋白互作在胞內(nèi)外參于調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖與凋亡，細(xì)胞骨架與細(xì)胞基質(zhì)重構(gòu)及遷移等重要生物學(xué)過程［6,7］。根據(jù)氨基酸序列和蛋白結(jié)構(gòu)的相似性，已有20種該家族成員被發(fā)現(xiàn)，其中有17個(gè)家族成員編碼在人體1q21表皮分化復(fù)合體（EDC）區(qū)域。EDC由數(shù)個(gè)基因或基因家族構(gòu)成，這些基因編碼的蛋白質(zhì)決定了細(xì)胞表皮分化過程［7-10］。在腫瘤細(xì)胞中EDC的表達(dá)異常與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）密切關(guān)聯(lián)，因此，S100 蛋白家族在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用［8］。目前有研究表明，S100A10是EMT的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，參與乳腺癌、肝癌、胰腺癌的發(fā)生，進(jìn)展和轉(zhuǎn)移［11-13］。然而，肺腺癌中S100A10的表達(dá)及其信號(hào)傳遞途徑還未完全闡明。

蛋白激酶B（Akt）/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）可以將細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)進(jìn)行整合聚集，從而在腫瘤細(xì)胞糖酵解、干性、轉(zhuǎn)移和耐藥性等病理過程中發(fā)揮關(guān)鍵性調(diào)控作用［14-18］。腫瘤細(xì)胞通過從微環(huán)境中攝取大量葡萄糖進(jìn)行糖酵解，從而產(chǎn)生足夠的能量滿足其快速增殖的需求［19］。Akt-mTOR的過度激活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，以Akt-mTOR為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)抗腫瘤藥物是一大研究熱點(diǎn)［20,21］。因此，深入了解Akt-mTOR調(diào)節(jié)機(jī)制可能有助于腫瘤治療策略的開發(fā)。本研究探討S100A10的表達(dá)水平與肺腺癌（LUAD）臨床病理參數(shù)的關(guān)系以及對患者預(yù)后的影響，通過體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究S100A10 調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲的作用，并探討S100A10促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的相關(guān)機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)

人肺癌A549、H1299、H1972、SPC-A-1、HCC827細(xì)胞購于中國科學(xué)院細(xì)胞庫。用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，細(xì)胞在37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下培養(yǎng)。取對數(shù)生長期的細(xì)胞用于試驗(yàn)。

1.2 主要試劑

胎牛血清（Gibco），DMEM培養(yǎng)基，0.25%胰蛋白酶，S100A10 多克隆抗體、脂質(zhì)體Lipofect 2000（Invitrogen），β‐actin 抗體、Vimentin（D21H3）、ZEB1（E2G6Y）抗 體、p-Akt（1∶1000，Ser-473）、mTOR（1∶

1000，7C10）、p-mTOR（1∶1000，Ser2448）（Cell Signaling Technology）。S100A10 過表達(dá)慢病毒顆粒（Sino Biological），S100A10shRNA（靶標(biāo)序列: CTG AGGTTCAACCCGTTGAAA）（Sigma），RIPA裂解液、BCA試劑盒、胰酶、Transwell 24孔板（孔徑為8 μm）、BeyoClick?EdU-594 細(xì)胞增殖檢測試劑盒、增強(qiáng)型CCK-8試劑盒（Beyotime Biotechnology），SP Rabbit&Mouse HRP Kit試劑盒（CoWin Biosciences），Matrigel（BD Biosciences），Transwell 培養(yǎng)小室（Millipore），葡萄糖測定試劑盒（上海榮盛生物技術(shù)有限公司），DLactateAssay試劑盒（Abcam）。

1.3 蛋白印跡法檢測（WB）

使用RIPA裂解液裂解提取總蛋白，BCA試劑盒檢測蛋白濃度。經(jīng)SDS-PAGE分離蛋白后，用半干轉(zhuǎn)膜儀轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)至PVDF膜，然后用脫脂牛奶室溫封閉蛋白2 h，加入一抗在4 ℃封閉過夜，再加入對應(yīng)二抗室溫封閉1h，滴反應(yīng)液曝光。

1.4 慢病毒感染

H1299細(xì)胞接種于24孔培養(yǎng)板培養(yǎng)至密度約80%時(shí)，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)確定的感染條件，按感染復(fù)數(shù)（MOI）為150 加入S100A10 Lentiviral cDNA 慢病毒液感染細(xì)胞。S100A10沉默慢病毒（sh-S100A10）、S100A10過表達(dá)慢病毒（OE-S100A10）和陰性對照慢病毒（sh-NC）。由于病毒質(zhì)粒中含有編碼綠色熒光蛋白（GFP）的基因，利用熒光顯微鏡可根據(jù)熒光強(qiáng)度估算細(xì)胞感染效率。感染病毒4 d后每組細(xì)胞內(nèi)加入氨芐青霉素進(jìn)行篩選，6 d細(xì)胞長滿后，進(jìn)行細(xì)胞傳代，2周后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的Lentiviral S100A10 overexpression的H1299細(xì)胞系。

1.5 免疫組織化學(xué)檢測

肺癌和癌旁組織芯片脫蠟水化：60 ℃烤片1h，二甲苯脫蠟；再依次浸入梯度乙醇和蒸餾水進(jìn)行水化。抗原修復(fù)用檸檬酸緩沖液。在室溫下用正常山羊血清覆蓋芯片約10 min 進(jìn)行抗原封閉，然后在4 ℃下與anti-S100A1孵育過夜。隨后用生物素標(biāo)記羊抗兔二抗工作液孵育，最后應(yīng)用DAB顯色工作液進(jìn)行顯色，隨后將芯片用蘇木精復(fù)染。S100A10 陽性細(xì)胞的百分比進(jìn)行評(píng)分：0分（0%～25%），1分（25%～50%），2分（50%～75%）和3分（>75%）。將0和1分定義為低表達(dá)，而將2和3分定義為高表達(dá)。

1.6 細(xì)胞增殖測定

轉(zhuǎn)染后，使用BeyoClick?EdU-594細(xì)胞增殖檢測試劑盒、增強(qiáng)型CCK-8檢測試劑盒檢測A549敲低組和過表達(dá)的H1299及控制對照組的增殖情況，具體實(shí)驗(yàn)方法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.7 Transwell侵襲檢測

將基質(zhì)膠置于Transwell小室以明確定細(xì)胞的侵襲能力。收集生長良好的過表達(dá)S100A10 的H1299 和A549敲低組及控制對照組，消化離心后，用無血清的RPMI 1640培養(yǎng)基重懸細(xì)胞密度為4×105/mL，取200 μL細(xì)胞懸液接種于24孔板Transwell上室（孔徑為8 μm），而下腔室則加入500 μL含有10%FBS 的RPMI 1640培養(yǎng)基。在37 ℃下孵育24 h 后，取出24 孔板中的Transwell小室，用棉簽輕輕擦去上層的細(xì)胞。用4%多聚甲醛固定20 min后，用0.1%結(jié)晶紫染色20 min，PBS液沖洗干凈，倒扣小室自然風(fēng)干。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。在倒置顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野，并計(jì)算細(xì)胞的個(gè)數(shù)及平均值。

1.8 葡萄糖消耗的測量

轉(zhuǎn)染后，將過表達(dá)及敲除S100A10、控制對照組的A549和H1299細(xì)胞接種到6孔板中。6 h后，將培養(yǎng)基更換為完全培養(yǎng)基并培養(yǎng)48 h。葡萄糖測定試劑盒收集培養(yǎng)基以測量葡萄糖濃度。葡萄糖消耗計(jì)算為新鮮培養(yǎng)基中的原始葡萄糖濃度與收集的培養(yǎng)基中測量的葡萄糖濃度之間的差異。所有結(jié)果均標(biāo)準(zhǔn)化為相應(yīng)的蛋白質(zhì)濃度值。實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。

1.9 乳酸產(chǎn)量的測量

根據(jù)制造商的說明書，收集培養(yǎng)物上清液，評(píng)估培養(yǎng)上清液中的乳酸產(chǎn)生量。所有結(jié)果均標(biāo)準(zhǔn)化為相應(yīng)的蛋白質(zhì)濃度值。實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)了3次。

1.10 基因集富集分析（GSEA）

采用GSEA 4.0進(jìn)行GSEA，尋找S100A10影響腫瘤發(fā)生發(fā)展可能的信號(hào)通路。采用GSEA 網(wǎng)站的MsigDB數(shù)據(jù)庫獲取c2.cp.kegg.v7.0.symbols.gmt數(shù)據(jù)集，設(shè)置分析置換次數(shù)為1000次，顯著富集基因集須滿足一下條件：錯(cuò)誤發(fā)生率（FDR）<0.25，P<0.05。

1.11 裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)

首先，我們使用S100A10敲低組及控制對照組的A549細(xì)胞，S100A10過表達(dá)組及控制對照組的H1299細(xì)胞接種在6孔板中，培養(yǎng)過夜，并用慢病毒感染。感染后72 h用熒光顯微鏡測定慢病毒感染率。分別將上述細(xì)胞注射到裸鼠皮下（南京青龍山6～8周齡），每只老鼠兩個(gè)部位。使用游標(biāo)卡尺每周測量腫瘤兩次，根據(jù)體積公式計(jì)算腫瘤體積：V=（S2×L）/2，其中V是體積，S是最短直徑，L是最長直徑。在第30天把小鼠處死，獲得腫瘤，并測量腫瘤大小和質(zhì)量。本研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通過皖南醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)（2021-71）。

1.12 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 16.0軟件（Chicago，IL，USA）對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理，S100A10的表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系采用chi-square 檢驗(yàn)，生存分析采用Kaplan-Meier生存曲線。用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示計(jì)量資料，兩組間的比較采用student t檢驗(yàn)，利用GraphPad Prism 7（San Diego，CA，USA）軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行作圖。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 S100A10表達(dá)水平與肺腺癌的臨床病理參數(shù)密切相關(guān)

免疫組化評(píng)分結(jié)果顯示，S100A10的表達(dá)水平與腫瘤大?。≒=0.009）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.025）、腫瘤分期（P=0.002）、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（P=0.004）密切有關(guān)，而與患者年齡（P=0.223）、腫瘤分化程度（P=0.431）無關(guān)，提示S100A10的表達(dá)水平與腫瘤負(fù)荷密切關(guān)聯(lián)（圖1A，表1）。Western blot法檢測3例肺腺癌患者癌組織和癌旁組織S100A10的蛋白表達(dá)水平，結(jié)果提示腫瘤組織S100A10的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織（圖1B）。Kaplan-Meier生存分析顯示，與S100A10低表達(dá)的患者相比，高表達(dá)S100A10的患者的生存期顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001，圖1C）。

表1 S100A10的表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系（%）Tab.1 Relationship between the expression level of S100A10 and clinicopathological parameters(%)

圖1 肺腺癌組織高表達(dá)S100A10并且可以作為患者預(yù)后的標(biāo)記Fig. 1 High expression of S100A10 in lung adenocarcinoma tissues can be used as a prognostic marker.A:Immunohistochemistry for detecting the expression of S100A10 in adjacent tissues and tumor tissues in a tissue microarray.Representative images of two cases of lung adenocarcinoma show significantly higher expression level of S100A10 in tumor tissues than in adjacent tissues.B:Western blotting showing higher S100A10 expression in cancer tissues than in adjacent tissues from 3 patients with lung cancer.C:Kaplan-Meier survival analysis curves showing poor prognosis in patients with high expression of S100A10.

2.2 S100A10過表達(dá)促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移

Western blot檢測S100A10在肺腺癌細(xì)胞系的基線表達(dá)水平，結(jié)果顯示A549細(xì)胞高表達(dá)S100A10，而H1299 細(xì)胞低表達(dá)S100A10（圖2A）。隨后我們應(yīng)用S100A10shRNA敲除A549細(xì)胞中的S100A10的表達(dá)，敲除效率見圖2B。CCK8和EdU實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示，敲除A549細(xì)胞中的S100A10可顯著抑制A549細(xì)胞的增殖能力（P<0.001，圖2C、D）。與此一致，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，敲除S100A10的表達(dá)同樣遏制了腫瘤細(xì)胞的侵襲能力（P<0.001，圖2E）。為了進(jìn)一步證實(shí)上述結(jié)論，我們應(yīng)用S100A10的過表達(dá)慢病毒顆粒感染H1299細(xì)胞以上調(diào)S100A10的表達(dá)，Western blot檢測過表達(dá)水平（圖2B），結(jié)果表明，與控制對照組相比，過表達(dá)S100A10可明顯促進(jìn)H1299細(xì)胞的增殖和侵襲能力（P<0.001，圖2C～E）。

圖2 S100A10調(diào)控肺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力Fig. 2 S100A10 regulates the proliferation and metastasis of lung cancer cells.A:Baseline expression of S100A10 in lung adenocarcinoma cell lines detected by Western blotting.B:Expression of S100A10 detected by Western blotting in A549 cells with S100A10 knockdown(shS100A10#1 and shS100A10#2) and in H1299 cells infected with S100A10-overexpressing lentiviral vector. C: Proliferation of A549 cells with S100A10 knockdown and H1299 cells with S100A10 overexpression detected by CCK8 assay. D: EdU assay showing that S100A10 knockdown inhibits proliferation of A549 cells and overexpression of S100A10 promotes proliferation of H1299 cells. E:Transwell assay showing S100A10 knockdown and overexpression inhibits and promotes the invasion of the tumor cells,respectively.Data are presented as Mean±SE.**P<0.001.

2.3 S100A10通過激活A(yù)kt-mTOR信號(hào)通路影響腫瘤細(xì)胞糖酵解過程

基因集富集分析（GESA）表明，S100A10顯著富集于糖酵解、糖異生、磷酸戊糖途徑、mTOR 信號(hào)通路（圖3A、B）。分別上調(diào)或下調(diào)腫瘤細(xì)胞S100A10結(jié)果顯示，下調(diào)S100A10的表達(dá)抑制了腫瘤細(xì)胞的乳酸產(chǎn)量、葡萄糖消耗量，上調(diào)S100A10的表達(dá)則導(dǎo)致的相反的效應(yīng)（P<0.001，圖3C、D）。Western blot檢測結(jié)果顯示，上調(diào)S100A10促進(jìn)了Akt-mTOR信號(hào)通路的激活，而下調(diào)S100A10則抑制了Akt-mTOR信號(hào)通路的激活（圖3E、F）。

圖3 S100A10通過調(diào)控Akt-mTOR信號(hào)通路激活影響糖酵解過程Fig. 3 S100A10 affects glycolysis by regulating the activation of AKT-mTOR signaling pathway.A, B: GSEA analysis showing that a high expression of S100A10 in lung adenocarcinoma cells was significantly enriched in glucose metabolism,glycolysis,mTOR signaling pathway and other gene sets.C,D:Inhibition of S100A10 inhibits glycolysis,and overexpression of S100A10 promotes glycolysis. E, F: Western blot analysis showing that S100A10 could regulate the activation of AKTmTOR signaling pathway.

2.4 S100A10促進(jìn)肺腺癌的發(fā)生發(fā)展

A549-shS100A10和A549-shCtrl細(xì)胞移植到裸鼠皮下，統(tǒng)計(jì)分析上述兩組小鼠的腫瘤體積和腫瘤體質(zhì)量，與對照組相比，敲除S100A10表達(dá)可明顯抑制腫瘤的增殖（P<0.001，圖4A、B）。Western blot結(jié)果顯示，敲除S100A10的表達(dá)顯著抑制了腫瘤細(xì)胞的上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）轉(zhuǎn)化（圖4C），上調(diào)S100A10的表達(dá)則促進(jìn)了腫瘤的增殖（P<0.001）和EMT轉(zhuǎn)化（圖4D～F）。

圖4 體內(nèi)S100A10促進(jìn)腫瘤增殖Fig. 4 S100A10 promotes tumor proliferation in vivo.A:Tumor tissues derived from S100A10 knockout A549 cells and control A549 cells collected 30 days after injection in nude mice and the tumor growth curves.B: Tumor weight in S100A10 knockout group and control group.C:EMT transformation markers detected by Western blotting.D:Tumor tissues derived from H1299 cells overexpressing S100A10 and control H1299 cells in nude mice and the tumor growth curves.E: Tumor weight in S100A10 overexpression and GFP control groups.F: EMT transformation markers detected by Western blotting.All data are presented as Mean±SE.**P<0.001.

3 討論

目前研究表明，S100蛋白家族在調(diào)控腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，S100蛋白家族通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)、細(xì)胞增殖和凋亡信號(hào)通路、細(xì)胞代謝通路、腫瘤微血管生成等發(fā)揮其病理生理功能［22］。新近研究顯示［23］，腫瘤組織S100蛋白表達(dá)異常與患者腫瘤負(fù)荷以及不良預(yù)后密切關(guān)聯(lián)，S100蛋白家族可能參與腫瘤免疫抑制性微環(huán)境的形成。在NSCLC患者中，腫瘤組織S100A8、S100A9的表達(dá)水平顯著高于其癌旁組織，COX多因素生存分析顯示S100A8、S100A9的表達(dá)水平顯著影響患者的PFS、OS，患者S100A8、S100A9表達(dá)水平上調(diào)其PFS、OS相應(yīng)減少［24］。進(jìn)一步的研究顯示，腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的存在大量S100A8和S100A9蛋白，中性粒細(xì)胞通過分泌S100A8/9并結(jié)合到腫瘤細(xì)胞表面Toll樣受體（Toll-like receptors,TLR）從而介導(dǎo)細(xì)胞的促增殖和抗凋亡信號(hào)通路，導(dǎo)致腫瘤惡性進(jìn)展［25］。另有研究顯示，NSCLC患者血清中S100A10的表達(dá)水平與患者的腫瘤負(fù)荷、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、不良預(yù)后存在關(guān)聯(lián)［26］。本研究中，我們的數(shù)據(jù)顯示，肺腺癌患者腫瘤組織S100A10的表達(dá)水平顯著高于其癌旁組織，并且S100A10的表達(dá)水平與患者的腫瘤體積、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，生存分析顯示，與S100A10低表達(dá)患者相比，S100A10高表達(dá)患者其OS顯著縮短，這些數(shù)據(jù)表明，S100A10作為關(guān)鍵的癌蛋白可能促進(jìn)了肺腺癌的發(fā)生發(fā)展。

新近的研究發(fā)現(xiàn)，S100A10在多種腫瘤組織中表達(dá)水平上調(diào)，如乳腺癌、胰腺癌、肝癌等，S100A10表達(dá)水平升高與腫瘤患者的臨床病理參數(shù)密切關(guān)聯(lián)［11-13］。在乳腺癌中，低氧誘導(dǎo)因子HIF-1可以促進(jìn)S100A10的表達(dá)，S100A10通過結(jié)合到干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Oct-4的轉(zhuǎn)錄結(jié)合位點(diǎn)，進(jìn)而促進(jìn)多能性癌基因SOX2、KLF4的表達(dá)，誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞干性［11］。在肝癌患者中，S100A10可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞外泌體的合成和分泌，S100A10可以作為肝癌的治療靶點(diǎn)［12］。在胰腺癌患者中，腫瘤組織S100A10表達(dá)水平顯著高于其癌旁組織，S100A10的表達(dá)水平可以作為預(yù)測患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，通過下調(diào)胰腺癌細(xì)胞的S100A10的表達(dá)水平則抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，與此相反，上調(diào)S100A10的表達(dá)則促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力，機(jī)制研究表明，S100A10通過促進(jìn)JNK信號(hào)通路活化進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展［13］。與此一致，本研究中，通過上調(diào)肺腺癌細(xì)胞S100A10的表達(dá)水平促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力，然而，下調(diào)S100A10的表達(dá)則抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，進(jìn)一步的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)同樣證明了這一結(jié)論，這些數(shù)據(jù)表明S100A10能夠促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力。

為了進(jìn)一步研究S100A10促進(jìn)肺腺癌進(jìn)展的可能機(jī)制，我們通過基因富集分析發(fā)現(xiàn)，S100A10顯著富集于糖酵解、糖異生、磷酸戊糖途徑、mTOR信號(hào)通路。糖代謝的異常改變是腫瘤細(xì)胞的主要特征之一，AktmTOR信號(hào)通路通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞糖酵解過程中關(guān)鍵酶的表達(dá)，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞葡萄糖消耗增加和糖酵解途徑異常活躍，促使腫瘤進(jìn)展［27］。Akt-mTOR處于腫瘤細(xì)胞信號(hào)通路的關(guān)鍵位置，Akt-mTOR通路異常激活與腫瘤的增殖、凋亡以及耐藥性密切相關(guān)，因而Akt、mTOR抑制劑成為腫瘤靶向治療的熱點(diǎn)［28-30］?；谶@些研究數(shù)據(jù)，我們推測S100A10通過調(diào)控Akt-mTOR信號(hào)通路的激活從而促進(jìn)糖酵解途徑。我們的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，抑制肺癌細(xì)胞S100A10的表達(dá)則降低了乳酸的產(chǎn)量、葡萄糖的消耗量，與此相反，上調(diào)S100A10的表達(dá)則促進(jìn)了乳酸的產(chǎn)量、葡萄糖的消耗量，與此一致，Western blot蛋白定量分析同樣表明，下調(diào)S100A10的表達(dá)則抑制了Akt-mTOR 信號(hào)通路的激活，而上調(diào)S100A10 的表達(dá)則促進(jìn)了Akt-mTOR 信號(hào)通路的激活。因此，S100A10通過促進(jìn)肺腺癌的糖酵解途徑，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，肺腺癌S100A10的表達(dá)上調(diào)，其表達(dá)水平與患者的臨床病理參數(shù)、不良預(yù)后密切相關(guān)，S100A10通過調(diào)控Akt-mTOR信號(hào)通路的激活進(jìn)而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的糖酵解途徑，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力。因此，S100A10或許可以作為預(yù)測肺腺癌腫瘤負(fù)荷的重要標(biāo)記或者靶向治療的靶點(diǎn)。