付舒婷，周 琪，許建成△

吉林大學(xué)第一醫(yī)院：1.檢驗科；2.兒科，吉林長春 130021

血細胞分析是臨床最傳統(tǒng)、最常用的檢驗項目之一，對健康評估、疾病初步診斷，以療效觀察有重要意義。但其參數(shù)常受環(huán)境、種族、人群、年齡、地域、生活習(xí)慣和營養(yǎng)狀況等諸多因素影響[1]。目前，我國兒童靜脈血血細胞分析參考區(qū)間多采用成人標(biāo)準(zhǔn)，但兒童年齡、生長發(fā)育情況、飲食習(xí)慣等與成人不盡相同[2]，因此，有必要建立兒童靜脈血血細胞分析參考區(qū)間。建立參考區(qū)間的方法包括直接法和間接法。美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)發(fā)布的EP28-A3C指南中指出，通過建立排除標(biāo)準(zhǔn)，選取合適的參考樣本來獲得參考值(直接法)是建立生物參考區(qū)間的標(biāo)準(zhǔn)方法[3]，然而直接法檢測成本高，耗時長，且操作過程復(fù)雜，不利于在臨床推廣應(yīng)用，故大部分實驗室直接引用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或試劑廠商提供的參考區(qū)間。但由于人群、地域、生活習(xí)慣等多方面的差異，直接引用的生物參考區(qū)間可能不適合本地區(qū)的人群。間接法是指利用醫(yī)院數(shù)據(jù)庫中已有數(shù)據(jù)，以數(shù)學(xué)統(tǒng)計模型為基礎(chǔ)建立生物參考區(qū)間的方法[4]。相比于直接法，間接法的優(yōu)勢主要包括：(1)有充足、可靠的數(shù)據(jù)來源；(2)更簡便，耗時短，且成本低，有利于參考區(qū)間的建立和定期評審[5]。本研究擬使用間接法建立長春地區(qū)兒童靜脈血血細胞分析參考區(qū)間，以期為兒童疾病診治及健康評估提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2013年1月至2020年12月本院實驗室信息系統(tǒng)(LIS)中1個月至18歲健康兒童靜脈血血細胞分析檢測結(jié)果作為數(shù)據(jù)來源。EP28-A3C指南中指出，健康很難被定義，是一種相對狀態(tài)，確定“相對健康”參考個體的第一步就是要建立一個標(biāo)準(zhǔn)將非健康者排除在納入的參考樣本之外[3]。故本研究設(shè)立的排除標(biāo)準(zhǔn)如下：血液系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、變態(tài)反應(yīng)性、遺傳性疾病，以及惡性腫瘤和寄生蟲感染等，空腹血糖≥7.0 mmol/L，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶>60 U/L，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶>60 U/L，肌酐>100 μmol/L，不合格(脂血、溶血、黃疸)及重復(fù)標(biāo)本。因為兒童血細胞分析檢測結(jié)果有明顯的年齡及性別差異，故本研究按年齡、性別分組，每1歲不同性別分別為一組，1個月至18歲健康兒童共分為36個組。本研究方案經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)(批號：2019-249)。

1.2儀器與試劑 研究期間，本院檢驗科使用Sysmex XN-1000、Sysmex XE-2100、Sysmex XE-5000全自動血細胞分析儀及配套試劑、質(zhì)控品。每6個月校準(zhǔn)血細胞分析儀。依據(jù)CNAS-CL02《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準(zhǔn)則》(ISO 15189:2012)對檢測系統(tǒng)進行批內(nèi)精密度、日間精密度、正確度、攜帶污染等性能驗證，結(jié)果符合衛(wèi)生行業(yè)WS/T 406-2012規(guī)定要求[6]。室內(nèi)質(zhì)控采用Westgard多規(guī)則(13s、22s和R4s)，質(zhì)控品為高、低2個水平，每日1次，室內(nèi)質(zhì)控的變異系數(shù)在允許范圍內(nèi)方可進行檢測。各檢測系統(tǒng)之間每年進行比對，且比對通過，均使用相同的參考區(qū)間確保檢測結(jié)果一致性。工程師和技術(shù)人員定期對儀器進行維護、檢查、校準(zhǔn)和質(zhì)控。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集及處理 采集空腹肘靜脈血(嬰幼兒可采頭皮靜脈、頸靜脈、大隱靜脈、股靜脈)2 mL于含乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝劑的真空采血管(廣州陽普醫(yī)療科技股份有限公司)中，迅速混勻，室溫下30 min內(nèi)檢測完畢。本研究已由有資質(zhì)的兒科醫(yī)生對標(biāo)本采集程序進行評估，以確保其合理性和適用性。

1.3.2調(diào)查參數(shù) 本研究調(diào)查參數(shù)包括白細胞計數(shù)(WBC)、中性粒細胞絕對值(NEUT#)、淋巴細胞絕對值(LYMPH#)、單核細胞絕對值(MO#)、嗜酸性粒細胞絕對值(EO#)、嗜堿性粒細胞絕對值(BASO#)、紅細胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)、血細胞比容(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計數(shù)(PLT)。

1.3.3參考區(qū)間的驗證 選取2021年1-8月本院LIS中健康兒童靜脈血血細胞分析檢測結(jié)果，采用與參考區(qū)間建立時相同的研究對象納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，對新建立的參考區(qū)間進行適用性驗證，參照我國行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，參考個體多于20例且落在參考區(qū)間內(nèi)的數(shù)據(jù)≥90%，則通過驗證。

2 結(jié) 果

2.1參考個體一般資料及血細胞分析檢測結(jié)果 Kolmogorov-Sminov檢驗顯示,血細胞分析所有項目數(shù)據(jù)均呈偏態(tài)分布。納入3 103例，其中男2 239例，女864例。剔除離群值后入組2 961例，其中男2 117例，女844例。數(shù)據(jù)均呈偏態(tài)分布，以最小值、最大值、M、P25、P75表示，見表1。

表1 靜脈血血細胞分析檢測結(jié)果

2.2參考區(qū)間的建立 所有血細胞分析項目參考區(qū)間均有年齡差異，除NEUT#外，其余項目在部分年齡段有性別差異。建立的各項目參考區(qū)間見表2。WBC、MO#、EO#、BASO#隨年齡增長呈較緩下降趨勢。NEUT#在1個月至<3歲呈明顯上升趨勢，3～<6歲呈緩慢上升趨勢，6歲后趨于平緩。LYMPH#在1個月至<8歲呈明顯下降趨勢，8歲后呈緩慢下降趨勢。RBC、Hb、HCT隨著年齡增長呈明顯上升趨勢，且RBC在1～18歲、Hb在8～18歲、HCT在13～18歲均出現(xiàn)明顯性別差異，男性均高于女性。MCV、MCH隨著年齡增加呈較緩的上升趨勢。MCHC隨著年齡變化不大。PLT隨年齡增長呈緩慢下降趨勢，18歲左右降到最低。

表2 長春地區(qū)1個月至18歲健康兒童靜脈血血細胞分析參考區(qū)間(P2.5～P97.5)

續(xù)表2 長春地區(qū)1個月至18歲健康兒童靜脈血血細胞分析參考區(qū)間(P2.5～P97.5)

2.3參考區(qū)間的驗證 用于驗證的樣本剔除離群值后共計1 089例，其中男538例，女551例。每個年齡段驗證樣本量均≥20例，且各項目均有≥90%的測定值落在本研究參考區(qū)間內(nèi)，驗證通過。具體驗證通過率見表3。

表3 長春地區(qū)1個月至18歲健康兒童靜脈血血細胞分析參考區(qū)間適用性驗證(%)

3 討 論

血細胞分析是臨床常規(guī)檢查項目，通過血細胞數(shù)量及形態(tài)變化可輔助診斷疾病[7]。WBC對感染及炎癥的診治及預(yù)后判斷都有特殊意義。RBC和Hb是反映貧血及紅細胞增多的主要指標(biāo)，二者結(jié)合對貧血診斷更有意義。MCV、MCH、MCHC結(jié)合臨床表現(xiàn)有助于貧血形態(tài)學(xué)分類。PLT是診斷止血和凝血障礙的重要指標(biāo)[8]。

本研究結(jié)果顯示，兒童WBC隨年齡呈較緩的下降趨勢，參考區(qū)間上下限均略高于成人，WBC在7歲后逐漸平穩(wěn)下降至接近成人水平，這驗證了西安、珠海等地的研究[9-11]。NEUT#在1個月至<3歲明顯上升，3～<6歲緩慢上升，6歲后趨于平緩。LYMPH#在1個月至<8歲明顯下降，8歲后緩慢下降，參考區(qū)間寬度隨年齡增長逐漸縮小，這與上海市[12]研究結(jié)果接近。兒童RBC、Hb、HCT隨年齡增長明顯上升，13歲前均低于成人，這與兒童生長發(fā)育迅速，血容量逐漸擴增，但腎臟產(chǎn)生的促紅細胞生成素不足而造成生理性貧血有關(guān)。RBC在1～18歲、Hb在8～18歲、HCT在13～18歲均出現(xiàn)明顯性別差異，且男性均高于女性，這與華中地區(qū)變化趨勢相一致[13]，可能與男性睪酮水平高于女性，而睪酮可促進促紅細胞生成素分泌有關(guān)[14]。PLT在出生時較高，隨年齡增長逐漸降低，參考區(qū)間上下限高于成人，這與上海市市區(qū)的研究結(jié)果相符[15]，可能與兒童骨髓中巨核細胞增生活躍，使血小板產(chǎn)生增多有關(guān)[16-17]。

本研究利用間接法初步建立了長春地區(qū)1個月至18歲健康兒童靜脈血血細胞分析參考區(qū)間。相比直接法，間接法利用醫(yī)院LIS中已有數(shù)據(jù)建立生物參考區(qū)間，方法簡便，耗時短，成本低，但該法可能納入疾病患者的數(shù)據(jù)，需采用合適的方法剔除離群值。另外本研究中某些年齡段樣本較少，參考區(qū)間的計算可能會產(chǎn)生一定誤差。收集更多數(shù)據(jù)，不斷修正參考區(qū)間，才能更準(zhǔn)確地反映本地區(qū)兒童參考區(qū)間。

兒童作為與成人不同的人群，年齡、生長發(fā)育、營養(yǎng)狀態(tài)等因素造成其參考區(qū)間與成人明顯不同，因此，建立適合于兒童的血細胞分析參考區(qū)間尤為迫切。