張秀梅

江西省贛州市人民醫(yī)院麻醉科，江西贛州 341000

神經(jīng)病理性疼痛是指由于疾病或者軀體受損后出現(xiàn)的疼痛，此類疼痛為中樞神經(jīng)或者外周神經(jīng)破壞性刺激導致[1]。目前，臨床上對于神經(jīng)病理性疼痛的治療手段多種多樣，但整體治療效果依舊不夠理想。機體受到損傷及細胞壞死性凋亡等均會導致神經(jīng)細胞出現(xiàn)死亡，繼而引起神經(jīng)病理性疼痛等。因此，在神經(jīng)病理性疼痛改善方面，可從調節(jié)細胞程序性壞死方面入手，程序性壞死特異性抑制劑(Nec-1)可以對程序性壞死產生抑制作用，探討其對炎性反應、外周神經(jīng)病理性疼痛的影響具有重要意義[2-4]。本研究以45只雄性大鼠為研究對象，分析Nec-1在抑制炎性反應對大鼠外周神經(jīng)病理性疼痛的影響中的作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1實驗動物 選取雄性SD大鼠45只為研究對象，按照隨機數(shù)字表法分為對照組、損傷組、損傷給藥組，每組15只。對照組大鼠月齡2～3個月，平均(2.35±0.12)月；體質量182～220 g，平均(192.36±1.87)g。損傷組大鼠月齡2～3個月，平均(2.36±0.12)月；體質量180～220 g，平均(192.41±1.92)g。損傷給藥組月齡2～3個月，平均(2.41±0.16)月；體質量183～220 g，平均(192.38±1.88)g。3組大鼠月齡、體質量比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。研究期間所有大鼠生活環(huán)境控制為濕度40%～70%、溫度18～22 ℃，自然晝夜光線下飼養(yǎng)，自由飲水進食，4只/籠。

1.2儀器與試劑 Nec-1由上海懋康生物科技有限公司提供，PubChem化學物質編號24724559，MDL編號MFCD00056916Von-Frey。BME-410A型熱痛刺激儀由北京拜安吉科技有限公司提供。受體相互作用蛋白(RIP)3、RIP1、混合系激酶區(qū)域樣蛋白(MLKL)抗體，以及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素(IL)-1β、IL-6檢測試劑盒由Abcam 公司提供。

1.3方法 在損傷組、損傷給藥組大鼠腹腔內注射10%水合氯醛300 mg/kg進行麻醉，手術損傷坐骨神經(jīng)。術后對損傷給藥組大鼠進行鞘內置管，術后5 d給予Nec-1鞘內注射治療，每天5 μg Nec-1+10 μL二甲基亞砜(DMSO)儲備液注射治療，持續(xù)至術后14 d。對照組為空白組不做任何處理。

1.4觀察指標 分別于術前1 d，術后1、3、5、7、10、12、14 d觀察3組熱刺激縮足反射潛伏期(TWL)、機械縮足反射閾值(MWT)，采用BME-410A型熱痛刺激儀進行測試，參照儀器使用說明書進行操作。術后14 d采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測所有大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6水平，將所有大鼠麻醉處死，取L4～L6段脊髓背角，使用Western blot法檢測大鼠MLKL、RIP1、RIP3水平。

2 結 果

2.13組大鼠TWL、MWT比較 3組大鼠術前1 d TWL、MWT比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。對照組術前1 d與術后1、3、5、7、10、12、14 d TWL、MWT比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。損傷組TWL、MWT術后1、3、5、7、10、12、14 d明顯下降，與術前1 d比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。損傷給藥組術后1、3、5 d TWL、MWT較術前1 d明顯下降，給藥后出現(xiàn)升高，術后7、10、12、14 d TWL、MWT較術后1、3、5 d 明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。見表1。

表1 3組大鼠TWL、MWT比較

續(xù)表1 3組大鼠TWL、MWT比較

2.23組大鼠脊髓背角細胞程序性壞死的壞死通路蛋白表達水平比較 術后14 d,MLKL、RIP1、RIP3水平在對照組、損傷給藥組、損傷組依次升高，兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。見表2。

表2 3組大鼠脊髓背角細胞程序性壞死的壞死通路蛋白表達水平比較

2.33組大鼠炎癥因子水平比較 TNF-α、IL-1β、IL-6水平在對照組、損傷給藥組、損傷組中依次升高，兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。見表3。

表3 3組大鼠炎癥因子水平比較

3 討 論

神經(jīng)病理性疼痛的原因多樣，手術類型、年齡、麻醉時間等因素均可對神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病產生影響。目前，在此病治療中，各種藥物所能起到的效果還不夠理想，對此病進行有效治療依舊是臨床領域亟待解決的重要問題[5-8]。有研究表明，患者出現(xiàn)神經(jīng)病理性疼痛與細胞出現(xiàn)的壞死性凋亡有很大關系，因此在神經(jīng)病理性疼痛上可向此領域進行深入分析[9-12]。

RIP1與RIP3形成壞死小體，被認為是程序性壞死的重要分子標志，Nec-1對RIP1與 RIP3的結合可以產生抑制作用，達到有效阻斷壞死性凋亡的目的，繼而改善病理性損傷，緩解疼痛[13-15]。本研究結果顯示，損傷組、損傷給藥組TWL、MWT在術后1、3、5 d有明顯下降的趨勢，說明研究構建的分組具有嚴謹性與合理性。且研究結果顯示損傷給藥組TWL、MWT先下降后升高(P<0.001)，說明在大鼠損傷后，給予其Nec-1鞘內注射對于細胞壞死性凋亡起到抑制作用，可緩解壞死引起的大鼠熱痛覺過敏、機械痛覺等[16-18]。外周神經(jīng)損傷出現(xiàn)后，可以使大鼠脊髓背角膠質細胞激活，使大鼠炎癥因子釋放增加，而炎癥因子水平的升高又會對大鼠神經(jīng)病理性疼痛產生重要影響。TNF-α已被證實可直接激活RIP1，助力壞死性凋亡。由于TNF-α、IL-1β、IL-6可以直接反映炎癥因子激活情況，通過對其表達水平的觀察可以分析藥物對神經(jīng)病理性疼痛產生的影響。術后14 d，損傷組TNF-α、IL-1β、IL-6水平最高，明顯高于損傷給藥組，說明損傷組大鼠炎癥因子激活明顯強于損傷給藥組，證明Nec-1鞘內注射在抑制炎性反應等方面具有積極作用，繼而緩解大鼠神經(jīng)病理性疼痛[19-20]。

綜上所述，Nec-1鞘內注射對大鼠外周神經(jīng)病理性疼痛、炎性反應改善等均有積極意義，可以抑制大鼠脊髓背角細胞的壞死性凋亡，值得深入研究。