王碩石，鐘梅，廖義鴻*

(1.深圳市人民醫(yī)院，暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，南方科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 深圳 518020；2.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院，廣東 廣州 510515)

子癇前期是產(chǎn)科常見的妊娠并發(fā)癥，其主要表現(xiàn)為妊娠20周以后出現(xiàn)的高血壓、蛋白尿等，病情嚴(yán)重時(shí)可以誘發(fā)心、腦、腎、胎盤等多臟器功能障礙，是目前圍產(chǎn)期母胎死亡的主要原因之一[1-2]。多年來，各國(guó)科學(xué)家和醫(yī)務(wù)工作者們對(duì)子癇前期的發(fā)病機(jī)制和防治方法進(jìn)行了大量的臨床和基礎(chǔ)研究，但是尚無一個(gè)單一方法能夠盡早預(yù)測(cè)子癇前期。因此，尋找分子標(biāo)記物早期診斷子癇前期，對(duì)降低孕婦病死率、減少母胎不良結(jié)局有重要意義。氧化應(yīng)激學(xué)說在子癇前期發(fā)病機(jī)制中占有一席之地[3]。晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)是具有高度生物活性的氧化應(yīng)激代謝產(chǎn)物，本課題組前期研究表明，AOPP在子癇前期患者的外周血及胎盤中高表達(dá)，說明AOPP從氧化應(yīng)激的角度參與子癇前期的發(fā)病過程[4]。髓過氧化物酶(MPO)可以誘導(dǎo)產(chǎn)生活性氧(ROS)，促進(jìn)脂質(zhì)過氧化[5]。本研究通過檢測(cè)子癇前期孕婦血清中AOPP和MPO表達(dá)水平，評(píng)估兩因子對(duì)疾病的診斷價(jià)值，希望能夠?yàn)榕R床診治妊娠期高血壓疾病(尤其是子癇前期)提供新思路和新方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年9月—2020年10月收治的50 例子癇前期孕婦，根據(jù)病情嚴(yán)重程度分為輕度子癇前期(MPE)組25 例和重度子癇前期(SPE)組25 例，選取同期產(chǎn)檢的孕婦25 例為對(duì)照組。子癇前期的診斷依據(jù)教材婦產(chǎn)科學(xué)(第九版)標(biāo)準(zhǔn)[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：試管嬰兒、雙胎、各類慢性病(糖尿病、慢性高血壓等)及系統(tǒng)性疾病(血液系統(tǒng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)疾病等)。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器及試劑

低溫離心機(jī)(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司)；-80 ℃低溫冰箱(南京貝登醫(yī)療股份有限公司)；多功能酶標(biāo)儀(上海閃譜生物科技有限公司)；MPO ELLSA試劑盒(碧云天生物科技有限公司)、AOPP檢測(cè)試劑盒(南方醫(yī)科大學(xué)免疫學(xué)教研室提供)。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)

抽取5 mL肘靜脈血于EDTA抗凝管中，3 000 r/min離心30 min，收集上清液，保存于-80 ℃低溫冰箱中。酶聯(lián)免疫吸附法(ELLSA)法檢測(cè)各組血清MPO及AOPP的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 一般資料比較

三組年齡、孕周、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；收縮壓及舒張壓比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

表1 三組一般資料比較

2.2 三組MPO及AOPP表達(dá)水平比較

SPE組和MPE組血清MPO，AOPP表達(dá)均高于對(duì)照組(P<0.05)，且SPE組高于MPE組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表2)。

表2 三組MPO及AOPP水平比較

2.3 血清MPO及AOPP水平對(duì)子癇前期患者的診斷價(jià)值

ROC曲線顯示，MPO和AOPP可作為診斷子癇前期患者的標(biāo)志物，當(dāng)MPO≥40.45 μg/L，AOPP≥52.35 μmol/L時(shí)，呈高特異度和敏感度。聯(lián)合應(yīng)用AOPP及MPO診斷價(jià)值優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用AOPP或MPO診斷價(jià)值(見表3和圖1)。

表3 血清MPO及AOPP對(duì)子癇前期患者的診斷價(jià)值

圖1 血清MPO及AOPP診斷子癇前期的ROC曲線

3 討 論

子癇前期是妊娠期高血壓的一種類型，嚴(yán)重時(shí)多器官功能不同程度受損?！秼D產(chǎn)科學(xué)》(人衛(wèi)版)既往教材中將子癇前期分為輕度及重度；但是最新版(第9版)《婦產(chǎn)科學(xué)》將SPE認(rèn)為是MPE逐步發(fā)展到嚴(yán)重狀態(tài)[7]。在臨床工作中，由于輕度子癇前期和重度子癇前期在治療和終止妊娠的時(shí)機(jī)上仍有很大差別，我們依然將二者區(qū)別對(duì)待。子癇前期是孕婦特有的疾病，病因及發(fā)病機(jī)制不明，病情復(fù)雜，往往進(jìn)展迅速，嚴(yán)重危及母胎的生命安全。目前沒有先進(jìn)的預(yù)測(cè)和診治方法，如果病情持續(xù)加重，需終止妊娠，造成許多早產(chǎn)兒或者低體質(zhì)量?jī)旱某錾?，給家庭及社會(huì)造成各種負(fù)擔(dān)。因此，早期預(yù)測(cè)和診斷子癇前期，制訂合理且個(gè)體化的診治方案，降低子癇前期對(duì)母胎的危害，有重要的社會(huì)意義。AOPP在1996年由法國(guó)學(xué)者Witko-Sarsat等[8]第一次在全世界報(bào)道。最近發(fā)現(xiàn)肥胖、高齡、糖尿病、代謝綜合征、多囊卵巢綜合征等有子癇前期高危因素婦女中普遍存在慢性AOPP高表達(dá)[9]。目前關(guān)于AOPP與子癇前期的研究不多，汪琳和王欣[10]研究發(fā)現(xiàn)，子癇前期患者的血漿AOPP水平顯著升高，AOPP與24 h尿蛋白定量及血漿光抑素水平呈正相關(guān)，認(rèn)為AOPP可能通過誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生更多活性氧，加重慢性炎性反應(yīng)過程，間接造成了腎臟功能的損傷。韓靜等[11]認(rèn)為，孕婦如果患有SPE合并胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)受限(FGR)，其血清中胱抑素C及AOPP表達(dá)水平顯著高于正常孕婦，且母嬰妊娠結(jié)局不良者的血清胱抑素C及AOPP表達(dá)水平顯著高于預(yù)后良好者，說明子癇前期孕婦AOPP表達(dá)用于預(yù)測(cè)不良妊娠結(jié)局、指導(dǎo)診療方案、降低母嬰近遠(yuǎn)期并發(fā)癥有重要意義。本課題組近10年來一直在不斷地深入研究AOPP參與子癇前期發(fā)病機(jī)制的過程，且前期研究已明確子癇前期孕婦的血漿及胎盤組織中AOPP明顯高表達(dá)。本研究再次證實(shí)，AOPP在子癇前期患者血漿中的濃度明顯高于正常對(duì)照組，且重度子癇前期組明顯高于輕度子癇前期組，與前期研究結(jié)論一致[4]，說明AOPP不僅與子癇前期密切相關(guān)，而且與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。本課題組進(jìn)一步深入研究發(fā)現(xiàn)，AOPP可以下調(diào)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、侵襲和分化能力，并上調(diào)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡來干擾妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)功能[12]；AOPP可能通過還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)通路介導(dǎo)了妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡[13]；AOPP通過上調(diào)活性氧簇的表達(dá)，加重生物體氧化應(yīng)激狀態(tài)[14]。研究發(fā)現(xiàn)[15]，除了氧化應(yīng)激，AOPP還參與子癇前期血管內(nèi)皮功能障礙等致病環(huán)節(jié)，它通過上調(diào)滋養(yǎng)細(xì)胞抗血管生成因子，參與髓過氧化物酶阻擊病原侵入生物體。髓過氧化物酶本質(zhì)是白細(xì)胞酶，隸屬于過氧化物酶家族[16]?，F(xiàn)有研究認(rèn)為[17]，MPO作為介質(zhì)可以促進(jìn)多種氧化物的形成，對(duì)心血管系統(tǒng)產(chǎn)生損害。MPO可以修飾低密度脂蛋白并將其過氧化，形成氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)，OX-LDL被單核巨噬細(xì)胞侵噬后形成泡沫細(xì)胞；泡沫細(xì)胞大量聚集在血管內(nèi)皮上，導(dǎo)致血液淤積、流速緩慢等一系列心血管事件的發(fā)生。黃偉聰和周曉梅[18]研究發(fā)現(xiàn)，MPO可以通過多種途徑加速血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，誘發(fā)調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)：首先，MPO與肌酸激酶結(jié)合后沉積于內(nèi)皮細(xì)胞表面，隨后進(jìn)入胞質(zhì)，下調(diào)緩激肽的表達(dá)和釋放，抑制血管張力；其次，MPO誘導(dǎo)產(chǎn)生組織因子，從而使血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷甚至凋亡，而血管內(nèi)皮損傷/凋亡恰恰是子癇前期發(fā)病的學(xué)說之一，結(jié)合本論文研究結(jié)果，MPO高表達(dá)于子癇前期患者血清中，且SPE組顯著高于MPE組。因此可以認(rèn)為MPO參與子癇前期的發(fā)病。

本研究發(fā)現(xiàn)子癇前期患者血清中AOPP和MPO的表達(dá)水平均高于同期正常產(chǎn)檢的孕婦，而且兩者均與子癇前期的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，說明AOPP與MPO在誘導(dǎo)氧化應(yīng)激及血管內(nèi)皮損傷方面具有協(xié)同作用。血清AOPP和MPO檢測(cè)簡(jiǎn)單易行。本研究進(jìn)一步通過ROC曲線分析結(jié)果提示，AOPP和MPO可作為診斷子癇前期的生物學(xué)標(biāo)記物，且建議兩者聯(lián)合應(yīng)用，以取得更有效的診斷價(jià)值。因此，聯(lián)合應(yīng)用AOPP及MPO診斷子癇前期，可能會(huì)更早地發(fā)現(xiàn)和預(yù)測(cè)子癇前期，為改善母嬰不良妊娠結(jié)局提供新的思路。子癇前期嚴(yán)重影響孕產(chǎn)婦及其胎兒/新生兒，尤其是當(dāng)其進(jìn)展到較為嚴(yán)重程度時(shí)，會(huì)引起多個(gè)器官功能的受累，甚至母嬰死亡。