吳怡 馬鴻飛 曹永佳 司靜 崔寶凱

（北京林業(yè)大學(xué)生態(tài)與自然保護學(xué)院，北京 100083）

落葉松銹迷孔菌（Porodaedalea laricis（Jacz. ex Pilát）Niemel?），隸屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycota），傘菌綱（Agaricomycetes），銹革孔菌目（Hymenochaetales），銹革孔菌科（Hymenochaetaceae），銹迷孔菌屬（Porodaedalea）［1-3］，是一種藥用真菌［4-5］，同時也是白腐真菌［3，6］。其能夠分解枯枝倒木，加速生態(tài)系統(tǒng)中物質(zhì)元素的循環(huán)，促進森林樹木的天然更新，參與改變森林組分及演替路徑，同時給野生動植物提供適宜的營養(yǎng)物質(zhì)，并與其他生物相互作用，共同維系著生態(tài)系統(tǒng)的動態(tài)平衡［7］。

之所以能夠在森林生態(tài)系統(tǒng)中扮演著重要的氧化還原角色，主要是由于P. laricis可分泌多種木質(zhì)素降解酶系，如木素過氧化物酶（Lignin peroxidase，LiP）、錳過氧化物酶（Manganese peroxidase，MnP）和漆酶（Laccase）等［8］。其中，漆酶（EC 1.10.3.2）是一種多銅氧化酶，可催化分子氧的4 個電子還原成水，并伴隨有4 個活性底物自由基的形成，進而導(dǎo)致解聚、聚合、互變異構(gòu)、氧化裂解、氧化、脫羧等多個非酶促反應(yīng)的發(fā)生［9-12］。基于上述催化機理，漆酶可作用的底物十分廣泛，包括苯酚、雙酚、甲氧基類、甲基類、羥基類和氯酚化合物、取代基苯和苯甲酸、苯丙脂類、芳香類和脂肪胺、苯硫醇、多芳香族碳氫化合物、多酚類化合物（抗壞血酸、賴氨酸和一些無機離子）等［13-15］。據(jù)此，漆酶由于具有廣泛的底物特異性，穩(wěn)定性高，但對輔因子和環(huán)境條件要求低，因而具有非常重要的使用價值，可作為多種工藝過程中有效的生物催化劑：紡織和化妝品行業(yè)中對于染料和顏料的降解和修飾；能源領(lǐng)域；生物合成具有新性質(zhì)的不同藥物，如生物聚合物、抗氧化劑、抗癌藥物、抗生素、類固醇和其他重要化合物等；污染物降解；食品加工；結(jié)合納米技術(shù)制造生物傳感器以檢測多種酚類化合物、氧分子、疊氮化物、嗎啡、可待因、兒茶酚胺和植物類黃酮等［15-29］。

本研究通過液體發(fā)酵培養(yǎng)的方式，利用響應(yīng)面設(shè)計優(yōu)化了P. laricis產(chǎn)胞外漆酶的液體培養(yǎng)基，并對其染料脫色能力進行了分析，以期為充分挖掘和利用該菌資源奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株P(guān). laricis菌株Dai 18917，采自內(nèi)蒙古自治區(qū)呼倫貝爾市根河市落葉松（Larixsp.）活樹上，經(jīng)分離純化獲得，現(xiàn)保藏于北京林業(yè)大學(xué)。

1.1.2 試劑 瓊脂、蛋白胨、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、CaCl2·2H2O、酒石酸銨、琥珀酸鈉、吐溫80、維生素B1、2，2′-連氮-雙（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（2，2′-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid），ABTS）購自Sigma 試劑公司（美國）；其他試劑為分析純。

1.1.3 培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯300.0 g/L，蛋白胨5.0 g/L，葡萄糖20.0 g/L，瓊脂20.0 g/L，KH2PO41.0 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，pH 自然，1×105Pa 高壓滅菌30 min，待指溫可觸時加入終濃度為0.01 g/L 已過濾除菌的維生素B1，充分混勻備用。

基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯300.0 g/L，蛋白 胨5.0 g/L， 葡 萄 糖20.0 g/L，KH2PO41.0 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，pH 自然，1×105Pa 高壓滅菌30 min，待指溫可觸時加入終濃度為0.01 g/L 已過濾除菌的維生素B1，充分混勻備用。

產(chǎn)漆酶液體培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯300.0 g/L，蛋 白 胨5.0 g/L， 葡 萄 糖20.0 g/L，KH2PO41.0 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，MnSO4·H2O 0.15 g/L，CaCl2·2H2O 0.1 g/L，酒石酸銨2.0 g/L，琥珀酸鈉1.5 g/L，吐溫801.5 mL/L，玉米芯25.0 g/L，pH自然，1×105Pa 高壓滅菌30 min，待指溫可觸時加入終濃度為0.01 g/L 已過濾除菌的維生素B1，充分混勻備用。

1.2 方法

1.2.1 活化及培養(yǎng) 于固體平板培養(yǎng)基上活化，28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)10 d 備用。

1.2.2 種子發(fā)酵及液體培養(yǎng) 取250 mL 三角瓶分裝100 mL 基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基，接種5 個直徑1 cm 菌餅，于恒溫搖床28℃、150 r/min 振蕩培養(yǎng)9-10 d。內(nèi)切式勻漿機以5000 r/min、1 min 將種子發(fā)酵菌液制成懸液，充分振蕩，以10.0%（V/V）接種量加入含100 mL 產(chǎn)漆酶液體培養(yǎng)基的250 mL 三角瓶中，于恒溫搖床28℃、150 r/min 振蕩培養(yǎng)，設(shè)3 個重復(fù)。

1.2.3 響應(yīng)面設(shè)計優(yōu)化產(chǎn)漆酶液體培養(yǎng)基

1.2.3.1 Plackett-Burman 設(shè) 計 選 擇 對P. laricis產(chǎn)胞外漆酶能力有影響的11 個因子為變量，即去皮馬鈴薯（X1）、CaCl2·2H2O（X2）、葡萄糖（X3）、吐溫80（X4）、蛋白胨（X5）、MgSO4·7H2O（X6）、酒石酸銨（X7）、琥珀酸鈉（X8）、MnSO4·H2O（X9）、維生素B1（X10）和玉米芯（X11），響應(yīng)值為胞外漆酶活性，采用Design-Expert 10.0 軟件進行試驗設(shè)計和數(shù)據(jù)分析。每個因子取高（+1）、低（-1）兩個水平。試驗設(shè)計12，重復(fù)3 次。

1.2.3.2 最陡爬坡設(shè)計 通過Plackett-Burman 設(shè)計試驗結(jié)果中各個顯著因子影響效應(yīng)的大小設(shè)定步長及變化方向，尋找峰值，快速逼近最佳響應(yīng)區(qū)域。

1.2.3.3 Box-Behnken 設(shè)計 通過最陡爬坡設(shè)計結(jié)果，將漆酶活性最高的一組數(shù)據(jù)作為Box-Behnken設(shè)計的中心點，采用Design-Expert 10.0 軟件進行優(yōu)化分析，設(shè)計五因子二水平試驗。

1.2.3 漆酶提取 將整瓶培養(yǎng)物抽濾，所得發(fā)酵液經(jīng)12000 r/min 離心20 min，上清液用于測定漆酶活性。

1.2.4 漆酶活性測定 漆酶活性測定參照相關(guān)文獻［17，30］。同等條件下分別以去離子水替代上清液、ABTS 的反應(yīng)體系設(shè)為空白及對照。定義25℃、1 min 內(nèi)催化氧化1 μmol ABTS 所需的酶量為1 個漆酶活力單位（U），已知420 nm 處ABTS 摩爾消光系數(shù)ε420= 3.6×104L/（mol·cm）。

1.2.5 漆酶對合成染料的脫色 表1 列出了供試合成染料及其顏色索引編碼、索引名稱、化學(xué)結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)類別及特征波長等詳細信息。使用時，將合成染料固體粉末配制成濃度為50.0 mg/L 的水溶液，經(jīng)0.22 μm 孔徑的可換濾膜過濾除菌后即用。共10.0 mL 脫色體系中含有50.0 mg/L 染料（活性亮藍X-BR、雷馬素亮藍R、酸性黑172、剛果紅、亞甲基藍、中性紅、靛藍、萘酚綠B 和結(jié)晶紫）、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液（pH 5.0）和1.0 U/mL 粗酶液，于恒溫搖床50℃、150 r/min 振蕩反應(yīng)168 h，期間測定反應(yīng)液吸光值A(chǔ)的變化。設(shè)3 個重復(fù)，求平均值。以同等條件下未添加酶液及未添加染料的體系設(shè)為空白及對照。根據(jù)下列公式計算P. laricis胞外漆酶對合成染料的脫色率：

染料脫色率（%）=［1 -（A樣品-A對照）/A空白］×100

其中，A空白為以去離子水替代酶液的反應(yīng)體系的吸光值，A樣品為添加酶液的反應(yīng)體系的吸光值，A對照為以去離子水替代染料的反應(yīng)體系的吸光值。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析 所得結(jié)果以x-±s表示。利用SPSS 20.0 軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（ANOVA）和t-檢驗。**P＜ 0.05 和*P＜ 0.01 分別為差異顯著和差異極顯著。

表1 供試合成染料

表1 續(xù)表

2 結(jié)果

2.1 P. laricis在液體培養(yǎng)條件下胞外漆酶活性的變化

由圖1 可知，在培養(yǎng)的20 d 內(nèi)，P. laricis胞外漆酶呈先上升后下降的趨勢，到第8 天達到最大值，為1.17 U/mL。以下利用響應(yīng)面設(shè)計優(yōu)化P. laricis產(chǎn)胞外漆酶液體培養(yǎng)基的試驗均設(shè)在培養(yǎng)第8 天取樣。

圖1 液體培養(yǎng)過程中P. laricis 胞外漆酶活性的變化

2.2 響應(yīng)面設(shè)計優(yōu)化P. laricis產(chǎn)胞外漆酶液體培養(yǎng)基

2.2.1 Plackett-Burman 設(shè)計 選取試驗次數(shù)為12 的Plackett-Burman 設(shè)計，對影響P. laricis產(chǎn)胞外漆酶能力的11 個因子的顯著性進行研究。利用Design-Expert 10.0 軟件得到單因子線性模型：

Y= + 1.818 + 0.370 ×X1- 0.328 ×X2- 0.125 ×X3- 0.257 ×X4+ 0.115 ×X5+ 0.138 ×X6+ 0.145 ×X7- 0.085 ×X8- 0.105 ×X9+ 0.025 ×X10+ 0.223 ×X11

該模型P值為0.0346，判定系數(shù)R2和校正判定系數(shù)R2分別為0.9996 和0.9956，說明該線性模型與試驗數(shù)據(jù)的擬合程度較高。由表2 可知，去皮馬 鈴 薯（X1）、CaCl2·2H2O（X2）、吐 溫80（X4）、酒石酸銨（X7）和玉米芯（X11）的P值均小于0.05，說明它們對試驗結(jié)果的影響顯著，根據(jù)線性模型系數(shù)可將因子的影響程度排序為X1＞X2＞X4＞X11＞X7，其中，X1、X7和X11為正效應(yīng)因子，X2和X4為負效應(yīng)因子。因此，選取去皮馬鈴薯、CaCl2·2H2O、吐溫80、酒石酸銨和玉米芯進行最陡爬坡設(shè)計。

表2 Plackett-Burman 設(shè)計及各因子對P. laricis 胞外漆酶活性的影響

表3 最陡爬坡設(shè)計試驗結(jié)果

2.2.2 最陡爬坡設(shè)計 去皮馬鈴薯（X1）、CaCl2·2H2O（X2）、吐溫80（X4）、酒石酸銨（X7）和玉米芯（X11）這5 個因子的變化方向及步長的試驗設(shè)計及結(jié)果見表3。可以看到，第4 組試驗的胞外漆酶活性最高。因此，確定以第4 組的數(shù)據(jù)作為Box-Behnken 設(shè)計的中心點，即去皮馬鈴薯（X1）、CaCl2·2H2O（X2）、吐溫80（X4）、酒石酸銨（X7）和玉米芯（X11）分別為380.0 g/L、0.035 g/L、0.35 mL/L、5.0 g/L 和50.0 g/L。

2.2.3 Box-Behnken 設(shè) 計 在Plackett-Burman 設(shè) 計和最陡爬坡設(shè)計的試驗結(jié)果基礎(chǔ)上，以漆酶活性為響應(yīng)值，Box-Behnken 設(shè)計及結(jié)果列于表4。利用Design-Expert 10.0 軟件對表3 試驗數(shù)據(jù)進行回歸擬合，得到對編碼變量的二次多元回歸方程：

Y= + 3.170 - 0.214 ×X1+ 0.289 ×X2+ 0.136 ×X4- 0.014 ×X7+ 0.234 ×X11- 0.008 ×X1X2+ 0 ×X1X4- 0.530 ×X1X7+ 0.585 ×X1X11- 0.533 ×X2X4-0.273 ×X2X7- 0.010 ×X2X11+ 0.168 ×X4X7+ 0.313×X4X11+ 0.208 ×X7X11- 0.304 ×X12- 0.079 ×X22-0.333 ×X42- 0.381 ×X72- 0.045 ×

由表5 可知，該模型P＜ 0.0001，極顯著；一次 項X1、X2、X4、X7和X11、交 互 項X1X7、X1X11、X2X4、X2X7、X2X11、X4X7、X4X11和X7X11、 二次項和對響應(yīng)值的影響顯著（P＜ 0.05），而交互項X1X2和X1X4的影響不顯著（P＞0.05）；失擬項P值為0.6293，不顯著，說明該模型不存在失擬因素?；貧w方程的判定系數(shù)R2為0.9999，校正后的判定系數(shù)R2為0.9997，表明響應(yīng)值的變化有99.97%來自所選變量，說明該模型擬合度較好，可用于對試驗結(jié)果進行分析和預(yù)測。

圖2 試驗值與預(yù)測值分布的平價圖呈現(xiàn)一條直線，表明該模型預(yù)測值與試驗值的差異很小。圖3顯示了利用回歸方程分析結(jié)果繪制的P. laricis胞外漆酶活性隨各因子變化的等高線圖和響應(yīng)曲面圖。

2.2.4 驗證試驗 由回歸方程得到P. laricis產(chǎn)胞外漆酶的最佳液體培養(yǎng)基為：去皮馬鈴薯365.61 g/L、蛋白胨5.0 g/L、葡萄糖20.0 g/L、KH2PO41.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、MnSO4·H2O 0.15 g/L、CaCl2·2H2O 0.03 g/L、酒石酸銨6.68 g/L、琥珀酸鈉1.5 g/L、吐溫800.48 mL/L、玉米芯46.43 g/L、維生素B1 0.01 g/L，此時胞外漆酶活性為3.32 U/mL。按此條件進行驗證試驗（圖4），重復(fù)3 次，得到培養(yǎng)第8 d 時平均胞外漆酶活性為3.29 U/mL，比優(yōu)化前提高了2.81 倍，與上述預(yù)測值非常相近，證實擬合的回歸方程準(zhǔn)確可靠，能夠真實有效地反映各因子對P. laricis胞外漆酶活性的影響。

2.3 P. laricis胞外漆酶對合成染料的脫色作用

表6 顯示了利用優(yōu)化培養(yǎng)基進行液體培養(yǎng)條件下，P. laricis胞外漆酶對不同化學(xué)結(jié)構(gòu)合成染料包括活性亮藍X-BR、雷馬素亮藍R、酸性黑172、剛果紅、亞甲基藍、中性紅、靛藍、萘酚綠B 和結(jié)晶紫的脫色能力。其中，P. laricis胞外漆酶對蒽醌類和偶氮類（不含金屬）染料的脫色能力最強，反應(yīng)168 h 后，雷馬素亮藍R、活性亮藍X-BR 和剛果紅的脫色率均可達到90%以上（97.21%、95.64%和91.63%）；對雜環(huán)類、三苯甲烷類和菁類染料的脫色能力次之，第168 小時中性紅、結(jié)晶紫和亞甲基藍的脫色率分別可達到74.65%、68.80%和61.42%；對靛藍類染料的脫色能力較弱（48.60%）；而對結(jié)構(gòu)中含金屬的偶氮類和亞硝基類染料的脫色能力最弱，反應(yīng)168 h 后酸性黑172 和萘酚綠B 的脫色率僅為36.11%和25.13%。

3 討論

我國生物資源十分豐富，大量具有應(yīng)用潛力的真菌資源有待挖掘和利用［31-41］。P. laricis作為一種兼具藥用價值的白腐真菌，可分泌多種生物酶系以高效利用木質(zhì)纖維，其中漆酶由于具有獨特的降解機理及廣泛的底物特異性，因而受到極大關(guān)注［42-44］。碳氮源可提供細胞生命活動所需的能量及合成產(chǎn)物的骨架，無機鹽和金屬離子也在微生物生長代謝過程中起著重要作用，但不同微生物所需最適碳氮源及無機營養(yǎng)不同，且供其生長或合成代謝產(chǎn)物的各個階段所需的營養(yǎng)物質(zhì)也不盡相同［17-18，45-54］。本研究通過液體發(fā)酵培養(yǎng)的方式，利用響應(yīng)面設(shè)計優(yōu)化了P. laricis產(chǎn)胞外漆酶的液體培養(yǎng)基，并分析其對合成染料的脫色能力，以期為真菌漆酶的研究和應(yīng)用提供技術(shù)支持。

即前期先通過常規(guī)液體發(fā)酵培養(yǎng)確定了P.laricis產(chǎn)胞外漆酶的峰值出現(xiàn)在培養(yǎng)第8 天；進而利用Plackett-Burman 設(shè)計從11 個培養(yǎng)基成分中篩選出去皮馬鈴薯、CaCl2·H2O、吐溫80、酒石酸銨和玉米芯劑量5 個顯著因子，其中去皮馬鈴薯、酒石酸銨和玉米芯為正效應(yīng)因子，CaCl2·H2O 和吐溫80

為負效應(yīng)因子；繼而進行最陡爬坡設(shè)計，將響應(yīng)值最高的組合作為Box-Behnken 設(shè)計的中心點；最后通過Box-Behnken 設(shè)計進行試驗、數(shù)據(jù)分析及建立模型，得到P. laricis產(chǎn)胞外漆酶的最佳液體培養(yǎng)基組成為：去皮馬鈴薯365.61 g/L、蛋白胨5.0 g/L、葡萄糖20.0 g/L、KH2PO41.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、MnSO4·H2O 0.15 g/L、CaCl2·2H2O 0.03 g/L、酒 石酸銨6.68 g/L、琥珀酸鈉1.5 g/L、吐溫800.48 mL/L、玉米芯46.43 g/L、維生素B1 0.01 g/L，將漆酶活性由初始的1.17 U/mL 提高至3.29 U/mL，證實了利用響應(yīng)面設(shè)計優(yōu)化確定最優(yōu)組合的方案切實可行，該種方法可用于發(fā)現(xiàn)并準(zhǔn)確表達試驗因素及其交互作用對目標(biāo)響應(yīng)值的影響。

表4 各因子水平及Box-Behnken 設(shè)計試驗結(jié)果

印染工業(yè)在經(jīng)濟發(fā)展中占據(jù)著重要位置，但也成為水污染的關(guān)鍵因素之一，其可排放出大量含有有害化學(xué)物質(zhì)的廢水，包括染料、表面活性劑、懸浮物和有機物等，這些物質(zhì)能夠破壞水體的美觀，阻礙光照投射、抑制光合作用，進而對營養(yǎng)鏈各層次的生物體均產(chǎn)生不利影響［55-56］?；诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)的不同，合成染料可分為蒽醌類染料、偶氮類染料、菁類染料、雜環(huán)類染料、靛藍類染料、亞硝基類染料、三苯甲烷類染料等，目前已被用于成為合成和天然的紡織纖維、塑料、皮革、食品、染發(fā)劑、蠟、藥品、油墨和涂料的著色劑等［57-58］。而基于上述發(fā)現(xiàn)，漆酶具有獨特的降解機理和廣泛的底物特異性，穩(wěn)定性高，不產(chǎn)生二次污染物，將其作為綠色催化劑應(yīng)用于染料脫色已成為國內(nèi)外環(huán)保領(lǐng)域的研究熱點［19，22-23，59-67］。本研究中發(fā)現(xiàn)，P. laricis胞外漆酶對蒽醌類和偶氮類（不含金屬）染料的脫色能力最強；對雜環(huán)類、三苯甲烷類和菁類染料的脫色能力次之；對靛藍類染料的脫色能力較弱；而對結(jié)構(gòu)中含金屬的偶氮類和亞硝基類染料的脫色能力最弱，表明所得到的漆酶可被應(yīng)用于降解蒽醌類染料，具體的降解過程和催化機理還有待進一步深入探討。

表5 Box-Behnken 設(shè)計方差分析

圖2 P. laricis 胞外漆酶活性試驗值與預(yù)測值分布的平價圖

4 結(jié)論

本研究通過將Plackett-Burman 設(shè)計、最陡爬坡設(shè)計和Box-Behnken 設(shè)計相結(jié)合，獲得了P. laricis產(chǎn)胞外漆酶的最適培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯365.61 g/L、蛋白胨5.0 g/L、葡萄糖20.0 g/L、KH2PO41.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、MnSO4·H2O 0.15 g/L、CaCl2·2H2O 0.03 g/L、酒石酸銨6.68 g/L、琥珀酸鈉1.5 g/L、吐溫800.48 mL/L、玉米芯46.43 g/L、維生素B1 0.01 g/L。在該條件下，P. laricis漆酶活性最高達到3.29 U/mL，相比于優(yōu)化前提高了2.81 倍。此外，將P. laricis胞外漆酶應(yīng)用于降解多種合成染料，發(fā)現(xiàn)該酶液對蒽醌類和偶氮類（不含金屬）染料的脫色能力最強；對雜環(huán)類、三苯甲烷類和菁類染料的脫色能力次之；對靛藍類染料的脫色能力較弱；而對結(jié)構(gòu)中含金屬的偶氮類和亞硝基類染料的脫色能力最弱，表明所得到的漆酶可被應(yīng)用于降解蒽醌類染料。

圖3 去皮馬鈴薯（X1，g/L）、CaCl2·2H2O（X2，g/L）、吐溫80（X4，mL/L）、酒石酸銨（X7，g/L）和玉米芯（X11，g/L）的相互作用對P. laricis 胞外漆酶活性影響的等高線圖和響應(yīng)曲面圖

圖4 優(yōu)化液體培養(yǎng)基條件下P. laricis 胞外漆酶活性的變化

168 h 156 h 144 h 132 h 120 h用作色108 h脫的料染成96 h合對酶漆84 h外6 P. laricis 胞0.9711.12±1.5719.78±1.4625.56±3.0128.96±0.0530.45±0.4135.69±0.1636.32±0.2836.11±4.501.8612.63±0.9717.84±0.0322.35±1.5423.56±0.6525.32±5.1224.54±2.0325.70±1.0525.13±0.9472 h 0.847.51±0.609.69±表60 h 4.166.63±0.547.84±48 h 4.515.89±1.6017.28±4.8725.62±2.0139.50±0.0646.63±0.0850.36±0.1965.62±0.9470.96±2.6772.36±3.4573.26±4.8174.62±2.6474.65±2.674.1211.62±3.2518.29±0.5120.35±1.5431.21±0.6836.65±3.5440.12±5.6441.23±2.5143.56±0.1648.56±3.3249.63±3.0148.60±1.205.127.68±3.5814.52±0.0725.64±3.4543.21±4.6752.32±2.4955.65±0.4060.12±5.6465.15±1.1166.48±0.3267.97±4.2168.46±0.6268.80±2.4736 h 0.644.64±2.3212.70±0.1218.65±0.0522.25±0.0930.54±1.0436.68±3.5140.23±3.7747.52±2.1353.47±1.0557.14±2.0660.32±2.2261.35±0.0461.42±1.060.028.25±0.158.26±4.745.69±1.217.54±24 h/%率0.0220.65±2.3232.51±1.3242.23±0.2446.67±3.2350.12±2.3257.78±1.5470.13±5.2180.26±1.6787.36±2.0490.32±1.5791.12±4.6295.13±0.6595.64±2.650.3215.56±1.6823.67±2.7435.11±1.5445.32±0.0652.64±4.5665.32±3.0274.45±1.0681.96±1.0186.34±3.0292.48±5.1493.74±3.0197.07±0.1597.21±0.78色脫12 h X-BR 8.18±R 5.23±1.65±1.542.68±9.12±2.1316.62±0.1226.32±5.1437.62±3.2042.32±1.6447.69±1.7762.36±4.1372.65±3.0877.63±0.5182.38±0.0887.69±1.2090.32±0.4191.56±0.1291.63±4.196.56±4.018.96±3.48±5.166.35±1.26±2.322.68±2.63±0.693.65±3.12±2.654.56±藍料藍亮172 B染藍成亮素黑紅基紅綠紫性馬性果甲性藍酚晶合活雷酸剛亞中靛萘結(jié)