席 梅 王 欣 陸 艷

(1 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京，100010； 2 中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京，100053；3 北京大學(xué)藥學(xué)院實驗教學(xué)中心，北京，100191)

?

白芷有效成分含量測定及其指紋圖譜研究

席 梅1王 欣2陸 艷3

(1 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京，100010； 2 中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京，100053；3 北京大學(xué)藥學(xué)院實驗教學(xué)中心，北京，100191)

目的：通過對白芷指紋圖譜研究，分析判斷不同產(chǎn)地、種屬的白芷藥材質(zhì)量。方法：選取2012年3月北京中醫(yī)醫(yī)院購進(jìn)的不同產(chǎn)地的白芷7批，按照種屬不同分為4大組，并未每組內(nèi)按采購批次分為7個小組。采用高效液相色譜法對其進(jìn)行成分含量的測定，根據(jù)特征峰的選取原則進(jìn)行白芷藥材HPLC指紋圖譜的建立，同時對7批白芷進(jìn)行指紋圖譜的測定確定4個峰為共有特征色譜峰并進(jìn)行相似度比較，并判定白芷質(zhì)量。結(jié)果：杭白芷20120305(重慶萬州)、滇白芷20120307(云南)為偽品，其余批次品質(zhì)為一般或優(yōu)，其中禹白芷2個批次品質(zhì)均為優(yōu)，優(yōu)于其他組別的批次。結(jié)論：白芷藥材指紋圖譜的建立可以對藥材有效成分進(jìn)行精準(zhǔn)測量，該方法穩(wěn)定性高，重現(xiàn)性好，對不同產(chǎn)地的白芷品質(zhì)辨識提供有利的方法，達(dá)到快速、準(zhǔn)確評價藥材質(zhì)量的目的，值得推薦。

白芷；有效成分含量測定；指紋圖譜；特征峰

白芷Angelicadahurica，傘形科植物，在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中藥用歷史悠久，其主要功能為解熱、鎮(zhèn)痛以及抗炎等[1]，主要用其干燥根。隨著白芷的藥材植物來源、生態(tài)環(huán)境等因素的影響，市場上越來越多的白芷代用品、類似品開始流通起來，間接對使用白芷類藥物治療的病患產(chǎn)生不小影響[2]。白芷根據(jù)其變種主要有以下4大類可入藥，祁白芷主產(chǎn)于河北，禹白芷主產(chǎn)于河南，杭白芷主產(chǎn)于四川、重慶、浙江等，及滇白芷主產(chǎn)于云南。白芷主要成為為香豆素類，其中歐前胡素與異歐前胡素為2種代表性香豆素化合物。目前，建立全面以及系統(tǒng)地控制白芷質(zhì)量的分析方法顯得尤為重要。指紋圖譜質(zhì)量控制模式可以較為綜合地反映藥材中各主要成分及其相對含量，能更全面地提供質(zhì)量評價信息[3]。鑒于此，我們通過研究對不同產(chǎn)地白芷中的有效成分進(jìn)行含量測定及其指紋圖譜的建立，通過相似度及特征峰比較提供一種藥材品質(zhì)的判斷方法，現(xiàn)總結(jié)報道如下。

1 資料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 儀器與試劑 島津LC-10ATVP高效液相色譜儀；島津SPD-10AVP紫外檢測器；TB328B型電光分析天平(上海天平儀器廠)；歐前胡素對照品來源于中國藥品生物制品鑒定所。甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

1.1.2 中藥材 白芷藥材由北京大學(xué)藥學(xué)院實驗中心標(biāo)本室提供，經(jīng)鑒定為白芷Angelica dahurica的干燥根。白芷7個批次根據(jù)種屬不同分為祁白芷、禹白芷、杭白芷、滇白芷，具體產(chǎn)地詳見表1。

表1 不同種屬白芷的批次和產(chǎn)地

1.2 研究方法

1.2.1 供試品溶液制備 將10批次白芷藥材每批選取1 g藥材制成粗粉，過12目篩，精密稱定。于50 mL圓底燒瓶中加入25 mL甲醇溶液超聲提取30 min。取濾液減壓蒸干，并用甲醇溶液精密定容至50 mL容量瓶種，用45 μm微孔濾膜取20 mL，做好批號待用。

1.2.2 對照品溶液制備 精密稱取歐前胡素對照品5 mg，異歐前胡素對照品2 mg，置于50 mL量瓶中，使用甲醇溶解并定容待用。

1.2.3 色譜條件 流速為0.8 mL/min，檢測波長為254 nm，色溫為室溫，每次進(jìn)樣量50 μL。平衡色譜柱時間為10 min。洗脫總時間為80 min，流動相為甲醇：水，梯度洗脫，甲醇體積百分比從15%增加到90%。

圖1 歐前胡素和異歐前胡素對照品色譜圖

圖2 白芷高效液相色譜4個特征指紋峰

1.2.4 方法 將7批次藥材按種屬不同分為祁白芷組、禹白芷組、杭白芷組、滇白芷組4個組別，每組里每批藥材分別制備供試品溶液進(jìn)行HPLC分析，分析各個樣品的指紋特征峰及相似度。

選取白芷特征圖譜中指紋峰占總峰面積10%以上的4個特征峰。詳見圖2。標(biāo)記為1號、2號、3號和4號峰。比較不同批次種4個指紋峰的相對峰面積。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 通過以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定[5]：若相似度在0.900以上，則判定為優(yōu)質(zhì)藥材；若相似度在0.800～0.900之間，則判定為藥材質(zhì)量一般；若相似度低于0.800，則判定為偽品。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析。數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4個組別相似度比較 杭白芷20120305(重慶萬州)、滇白芷20120307(云南)為偽品，其余批次品質(zhì)為一般或優(yōu)，其中禹白芷2個批次品質(zhì)均為優(yōu)，優(yōu)于其他組別的批次。

表2 4個組別各批次相似度及品質(zhì)結(jié)果比較

2.2 4個組別共有特征峰相對峰面積比較 與2.1中藥材品質(zhì)相對應(yīng)，偽品的2個批次種特征峰面積較小，與其他組別差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，優(yōu)質(zhì)品與一般品特征峰面積差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表3 2個組別共有指紋峰相對峰面積的RSD

3 討論

白芷因其藥材來源、種屬的不同，采收、炮制的差異，生長環(huán)境的差異，不同產(chǎn)地的白芷必然存在顯著的差異。白芷根據(jù)其種屬不同可分為四大類，因此需要建立起一種有效的質(zhì)量控制方法以區(qū)別不同產(chǎn)品白芷的品質(zhì)。白芷藥材指紋圖譜的建立及檢測效果顯著，方法穩(wěn)定，具有重復(fù)性，在檢測白芷質(zhì)量方面有積極作用[8]。目前，由于白芷在藥劑制作上的需求較多，多種多樣的白芷開始出現(xiàn)在市場上。杭白芷為白芷商品藥材的主流品種，其數(shù)量約占白芷產(chǎn)量的70%。四大類白芷雖然杭白芷產(chǎn)量最大，但是否品質(zhì)最佳，含有效成分較高，這亟待分析[7]。

我們通過建立完整的白芷藥材高效液相色譜指紋圖譜對不同產(chǎn)地、種屬的白芷進(jìn)行分析和評價，發(fā)現(xiàn)指紋圖譜具有較高的精準(zhǔn)度。這與TabitCE等人[9-10]的報道相一致，表明指紋圖譜分析方法穩(wěn)定，可靠，能直觀地反映出白芷的有效成分，符合張慧等人[8]的報道，表明指紋圖譜檢測具有見較高的重復(fù)性以及穩(wěn)定性[11-12]。通過對特征指紋峰分析及相似度分析，不難看出河南地區(qū)白芷質(zhì)量最佳，其次為河北地區(qū)，雖然杭白芷產(chǎn)量較高，但重慶地區(qū)所產(chǎn)白芷因其有效成分含量遠(yuǎn)低于其他種屬，應(yīng)為偽品，滇白芷也不應(yīng)入藥。

我們認(rèn)為指紋圖譜根據(jù)產(chǎn)地不同，選擇的共有模式結(jié)合系統(tǒng)聚類分析結(jié)果，保證了共有模式建立的代表性和科學(xué)性，導(dǎo)致指紋圖譜檢測結(jié)果清晰可信，為多批次同科屬藥材的分析提供了客觀科學(xué)的方法。

綜上所述，白芷藥材指紋圖譜的建立可以對藥材有效成分進(jìn)行精準(zhǔn)測量，該方法穩(wěn)定性高，重現(xiàn)性好，對不同產(chǎn)地的白芷品質(zhì)辨識提供有利的方法，達(dá)到快速、準(zhǔn)確評價藥材質(zhì)量的目的，值得推薦。

[1]陸洋，白潔，王玥，等.正交試驗結(jié)合藥效學(xué)實驗優(yōu)選復(fù)方南星止痛膏處方提取工藝[J].中國中醫(yī)雜志，2013,38(16)：2590-2593.

[2]趙亮，曹紅.白芷有效成分提取工藝的優(yōu)化及其中藥材質(zhì)量研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011,11(14)：2759-2766.

[3]鄭光雅，米小琴，郭沛琳，等.白芷提取物的HPLC指紋圖譜研究[J].華西藥學(xué)雜志，2013,28(4)：398-400.

[4]張翠珍，陳雅民.牽正散治療面癱誤區(qū)探析[J].河北中醫(yī)，2012,34(1)：57-58.

[5]李玲，鄧才富，羅川，等.渝產(chǎn)白芷質(zhì)量綜合分析和評價[J].時珍國醫(yī)國藥，2013,24(10)：2515-2516.

[6]李小芳，陳錫林.浙江地產(chǎn)藥材香白芷生藥學(xué)鑒定研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2013,48(8)：614-615.

[7]盧曉琳，馬羚，馬逾英，等.與熏硫加工相關(guān)的白芷化學(xué)成分研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013,19(22)：74-78.

[8]張慧，呂潔麗，張崇，等.白芷藥材水提液指紋圖譜的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2013,25(4)：506-510.

[9]Tabit CE， Chung W B，Hamburg NM，et al.Endothelial dysfunction in diabetes mellitus： molecular mechanisms and clinical implications[J]. Rev Endocr Metab Disord， 2010，11(1)：61-74.

[10]Endemann DH， Schiffrin EL.Endothelial dysfunction.[J].J Am Soc Nephrol， 2010， 15(8)：1983-1992.

[11]Izzard AS， Rizzoni D， Agabiti-Rosei E， et al.Small artery structure and hypertension： adaptive changes and target organ damage[J].J Hypertens，2011，23(2)：247-250.

[12]Nicolls MR， Haskins K，F(xiàn)lores S C.OXidant stress， immune dysregulation， and vascular function in type I diabetes[J].AntioXid RedoX Signal， 2012，9(7)：879-889.

(2016-08-26收稿 責(zé)任編輯：洪志強)

投稿須知：關(guān)于摘要與關(guān)鍵詞

摘要：論著類的文章，均須附中文和英文摘要。中、英文摘要的內(nèi)容要一致。采用第三人稱撰寫，不用“本文”等主語。論著類文稿的摘要形式使用結(jié)構(gòu)式。結(jié)構(gòu)式摘要主要分目的(Objective)、方法(Methods)、結(jié)果(Results)和結(jié)論(Conclusion)4部分。

關(guān)鍵詞：選詞要規(guī)范，應(yīng)盡量從美國國立醫(yī)學(xué)圖書館編輯的最新版Index Medicus的Medical Subject Heading(MeSH)詞表中選用規(guī)范用詞，中文譯名可參照中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)信息研究所編譯的《醫(yī)學(xué)主題詞注釋字順表》。中醫(yī)藥詞匯以中國中醫(yī)研究院圖書情報研究所編著的《中醫(yī)藥學(xué)主題詞表》為準(zhǔn)。未被詞表收錄的詞，如確有必要可作為關(guān)鍵詞標(biāo)注。關(guān)鍵詞數(shù)目一般3～5個，關(guān)鍵詞之間用“；”分隔。無摘要的文稿，只需標(biāo)注中文關(guān)鍵詞，關(guān)鍵詞置于正文之前；附中英文摘要的文稿須中英文關(guān)鍵詞，中文關(guān)鍵詞置于中文摘要下方；英文關(guān)鍵詞應(yīng)與中文詞相對應(yīng)，置于英文摘要下方。

Determination of Effective Ingredient and Fingerprint of Dahurian Angelica Root

Xi Mei1,Wang Xin2,Lu Yan3

(1AffiliatedBeijingChineseMedicineHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100010,China; 2Guang′anmenHospital,ChinaAcademyofChinesemedicalScience,Beijing100053,China; 3ExperimentalTeachingCenterofCollegeofPharmacyatPekingUniversity,Beijing100191,China)

Objective:To determinate the effective ingredient and fingerprint of Dahurian Angelica Root.Methods:A total of 7 batches of Dahurian Angelica Root purchased in May 2012 in our hospital were divided into 4 major groups based on its batches. The effective ingredients were determined by high performance liquid chromatography and established HPLC fingerprint according to the principle of characteristic peaks of Dahurian Angelica Root. The 7 batches were determined by fingerprint and four peaks were determined and compared to evaluate Dahurian Angelica Root′s quality.Results:Hang Dahurian Angelica Root (Chongqing Wanzhou) and Dian Dahurian Angelica Root (Yunnan) were fake the other batches were average or had good quality. Two batches of Yu Dahurian Angelica Root had better quality than the others.Conclusion:The result of the fingerprint detection can make accurate measurement of the effective components of medicinal materials, with high stability, good reproducibility, which is a reliable method on the quality of identification of Dahurian Angelica Root from different habitats. Its rapid and accurate evaluation of the quality of Chinese medicine is recommended.

Dahurian Angelica Root; Content determination; Fingerprint; Characteristic peaks

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.11.060