龍凱花，劉 峰，王春柳，楊東花，李彤暉，辛永潔，李 曄＊（.陜西中醫(yī)學(xué)院，咸陽 7206；2.西安交通大學(xué)藥學(xué)院天然藥物與工程中心，西安 7006；.陜西步長制藥有限公司，西安 70075；.陜西省中醫(yī)藥研究院，西安 7000）

提高廣棗藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

龍凱花1，劉 峰2，3，王春柳4，楊東花3，李彤暉4，辛永潔4，李 曄4＊（1.陜西中醫(yī)學(xué)院，咸陽 712046；2.西安交通大學(xué)藥學(xué)院天然藥物與工程中心，西安 710061；3.陜西步長制藥有限公司，西安 710075；4.陜西省中醫(yī)藥研究院，西安 710003）

目的 提高廣棗藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法（TLC）對廣棗進(jìn)行定性鑒別，高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測定廣棗中沒食子酸與原兒茶酸的含量。結(jié)果 TLC對沒食子酸與原兒茶酸分離度均良好；沒食子酸在3.53～70.60μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為103.8%，RSD為1.5%（n＝6）；原兒茶酸在6.24～124.8μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為101.4%，RSD為1.1%（n＝6）。結(jié)論 該定性方法專屬性強(qiáng)，定量方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，可作為廣棗藥材的質(zhì)量控制方法。

沒食子酸；原兒茶酸；廣棗；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；TLC；HPLC

廣棗系蒙古族習(xí)用藥材，為漆樹科植物南酸棗Choerospondias axillaris（Roxb）Burtt et Hill的干燥成熟果實(shí)，具有行氣活血、養(yǎng)心安神的功效，用于氣滯血瘀、胸痹作痛、心悸氣短、心神不安［1］，為常用蒙藥，是蒙醫(yī)治療心血管疾病的主藥［2］?！吨袊幍洹罚?010年版）廣棗藥材標(biāo)準(zhǔn)中，僅對沒食子酸進(jìn)行薄層鑒別與含量測定。中藥發(fā)揮治療作用基于其所含的多種化學(xué)成分，單憑某一成分定性和定量的傳統(tǒng)中藥質(zhì)量評價(jià)方法，其有效性和專屬性不足以全面反映其質(zhì)量。廣棗中除沒食子酸［3］外，水溶性酚酸成分原兒茶酸具有明顯的抗氧化、清除自由基、抑制血小板聚集作用和抗缺氧活性［4－6］。為此，本實(shí)驗(yàn)對沒食子酸與原兒茶酸同時(shí)進(jìn)行定性鑒別與含量測定，在定性鑒別中還加入了廣棗對照藥材的鑒別，為有效控制廣棗的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；BP211D型電子分析天平（德國賽多利斯天平有限公司）；超純水系統(tǒng)（Millipore，法國）。

1.2 試藥 沒食子酸對照品（供含量測定用，批號110831－200302），廣棗對照藥材（批號121334－200401），均購自中國藥品生物制品檢定所；原兒茶酸對照品（供含量測定用，批號110809－201205）購自中國食品藥品檢定研究院；薄層色譜硅膠G（青島海洋化工有限公司）；甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。廣棗藥材購自安徽藥材市場，經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院生藥教研室王西芳教授鑒定為漆樹科植物南酸棗Choerospondias axillaris（Roxb.）Burtt et Hill的干燥成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 鑒別 取廣棗藥材粉末2g，加甲醇10mL，超聲處理30min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取廣棗對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。再分別取沒食子酸與原兒茶酸對照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）實(shí)驗(yàn)，吸取供試品溶液和對照藥材溶液10μL及對照品溶液5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－丙酮－甲酸（5∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10g·L－1三氯化鐵溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.2 沒食子酸與原兒茶酸的含量測定

2.2.1 色譜條件 Kromasil Su C18柱（250mm× 4.6mm，5μm）；流動相：甲醇－4mL·L－1磷酸（6∶94）；檢測波長：270nm；柱溫：35℃；流速：1.0mL·min－1；進(jìn)樣量：10μL。見圖1。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品、原兒茶酸對照品適量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含沒食子酸0.353mg、原兒茶酸0.624mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉約1.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)70%甲醇25mL，稱定質(zhì)量，超聲處理50min，放冷，用體積分?jǐn)?shù)70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取混合對照品溶液儲備液0.1，0.5，1，1.4，1.7和2mL，置于10mL棕色量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以沒食子酸、原兒茶酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得沒食子酸回歸方程：Y＝144.56 X＋4.624 3（r＝0.999 9），線性范圍為3.53～70.60μg·mL－1，原兒茶酸回歸方程：Y＝153.96 X＋3.438 4（r＝0.999 9），線性范圍為6.24～124.8μg·mL－1。

圖1 HPLC圖A.混合對照品溶液；B.廣棗（廣西）I；C.廣棗（內(nèi)蒙）I；1.沒食子酸；2.原兒茶酸Fig.1 HPLC chromatogramsA.mixed control substances；B.Choerospondiatis Fructus（Guangxi）I；C.Choerospondiatis Fructus（Neimeng）I；1.gallic acid；2.protocatechuic acid

2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取混合對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果沒食子酸與原兒茶酸峰面積的RSD分別為0.105%和0.241%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批樣品6份，按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)測定6次，結(jié)果沒食子酸平均質(zhì)量濃度為0.029 4mg·mL－1，RSD為1.418%，原兒茶酸平均質(zhì)量濃度為0.106 6mg·mL－1，RSD為1.882%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一產(chǎn)地的廣棗藥材，按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，放置0，4，8，12，16，20和24h分別進(jìn)樣10μL測定，沒食子酸和原兒茶酸的峰面積RSD分別為0.344%和0.785%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取已知含量的廣西廣棗樣品適量，加入定量的沒食子酸、原兒茶酸對照品溶液，按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算平均加樣回收率。沒食子酸和原兒茶酸的加樣回收率分別為103.8%和101.4%，見表1和表2。

表1 沒食子酸加樣回收率測定結(jié)果Tab.1 Recovery experiment results of gallic acid

表2 原兒茶酸加樣回收率結(jié)果Tab.2 Recovery experiment results of protocatechuic acid

2.2.9 樣品測定 按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶

液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測定樣品中沒食子酸、原

兒茶酸的含量，結(jié)果見表3。

表3 廣棗中沒食子酸與原兒茶酸的含量測定結(jié)果Tab.3 Determination results of gallic acid and protocatechuic acid in Choerospondiatis Fructus

3 討論

廣棗藥材的薄層鑒別中，與藥典方法相比簡化了制樣方法，縮短了提取時(shí)間，減少了提取程序，并增加了廣棗的對照藥材，為定性分析提供了有效、簡便、快捷的控制質(zhì)量依據(jù)。

分別用乙醚、乙酸乙酯、乙醇、乙醇－水（體積分?jǐn)?shù)50%和95%）、甲醇、甲醇－水（體積分?jǐn)?shù)30%，50%，70%和90%）作為提取溶劑，采用超聲提取，并對超聲時(shí)間（20，30，40，50和60min）進(jìn)行考察。結(jié)果表明，用體積分?jǐn)?shù)70%的甲醇水溶液超聲50min可最大限度地對沒食子酸與原兒茶酸進(jìn)行提取。

TLC定性鑒別時(shí)，同一條件下，廣棗（廣西）中沒食子酸與原兒茶酸的含量均高于廣棗（內(nèi)蒙），通過HPLC含量測定，廣棗（廣西）中原兒茶酸的含量約為廣棗（內(nèi)蒙）的10倍。不同產(chǎn)地的廣棗中沒食子酸和原兒茶酸的含量差異較大，質(zhì)量參差不齊。其中廣棗（廣西）中沒食子酸與原兒茶酸的含量相差較大，比值達(dá)3.6，此外，廣棗的酚酸類成分中沒食子酸和原兒茶酸含量的相關(guān)性表現(xiàn)在藥效學(xué)上是否也有所不同還需進(jìn)一步研究。

［1］國家藥典委員會.中國藥典2010年版［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：41.

［2］湯喜蘭，劉建勛，李磊，等.廣棗模擬總有機(jī)酸對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（4）：168－172.

［3］劉蓮英，楊瑞瑞，李維鳳.廣棗中沒食子酸的含量測定［J］.西北藥學(xué)雜志，2002，17（5）：204－205.

［4］Cao Y G，Zhang L，Ma C，et al.Metabolism of protocatechuic acid influences fatty acid oxidation in rat heart：new anti－angina mechanism implication［J］.Biochem Pharmacol，2009，77：1096－1104.

［5］王勤，孫蕓，李維鳳.HPLC法測定鎖陽中沒食子酸和原兒茶酸的含量［J］.西北藥學(xué)雜志，2010，25（3）：190－192.

［6］郭英，貝玉祥，王雪梅，等.廣棗提取物體外清除活性氧自由基及抗氧化作用研究［J］.微量元素與健康研究，2008，25（5）：22－24.

Improvement of quality standard for ChoerospondiatisFructus

LONG Kaihua1，LIU Feng2，3，WANG Chunliu4，YANG Donghua3，LI Tonghui4，XIN Yongjie4，LI Ye4＊（1.Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China；2.Natural Medicines and Engineering Center，School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China；3.Shaanxi Buchang Pharmaceutical Limited Company，Xi′an 710075，China；4.Shaanxi Academy of Traditional Chinese Medicine，Xi′an 710003，China）

Objective To improve the quality standard of Choerospondiatis Fructus.Methods Thin layer chromatography（TLC）was used to identify Choerospondiatis Fructus，and high performance liquid chromatography（HPLC）was used to determine the gallic acid and protocatechuic acid content in the Choerospondiatis Fructus.Results TLC showed excellent performance for both gallic acid and protocatechuic acid；gallic acid in the range of 3.53－70.60μg·mL－1showed good linear relationship.The average recovery was 103.8%，and RSD was 1.5%（n＝6）；protocatechuic acid in the range of 6.24－124.8μg·mL－1showed good linear relationship.The average recovery was 101.4%，and RSD was 1.1%（n＝6）.Conclusion The qualitative method is specific.The quantitative method is simple，fast and accurate，and can be used for the quality control of Choerospondiatis Fructus.

gallic acid；protocatechuic acid；Choerospondiatis Fructus；quality standard；TLC；HPLC

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.01.004

R282

A

1004－2407（2015）01－0014－03

2014－07－13）

國家“十二五重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（編號：2011ZX09401－308－6）

龍凱花，女，在讀碩士研究生

＊通信作者：李曄，女，研究員