張秋菊,裴付軍,郭 毅
(魯南制藥集團(tuán)股份有限公司,山東 臨沂 276006)
鹽酸索他洛爾其化學(xué)名為(R,S)-4'-(1-羥基-2-異丙氨乙基)甲磺酰苯胺鹽酸鹽,抗心律失常藥,是一種磺胺類藥,也是一種強(qiáng)效非心臟選擇性受體阻滯劑。
由于該藥在合成過程中需使用甲醇、乙醇、乙醚、吡啶等有機(jī)溶劑,產(chǎn)品中的有機(jī)殘留量對(duì)人體有害,故應(yīng)對(duì)原料藥中有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行控制。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)ICH對(duì)有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定的指導(dǎo)原則進(jìn)行檢測(cè),目前,測(cè)定殘留溶劑的方法有頂空進(jìn)樣法和直接進(jìn)樣法,本文參照有關(guān)文獻(xiàn)[1~9]建立方法,以分流直接進(jìn)樣方式測(cè)定4種溶劑(甲醇、乙醇、乙醚、吡啶)的殘留量,方法簡(jiǎn)便靈敏,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
1.1 儀器 Agilent 6890氣相色譜儀;DB-624(30 m×0.53mm,3μm)毛細(xì)管色譜柱。
1.2 試藥 甲醇、乙醇、乙醚、吡啶均為色譜純;鹽酸索他洛爾原料藥為魯南貝特制藥有限公司生產(chǎn)。
FID檢測(cè)器,檢測(cè)器溫度200℃,進(jìn)樣口溫度200℃,載氣為氮?dú)?,采用恒壓模式,分流?0∶1,流速為5mL·min-1,氫氣流速 45mL·min-1,空氣流速 450mL·min-1,DB -624(30 m ×0.53mm,3μm)毛細(xì)管色譜柱,柱溫采用程序升溫,初始溫度40℃保持7min,以10℃·min-1的速度升溫至120℃,保持15min。Agilent氣相色譜工作站。理論塔板數(shù)不低于10000。
3.1 溶液制備 對(duì)照溶液:分別取甲醇、乙醇、乙醚、吡啶適量,精密稱定,用二甲基亞砜稀釋成1mL含甲醇300 μg、乙醇 500 μg、乙醚 500 μg、吡啶 20 μg 的溶液。
供試品溶液:取鹽酸索他洛爾1.0g,精密稱定,置10mL容量瓶中,用二甲基亞砜稀釋至刻度,振搖使溶解,即得。
3.2 測(cè)定方法 分別取對(duì)照溶液和供試品溶液2μL,按上述色譜條件測(cè)定,結(jié)果見圖1。
圖1 對(duì)照溶液色譜圖A;供試品溶液色譜圖B
3.3 線性范圍 分別精密稱取甲醇、乙醇、乙醚、吡啶適量,用二甲基亞砜稀釋成含甲醇 18.75,93.75,187.55,375.15,468.75 μg·mL-1;含乙醇 19.65,78.60,157.20,314.40,550.20 μg·mL-1;含乙醚 30.65,61.30,153.25,306.50,536.38 μg·mL-1;含吡啶 4.25,21.25,42.50,59.50,63.75 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。分別取上述每種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液2μL進(jìn)樣,以每個(gè)組分峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),計(jì)算甲醇、乙醇、乙醚、吡啶的回歸方程分別為:
結(jié)果表明甲醇在18.75 ~468.75 μg·mL-1;乙醇在 19.65 ~550.20 μg·mL-1;乙醚在30.65 ~536.68 μg·mL-1;吡啶在 4.25 ~63.75 μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系。
3.4 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照溶液,連續(xù)測(cè)定6次,結(jié)果甲醇峰面積的RSD為0.75%,乙醇峰面積的RSD為0.82%,乙醚峰面積的RSD為2.6%,吡啶峰面積的RSD為1.9%,符合中國(guó)藥典2010年版規(guī)定的有機(jī)溶劑殘留外標(biāo)法測(cè)定精密度要求(RSD不大于10%)。
3.5 最低檢測(cè)限的測(cè)定 用3.3中的標(biāo)準(zhǔn)溶液,采用逐步稀釋法,按上述色譜條件進(jìn)樣,測(cè)得甲醇、乙醇、乙醚、吡啶的檢測(cè)限(S/N=3)分別為 3.66,4.25,1.39,1.25 μg·mL-1。
3.6 回收率 取已知有機(jī)殘留量的樣品約為1.0g,精密稱定,置10mL量瓶中,加對(duì)照溶液溶解并定容,搖勻,平行制備6份。精密量取2μL,按上述色譜條件進(jìn)樣,以外標(biāo)法計(jì)算,甲醇、乙醇、乙醚、吡啶的平均回收率為99.8%,99.6%,100.7%,101.6%。RSD 分別為 1.8%,1.4%,3.5%,2.2%。
3.7 樣品測(cè)定 取鹽酸索他洛爾樣品3批,各約1.0g,精密稱定,置10mL量瓶中,加二甲基亞砜溶解并定容,搖勻,平行制備3份。精密量取2μL,按上述色譜條件進(jìn)樣,以外標(biāo)法計(jì)算,取平均值作為測(cè)定結(jié)果。3批樣品均符合規(guī)定,測(cè)得結(jié)果見表1。
表1 樣品中有機(jī)殘留量測(cè)定結(jié)果(%)
4.1 溶劑的選擇 本實(shí)驗(yàn)曾用二甲基甲酰胺(DMF)、正己烷做過多次實(shí)驗(yàn),其對(duì)測(cè)定的溶劑有干擾達(dá)不到預(yù)期的效果,因此最終選擇二甲基亞砜作為溶劑,而且測(cè)定的溶劑之間能夠達(dá)到有效的分離。
4.2 色譜柱的選擇 通過選用不同極性的毛細(xì)管色譜柱,如DB-1、DB-WAX、SE-30等,經(jīng)多次實(shí)驗(yàn) DB-624能使4種有機(jī)溶劑與空白溶劑二甲基亞砜達(dá)到較好的基線分離,最終選擇了分離效果較好的DB-624毛細(xì)管色譜柱。
4.3 方法可行性 根據(jù)“ICH”的規(guī)定,本實(shí)驗(yàn)所檢驗(yàn)的4種有機(jī)溶劑分別屬于二類和三類溶劑,采用該方法測(cè)得本公司生產(chǎn)的3批原料藥的殘留溶劑量均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于“ICH”的規(guī)定。
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