張志華，楊曉紅，段希玲 (山西職工醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室，太原 030012)

剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種呈世界性分布的寄生在宿主有核細(xì)胞內(nèi)的機(jī)會(huì)致病性原蟲(Opportunistic protozoan)［1］。弓形蟲病是一種人獸共患寄生蟲病，可致人的弓形蟲性腦積水、小腦畸形、智力缺陷、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎等。孕婦在妊娠早、中期遭受弓形蟲感染會(huì)引起流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎，或者分娩腦積水、無腦兒或有其他神經(jīng)系統(tǒng)缺陷的嚴(yán)重畸形的嬰兒［2］。為進(jìn)一步了解流產(chǎn)與弓形蟲感染的關(guān)系，本人對(duì)186例流產(chǎn)孕婦及其配偶進(jìn)行了血清弓形蟲抗體的檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2008－10～2009－12期間山西省榮軍醫(yī)院婦產(chǎn)科自然流產(chǎn)的孕婦186名，夫婦同時(shí)進(jìn)行血清檢測(cè)。

1.2 標(biāo)本采集 受檢者均在空腹時(shí)抽取前臂靜脈血2 ml，常規(guī)分離血清，冰箱保存。

1.3 試劑 TOX-IgG、TOX-IgM試劑盒由鄭州華美生物工程公司提供。

1.4 檢測(cè)

1.4.1 TOX-IgG檢測(cè) 采用ELISA法，用包被液以1∶2 000稀釋弓形蟲抗原包被反應(yīng)板置濕盒內(nèi)4℃過夜，用PBS洗滌5次，每次5 min，每孔加入1%牛血清白蛋白0.2 ml封閉，置37℃溫育1 h，同前法洗滌后加入稀釋為1∶100的血清，每孔500 ml，置37℃溫育1 h，同前法洗滌后加入稀釋為1∶1 000稀釋的羊抗人IgG辣根過氧化物酶標(biāo)記物，每孔500 ml，置37℃溫育1 h，洗滌后加入新鮮配制的底物液，每孔 0.1 ml，置室溫 0.5 h 后，加 2 mol/L H2SO4終止反應(yīng)，于30 min內(nèi)測(cè)定A值，所用波長(zhǎng)450 nm。①目測(cè):根據(jù)臨界孔顯色來進(jìn)行判斷樣本孔顯色比臨界孔深判為陽性，否則判為陰性;②讀數(shù)判斷，樣本孔A值＞臨界對(duì)照孔A值判陽性;樣本孔A值＜臨界對(duì)照孔A值判陽性。

1.4.2 TOX-IgM的測(cè)定 將待檢血清用樣本稀釋液按1∶100稀釋，每酶標(biāo)孔滴加稀釋后的血清100 μl，同時(shí)設(shè)陽性、陰性和空白對(duì)照，37℃溫育30 min，洗滌液重復(fù)洗板5次;加酶結(jié)合物，37℃溫育30 min，洗滌液重復(fù)洗板5次;加顯色劑37℃溫育10 min，取出，加終止液，測(cè)定A值，所用波長(zhǎng)450 nm。待測(cè)樣品A值與陰性對(duì)照A值平均值之比≥21判為陽性，＜21判為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清弓形蟲抗體IgG、IgM調(diào)查結(jié)果 在186對(duì)被檢夫婦中，IgG總陽性率11.56%，其中男性陽性率10.75%，女性陽性率12.37%，不同性別間陽性率比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.28，P＞0.05)。IgM 總陽性率10.22%，男性陽性率8.60%，女性陽性率11.83%，不同性別間陽性率比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.13，P＞0.05)。IgG+IgM總陽性率5.38%，男性陽性率4.84%，女性陽性率5.91%，不同性別間陽性率比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.06，P＞0.05)，見表 1。

表1 血清弓形蟲抗體IgG、IgM檢測(cè)Tab 1 Positive expression of IgG，IgM of Toxoplasma gondii

2.2 其他檢測(cè)項(xiàng)目陽性率 在186對(duì)被檢夫婦中，夫婦均感染弓形蟲者28對(duì)，陽性率為15.05%。被檢孕婦中，習(xí)慣性流產(chǎn)患者(2次以上自然流產(chǎn))38例，IgG(+)或IgM(+)者22 例，陽性率為58.06%;養(yǎng)寵物者41例，其中IgG(+)或IgM(+)25例，陽性率為60.11%，未養(yǎng)寵物者145例，其中IgG(+)或IgM(+)56例，陽性率為38.29%，兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.34，P＜0.05)。

3 討論

弓形蟲呈世界性分布，據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界有20億人感染弓形蟲，感染率為0.6%－94%［3］。據(jù)調(diào)查，目前在我國(guó)各地均證實(shí)有本病存在，我國(guó)正常人群感染率多在10%以下，平均感染率為5.17%，感染人數(shù)可能約有6 000萬［4］。正常人體感染弓形蟲多為隱性感染，當(dāng)機(jī)體免疫力下降時(shí)，蟲體大量繁殖，侵入除紅細(xì)胞外的各組織細(xì)胞內(nèi)寄生，造成各種組織的廣泛炎癥，從而出現(xiàn)臨床癥狀。

人類感染弓形蟲后能誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗體。IgM抗體是體液免疫反應(yīng)中最早出現(xiàn)的抗體，IgM陽性多提示有近期感染，IgG抗體多于感染后2－5個(gè)月逐漸達(dá)到高峰，以后逐漸下降，可維持較長(zhǎng)時(shí)間，IgG陽性說明有既往感染，或隱性感染［5］。上述指標(biāo)為弓形蟲感染的臨床分析及抗弓形蟲治療提供免疫學(xué)依據(jù)。本研究采用ELISA法對(duì)186對(duì)流產(chǎn)夫婦檢測(cè)血清弓形蟲IgG、IgM抗體，結(jié)果顯示IgG陽性率為11.56%，IgM陽性率為10.22%，IgG+IgM陽性率為5.38%，均高于我國(guó)正常人群的感染率，但低于王新彩等［6］對(duì)不孕癥夫婦調(diào)查所得的感染率。我們的研究表明弓形蟲感染不同性別間無顯著差異，這與景彩霞等［7］、李兆愛等［8］的研究一致，但也有研究表明女性感染要高于男性結(jié)果［9］，其中原因需要進(jìn)一步研究。本研究還發(fā)現(xiàn)，在這186對(duì)流產(chǎn)夫婦中習(xí)慣性流產(chǎn)患者(2次以上自然流產(chǎn))弓形蟲感染陽性率為58.06%;夫婦均感染弓形蟲者28對(duì)，陽性率為15.05%。

弓形蟲對(duì)人體的危害受到越來越多的關(guān)注，尤其是弓形蟲對(duì)胎兒的影響。習(xí)慣性流產(chǎn)與弓形蟲感染的關(guān)系國(guó)內(nèi)有很多報(bào)道，所有報(bào)道都顯示習(xí)慣性流產(chǎn)患者的弓形蟲感染率明顯高于正常人群，也高于正常孕婦［10］，與本研究的調(diào)查結(jié)果一致。人食用未煮熟的含有感染期弓形蟲的動(dòng)物肉、乳制品、蛋類，或者飲用被污染的水可被感染。另一條感染途徑是與貓、狗等寵物的密切接觸，因?yàn)檫@些寵物是弓形蟲的終宿主。本研究表明養(yǎng)寵物患者弓形蟲感染陽性率為60.11%，明顯高于未養(yǎng)寵物患者。因此，對(duì)育齡人群一定要做好衛(wèi)生宣傳教育，尤其是準(zhǔn)備生育和已經(jīng)懷孕的婦女，應(yīng)避免感染弓形蟲，以免造成不良后果。

［1］ Brown AS，Schaefer CA，Quesenberry CP，et al.Maternal exposure to Toxoplasmosis and risk of schizophrenia in adult offspring［J］.Am J Phasychiatry，2005，162(4):767－773.

［2］ 于恩庶.中國(guó)弓形蟲?。跰］.香港:亞洲醫(yī)藥出版社，2000:1－13.

［3］ Stellwagen D，Beattie EC，Seo JY，et al.Differential regulation of AMPA receptor and GABA receptor trafficking by tumor necrosis factor-alpha［J］.J Neurosci，2005，25(12):3219－3228.

［4］ 沈一平.新世紀(jì)初對(duì)我國(guó)寄生蟲病的思考［J］.中國(guó)人獸共患病雜志，2003，19(1):4－6.

［5］ 劉琦，姚莉萍，屠鳳娟，等.孕婦、不孕癥及婦科疾病患者弓形蟲感染的檢測(cè)分析［J］.疾病監(jiān)測(cè)，2010，25(1):52－54.

［6］ 王新彩，劉潤(rùn)芳，趙榮坡.不孕癥夫婦弓形蟲感染的血清學(xué)檢查［J］.河南科技大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2006，24(2):97－100.

［7］ 景彩霞，薛亞娟，艾彩蓮，等.某醫(yī)學(xué)院大學(xué)新生血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果分析［J］.中國(guó)學(xué)校衛(wèi)生，2009，30(6):549－550.

［8］ 李兆愛，張波.2180名中學(xué)生弓形蟲感染調(diào)查［J］.中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6(8):1499－1501.

［9］ 劉潤(rùn)芳，王新彩.不孕不育人群弓形蟲IgM抗體檢測(cè)及結(jié)果分析［J］.河南科技大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2007，25(4):279－281.

［10］ 羅曉明，呂冠明.1491例孕婦血清中弓形蟲抗體IgG、IgM的檢測(cè)結(jié)果分析［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2009，9(15):157－158.