摘 "要：該研究以測(cè)定內(nèi)蒙古不同地區(qū)、采收期及部位多葉棘豆中槲皮素與山奈素的含量為目標(biāo)。采用高效液相色譜法（HPLC）作為研究方法，并對(duì)其科學(xué)性進(jìn)行評(píng)估。研究結(jié)果顯示，內(nèi)蒙古不同地區(qū)的多葉棘豆藥材中槲皮素含量介于0.19～0.65 mg/g之間，山奈素含量則在0.04～0.14 mg/g之間。不同采收期中，花期的山奈素含量高于果期，而果期的槲皮素含量高于花期。不同部位中葉子的2種成分含量最高。該研究所建立的槲皮素和山奈素含量測(cè)定方法具有操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性和穩(wěn)定性優(yōu)良等特點(diǎn)，適用于多葉棘豆藥材中槲皮素和山奈素的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：多葉棘豆；HPLC；不同地區(qū)；采收期；不同部位

中圖分類號(hào)：R284.1 " " "文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A " " " " "文章編號(hào)：2096-9902（2024）09-0038-05

Abstract： The aim of this study was to determine the contents of quercetin and kaempferol in Oxytropis myriophylla in different regions， harvest times and parts of Inner Mongolia. High performance liquid chromatography（HPLC） was used as the research method， and its scientific nature was evaluated. The results showed that the contents of quercetin and kaempferol in Tropisms vulgaris from different regions of Inner Mongolia ranged from 0.19 mg/g to 0.65 mg/g and from 0.04 mg/g to 0.14 mg/g. In different harvest periods， the content of kaempferol in flowering stage was higher than that in fruit stage， while the content of quercetin in fruit stage was higher than that in flowering stage. The contents of two components in different parts of leaves were the highest. The method for the determination of quercetin and kaempferol established in this study has the advantages of simple operation， high accuracy， good repeatability and stability， and is suitable for the determination of quercetin and kaempferol in Oxytropis myriophylla.

Keywords： Oxytropis myriophylla; HPLC; different areas; harvest time; different part

多葉棘豆為豆科植物狐尾藻棘豆（Oxytropis myriophylla（Pall.）DC.）的干燥地上部分，廣泛應(yīng)用于蒙醫(yī)臨床，是特色的蒙藥藥材之一。其蒙文音譯名為娜布其爾哈格-敖日道查、查干-達(dá)克沙、達(dá)林-敖日道查。其味道帶有苦和甘；性涼、鈍、輕及澀；被認(rèn)為具有殺菌、清熱、疏黃、愈傷、生肌、止血、消腫和軟便的功效[1]。主要產(chǎn)地為呼倫貝爾、興安盟、通遼、赤峰、錫林郭勒、烏蘭察布、巴彥淖爾等地，產(chǎn)量較多[2]。夏、秋季割取地上部分，除去雜質(zhì)陰干[3]。多葉棘豆作為蒙藥最早收載于蒙古族醫(yī)學(xué)專著《認(rèn)藥白晶鑒》中，具有殺“粘”、消腫、解毒的功效，在七雄丸、呼和嘎日迪-9、清瘟止痛十一味丸（額日敦嘎日迪）、清瘟十二味丸（洪格日-12）等蒙藥復(fù)方制劑中廣泛應(yīng)用[4]。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，多葉棘豆具有抗菌、抗氧化、清除自由基等多種功效[5-7]。幾十年來(lái)，中外學(xué)者對(duì)蒙藥多葉棘豆的化學(xué)組成進(jìn)行了深入的研究，關(guān)于多葉棘豆化學(xué)成分的研究，大部分文獻(xiàn)集中在黃酮的含量測(cè)定，槲皮素和山奈素的相關(guān)報(bào)道較少。吳香杰等[8]和馬瑩瑩等[9]分別采用高效液相色譜法和分光光度法測(cè)定了槲皮素含量。吳雙英等[10]采用高效液相色譜法測(cè)定了多葉棘豆不同采收期的槲皮素含量變化。因此， 本研究以多葉棘豆槲皮素和山奈素含量為檢測(cè)指標(biāo)， 對(duì)不同地區(qū)、采收期及不同部位的多葉棘豆中的槲皮素和山奈素進(jìn)行含量測(cè)定，為多葉棘豆藥材的后續(xù)研究提供參考依據(jù)。

1 "儀器與材料

1.1 "儀器

高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）、超聲波清洗器（濟(jì)寧恒通超聲設(shè)備有限公司）、數(shù)顯恒溫水浴鍋（河南沃林儀器設(shè)備有限公司）、電子天平（上海香川電子衡器有限公司）和粉碎機(jī)（廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司）。

1.2 "材料

槲皮素對(duì)照品（批號(hào) PR1187）、山奈素對(duì)照品（批號(hào)K107695），以上2種對(duì)照品均購(gòu)買于上海源葉生物科技有限公司；色譜甲醇；水為超純水。多葉棘豆藥材采集來(lái)源見表1。由內(nèi)蒙古民族大學(xué)紅艷副教授鑒定為多葉棘豆的干燥地上部分。

2 "方法

2.1 "色譜條件

實(shí)驗(yàn)所用的高效液相色譜條件見表2。在該條件下多葉棘豆含量測(cè)定色譜圖結(jié)果如圖1所示。

2.2 "對(duì)照品溶液的制備

精密稱取槲皮素和山奈素對(duì)照品，分別放入25 mL容量瓶中，加入80%的甲醇，定容至刻度線，濃度配制成0.45 mg/mL和0.24 mg/mL的溶液。

2.3 "供試品溶液的制備

精密稱取藥材粉末2.0 g，放入50 mL具塞錐形瓶中，加入80%的甲醇，稱重，加熱回流1 h后室溫冷卻，再次稱重，減失的重量用80%的甲醇補(bǔ)足，混勻，濾過(guò)。取25 mL續(xù)濾液加入5 mL鹽酸，置水浴中（90 ℃）加熱水解1 h，立即取出冷卻，放入50 mL容量瓶中，加80%的甲醇稀釋至刻度線，混勻，濾過(guò)，即得。

2.4 "線性關(guān)系考察

分別取本文2.2節(jié)中配制的槲皮素和山奈素溶液各0.1、0.5、1、2、4、5 ？滋L，按照表2色譜條件進(jìn)樣并測(cè)定峰面積。計(jì)算回歸方程及線性范圍。表3中結(jié)果表明，線性關(guān)系良好。

2.5 "精密度試驗(yàn)

在表2色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣槲皮素和山奈素溶液6次，計(jì)算槲皮素和山奈素峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果分別為0.4%和0.5%。說(shuō)明此儀器精密度良好。

2.6 "穩(wěn)定性試驗(yàn)

稱取表1中1號(hào)藥材粉末，按本文2.3節(jié)制備供試品溶液，在表2色譜條件下，分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積，結(jié)果槲皮素和山奈素峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.1%和0.8%。說(shuō)明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 "重復(fù)性試驗(yàn)

稱取表1中1號(hào)藥材粉末，共6份，按本文2.3節(jié)制備供試品溶液，用液相進(jìn)樣針吸取10 ？滋L進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果槲皮素和山奈素含量分別為0.23%和0.06%；槲皮素和山奈素峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.3%和1.6%。說(shuō)明此實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.8 "回收率試驗(yàn)

稱取表1中1號(hào)藥材粉末1.0 g，共9份，分3組按對(duì)照品加入量-樣品中含量0.5∶1、1∶1、1.5∶1的要求分別加入2個(gè)對(duì)照品溶液，按照本文2.3節(jié)中方法制備供試品溶液。吸取10 ？滋L進(jìn)樣，測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果槲皮素平均回收率（n=9）為98.2%、RSD為1.9%，山奈素平均回收率（n=9）為97.5%、RSD為1.7%。說(shuō)明此方法準(zhǔn)確度良好。2.9 "樣品含量測(cè)定

量取按照本文2.3節(jié)方法制備的供試品溶液，再按照表2色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算2種成分的含量。

2.9.1 "不同地區(qū)多葉棘豆中槲皮素和山奈素的含量測(cè)定

多葉棘豆中槲皮素最高的地區(qū)為呼倫貝爾新巴爾虎左旗0.65 mg/g，其次為興安盟阿爾山市0.62 mg/g、錫林郭勒盟正藍(lán)旗0.58 mg/g和呼倫貝爾市海拉爾區(qū)0.56 mg/g；多葉棘豆山奈素含量最高的地區(qū)為呼倫貝爾市滿洲里市0.14 mg/g，其次為赤峰市巴林右旗0.13 mg/g、呼倫貝爾市新巴爾虎右旗0.13 mg/g和興安盟阿爾山市0.13 mg/g，見表4，變化曲線如圖2所示。

2.9.2 "不同采收期多葉棘豆中槲皮素和山奈素的含量測(cè)定

以產(chǎn)地通遼市扎魯特旗罕山的多葉棘豆為樣本，測(cè)定了開花期和果期的槲皮素和山奈素含量，結(jié)果顯示在果期槲皮素含量高于花期為0.61 mg/g，而花期山奈素含量高于果期為0.11 mg/g，見表5。

2.9.3 "不同部位多葉棘豆中槲皮素和山奈素的含量測(cè)定

本文2.9.2節(jié)結(jié)果顯示果期槲皮素和山奈素含量高于花期，于是選擇測(cè)定果期不同部位多葉棘中的槲皮素和山奈素含量。結(jié)果顯示，葉子的槲皮素和山奈素含量均最高，分別為0.87、0.14 mg/g，見表6。

3 "討論

3.1 "不同地區(qū)多葉棘豆結(jié)果分析

經(jīng)度和緯度的差異，導(dǎo)致光照強(qiáng)度、降水量、晝夜溫差等自然因素的不同，對(duì)藥材的質(zhì)量有顯著的影響。陳仕高等[11]對(duì)600 m至700 m之間但小于700 m、700 m至800 m之間但小于800 m、800 m至900 m之間但小于900 m及900 m至1 000 m之間但小于1 000 m 4種海拔高度的山銀花藥材進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)由于海拔的不同對(duì)山銀花綠原酸含量影響顯著，以海撥900～1 100 m地區(qū)影響最大、含量最高。李強(qiáng)等[12]研究發(fā)現(xiàn)光照影響藥用植物生長(zhǎng)發(fā)育、生理生化特性以及次生代謝產(chǎn)物積累的規(guī)律，栽培立地環(huán)境的選擇和生態(tài)環(huán)境因子的調(diào)控，成為藥用植物栽培成功與否的前提條件，同時(shí)也成為影響栽培藥材品質(zhì)高低的關(guān)鍵因素。

本研究選取內(nèi)蒙古呼和浩特、赤峰、呼倫貝爾、興安盟、錫林郭勒和通遼等地區(qū)多葉棘豆進(jìn)行槲皮素和山奈素質(zhì)量測(cè)定。本研究結(jié)果顯示多葉棘豆槲皮素含量為0.19～0.65 mg/g；山奈素含量為0.04～0.14 mg/g，從現(xiàn)有數(shù)據(jù)來(lái)看，呼倫貝爾市新巴爾虎左旗的槲皮素含量最高，呼和浩特市新城區(qū)的槲皮素含量最低；呼倫貝爾市滿洲里市的山奈素含量最高，呼和浩特市武川縣的山奈素含量最低。從圖2可以看出，測(cè)定的不同地區(qū)多葉棘豆中，槲皮素含量幅度明顯，山奈素含量幅度不明顯。

3.2 "不同采收期多葉棘豆結(jié)果分析

藥用植物有效成分含量隨著生長(zhǎng)期內(nèi)自然因素的改變呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化，不同采收期其藥材有效成分含量差異較大，繼而影響其藥用價(jià)值和商品價(jià)值[13]。張永清等[14]研究不同采收期荊芥的形態(tài)、產(chǎn)量和揮發(fā)油含量變化，認(rèn)為初花期為荊芥的最佳采收期。本次研究發(fā)現(xiàn)花期和果期多葉棘豆中，果期槲皮素含量高于花期，而花期山奈素含量高于果期，但差異并不大。

3.3 "不同部位多葉棘豆結(jié)果分析

植物的各器官在其生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起到的作用不同，其生理代謝量不同，致使各器官化學(xué)成分的分布存在差異[15]。楊曉利等[16]對(duì)霍山石斛不同部位的總黃酮含量進(jìn)行比較，結(jié)果得出黃酮類化合物主要在葉中積累。本研究發(fā)現(xiàn)多葉棘豆不同部位的含量測(cè)定結(jié)果中，葉子的2種成分含量最高。

4 "結(jié)束語(yǔ)

隨著對(duì)蒙藥材多葉棘豆的深入研究，其藥用價(jià)值逐步得到了廣泛的認(rèn)可，從而促進(jìn)了市場(chǎng)需求的持續(xù)增長(zhǎng)。多葉棘豆的不同應(yīng)用場(chǎng)景對(duì)其質(zhì)量有著不同的要求。因此，對(duì)多葉棘豆中槲皮素和山奈素的含量測(cè)定顯得尤為重要。為此，本研究采用了高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定多葉棘豆中的槲皮素和山奈素含量。研究結(jié)果表明，此方法操作簡(jiǎn)單且方便、準(zhǔn)確度高，而且具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性，非常適合用于測(cè)定多葉棘豆中槲皮素和山奈素的含量，這為多葉棘豆的質(zhì)量控制提供了一種有效的測(cè)定方法。故本研究建立的HPLC法測(cè)定多葉棘豆中槲皮素和山奈素的含量，對(duì)多葉棘豆的質(zhì)量控制具有參考意義，為多葉棘豆的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

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