扎拉嘎,黎 明,滿 達(dá),李云鵬,唐和斯,雙 金*
(1.內(nèi)蒙古圣牧高科牧業(yè)有限公司,呼和浩特 010010;2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),呼和浩特 010018)
動(dòng)物生產(chǎn)上普遍飼喂脂肪以增加飼糧能量濃度,進(jìn)而提高生產(chǎn)性能。最近研究的重點(diǎn)開始轉(zhuǎn)向飼喂更多的特定必需脂肪酸,以改變動(dòng)物生產(chǎn)性能及其產(chǎn)品的脂肪酸組成,其中值得關(guān)注的是飼喂必需脂肪酸對(duì)動(dòng)物繁殖的可能影響。飼喂必需脂肪酸不僅能夠改善能量平衡,而且還改變了機(jī)體脂肪酸成分——生殖激素,尤其是為孕酮(progesterone,P)及雌激素(estradiol,E2)等類固醇類激素提供了基本的分子成分[1]。研究表明,上述反應(yīng)包括但不限于:開始排卵、恢復(fù)周期、改善發(fā)情的可見癥狀、增加卵巢的血流量以促進(jìn)卵泡的生長(zhǎng)。W.F.Marei等[2]研究表明,體外成熟培養(yǎng)液中添加適量的α-亞麻酸(ω-3多不飽和脂肪酸的母體)可促進(jìn)牛卵母細(xì)胞核成熟、提高卵母細(xì)胞達(dá)到第二次減數(shù)分裂中期階段的比例及受精后的發(fā)育能力及囊胚質(zhì)量,而且α-亞麻酸處理卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(cumulus-oocyte complexes,COCs)后,可促進(jìn)前列腺素E2(PGE2)的合成。在發(fā)情期內(nèi)PGE2能增加促性腺激素釋放激素(GnRH)的釋放,促進(jìn)黃體生成激素(LH)和卵泡生成激素(FSH)的分泌;還能調(diào)節(jié)靶細(xì)胞對(duì)激素的敏感性而影響激素效應(yīng)[1];PGE2還可促進(jìn)排卵,同時(shí)增強(qiáng)絲裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)的磷酸化水平,揭示α-亞麻酸可能通過(guò)影響PGE2的合成,進(jìn)而激活MAPK信號(hào)通路,促進(jìn)卵母細(xì)胞生長(zhǎng)[3],增加卵泡P和E2的分泌[1]。奶牛飼喂高水平ω-3多不飽和脂肪酸(ω-3PUFA)的飼糧,可以增加卵泡液內(nèi)ω-3PUFA組成,提高ω-3PUFA/ω-6PUFA的比例,進(jìn)而促進(jìn)卵母細(xì)胞的生長(zhǎng)[4]。
目前還未見飼糧中添加α-亞麻酸對(duì)母羊發(fā)情周期內(nèi)生殖激素含量影響方面的報(bào)道。為此,本試驗(yàn)以母羊?yàn)樵囼?yàn)對(duì)象,擬通過(guò)在其飼糧中添加α-亞麻酸,了解其對(duì)母羊生殖激素分泌的影響,為提高母羊生產(chǎn)效益提供依據(jù)。
α-亞麻酸,內(nèi)蒙古武川縣所產(chǎn)亞麻籽經(jīng)過(guò)80℃炒熟、粉碎,獲取α-亞麻酸含量達(dá)到53%的產(chǎn)品。
2~3歲蒙古羊20只,體重為(40±3)kg,體況良好,來(lái)源于內(nèi)蒙古自治區(qū)蘇尼特左旗。將20只羊隨機(jī)分為2組,每組10只,組間體重差異不顯著(P>0.05)。
基礎(chǔ)飼糧參照NRC(2007年)標(biāo)準(zhǔn)[5]配制,營(yíng)養(yǎng)水平進(jìn)行計(jì)算調(diào)整,對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼糧中添加3%α-亞麻酸。試驗(yàn)期為50 d,其中預(yù)試期5 d,逐漸調(diào)整飼糧;正試期為45 d。飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。
表1 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Tab.1 Diet composition and nutritional level(DM basis)
試驗(yàn)?zāi)秆蛉谏犸?,每組一欄。飼喂方式為每天上午和下午定量飼喂全混合飼糧(TMR)各1次,自由飲水。認(rèn)真觀察母羊采食、反芻情況,發(fā)現(xiàn)異常羊只要查找原因并及時(shí)處置,做好記錄。
預(yù)試期5 d后,給每只母羊肌內(nèi)注射1 mL氯前列腺烯醇(PG),隔8 d再注射PG 1 mL,6 d后給每只羊安裝陰道栓,11 d后撤陰道栓并肌內(nèi)注射孕馬血清促性腺激素(PMSG)400 IU。每組隨機(jī)選取6只母羊,在撤栓前1天及發(fā)情周期第1,10,20天采血,3 500 r/min離心10 min,分離血清,置于-20℃冰箱中保存,待測(cè)。
卵泡生成激素(follice-stimulating hormone,F(xiàn)SH)、黃體生成激素(luteinizing-hormone,LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P),均用放射免疫分析法測(cè)定(試劑盒來(lái)自西安寶信生物科技有限公司)。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因子方差分析(期間)和配對(duì)重復(fù)觀察值相等t檢驗(yàn)(組間),均值的多重比較采用鄧肯氏法。
母羊發(fā)情周期內(nèi)生殖激素含量測(cè)定結(jié)果見表2。
見表2、圖1。
由表2和圖1可以看出:(1)組間比較。在撤栓前1天和發(fā)情周期第1天母羊血清E2含量試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05);而發(fā)情周期第10,20天,試驗(yàn)組雖然略高于對(duì)照組,但組間差異不顯著(P>0.05)。(2)時(shí)間點(diǎn)間比較。隨著時(shí)間,試驗(yàn)組和對(duì)照組母羊血清E2含量均呈先降低后略升高的趨勢(shì)。與撤栓前相比,對(duì)照組和試驗(yàn)組發(fā)情周期第10,20天母羊血清E2含量顯著和極顯著降低(P<0.05和P<0.01)。
圖1 母羊血清中E2含量變化趨勢(shì)Fig.1 Changes of serum E2 content in ewe
見表2、圖2。
由表2和圖2可以看出:(1)組間比較。在撤栓前1天和發(fā)情周期第10天母羊血清P含量試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05),發(fā)情周期第1,20天組間差異不顯著(P>0.05)。(2)時(shí)間點(diǎn)間比較。隨著時(shí)間,試驗(yàn)組和對(duì)照組母羊血清P含量均呈先降低后升高的趨勢(shì)。對(duì)照組和試驗(yàn)組發(fā)情周期第20天母羊血清P含量顯著高于撤栓前1天和周期第1天(P<0.05)。而且發(fā)情周期第10天后母羊血清P含量都處在很高水平。
表2 母羊發(fā)情周期內(nèi)生殖激素含量測(cè)定結(jié)果Tab.2 Determination results of reproductive hormone content in ewe during estrus cycle
圖2 母羊血清中P含量變化趨勢(shì)Fig.2 Changes of serum P content in ewe
見表2、圖3。
由表2和圖3可以看出:(1)組間比較。在撤栓前1天母羊血清LH含量試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05),其余時(shí)間點(diǎn)組間均差異不顯著(P>0.05)。(2)時(shí)間點(diǎn)間比較。隨著時(shí)間,試驗(yàn)組和對(duì)照組母羊血清LH含量均呈先降低后升高的趨勢(shì)。對(duì)照組和試驗(yàn)組血清LH含量均在撤栓前1天最高,顯著高于發(fā)情周期第10,20天(P<0.05)。
圖3 母羊血清中LH含量變化趨勢(shì)Fig.3 Changes of serum LH content in ewe
見表2、圖4。
圖4 母羊血清中FSH含量變化趨勢(shì)Fig.4 Changes of serum FSH content in ewe
由表2和圖4可以看出:(1)組間比較。在撤栓前1天母羊血清FSH含量試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05),其余時(shí)間點(diǎn)組間均差異不顯著(P>0.05)。(2)時(shí)間點(diǎn)間比較。隨著時(shí)間,試驗(yàn)組和對(duì)照組母羊血清FSH含量均呈先降低后略升高的趨勢(shì)。對(duì)照組和試驗(yàn)組撤栓前1天均最高,顯著高于發(fā)情周期第1,10,20天(P<0.05)。
首先,由母羊血清生殖激素的濃度差異看,添加α-亞麻酸的試驗(yàn)組均高于對(duì)照組。α-亞麻酸是(ω-3PUFA)的母體,在動(dòng)物體內(nèi)可轉(zhuǎn)化成二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),但其轉(zhuǎn)化率還要受體內(nèi)ω-6PUFA(母體是亞油酸)的競(jìng)爭(zhēng)[6]。同時(shí),動(dòng)物體內(nèi)類二十烷酸的代謝途徑都要依靠ω-3PUFA和ω-6PUFA的平衡來(lái)實(shí)現(xiàn)[3]。它們?cè)隗w內(nèi)的平衡對(duì)于穩(wěn)定生物膜功能、調(diào)控基因表達(dá)、維持細(xì)胞因子和脂蛋白平衡及促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育和免疫等方面都起著重要作用[7]。但過(guò)去由于過(guò)分強(qiáng)調(diào)了ω-6 PUFA在這種平衡中的作用,又引發(fā)了新的不平衡[8]。如,目前母羊精補(bǔ)料多為玉米-豆粕型配方,其脂肪酸組成中ω-6PUFA組成很高,相反ω-3PUFA組成卻很低。導(dǎo)致母羊飼糧中脂肪酸組成不平衡,影響母羊的繁殖性能。α-亞麻酸和亞油酸是動(dòng)物卵泡、卵母細(xì)胞內(nèi)含量最為豐富的PUFA[3]。S.Matoba等[9]研究表明,牛卵泡液α-亞麻酸含量與卵母細(xì)胞發(fā)育能力呈正相關(guān)。還有W.F.Marei等[2]研究表明,體外成熟培養(yǎng)液添加適量的α-亞麻酸促進(jìn)了牛卵母細(xì)胞核成熟,提高了卵母細(xì)胞達(dá)到第二次減數(shù)分裂中期階段的比例、受精后的發(fā)育能力及囊胚質(zhì)量,而且α-亞麻酸處理卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(cumulus-oocyte complexes,COCs)后,促進(jìn)了PGE2的合成。在發(fā)情期內(nèi)PGE2能增加促性腺激素釋放激素(GnRH)的釋放,促進(jìn)LH和FSH的分泌;還能調(diào)節(jié)靶細(xì)胞對(duì)激素的敏感性而影響激素的效應(yīng)[1];PGE2還可促進(jìn)排卵,同時(shí)增強(qiáng)MAPK的磷酸化水平,揭示α-亞麻酸可能通過(guò)影響PGE2的合成,進(jìn)而激活MAPK信號(hào)通路促進(jìn)卵母細(xì)胞生長(zhǎng)[3]。研究還表明,奶牛飼喂高水平ω-3PUFA的飼糧,增加了卵泡液內(nèi)ω-3PUFA組成,提高了ω-3/ω-6PUFA的比例,進(jìn)而促進(jìn)了卵母細(xì)胞的生長(zhǎng)[4]。由此增加了卵泡P和E2的分泌[1],部分E2進(jìn)入血液循環(huán),丘腦下部和腦垂體對(duì)E2的低濃度產(chǎn)生反饋,分泌更多的FSH,刺激顆粒細(xì)胞,使得E2的分泌持續(xù)增加,最終達(dá)到排卵前的峰值,啟動(dòng)LH分泌,觸發(fā)排卵。
其次,由發(fā)情周期內(nèi)生殖激素濃度的變化看,母羊血清E2濃度的高峰圍繞在撤栓前1天和發(fā)情周期第1天左右的時(shí)間段出現(xiàn),符合母羊排卵前血清E2濃度最高的生理變化規(guī)律;P的濃度由發(fā)情周期第10天左右進(jìn)入高位態(tài)勢(shì),說(shuō)明早期胚胎已由囊胚期進(jìn)入著床并結(jié)束賦植過(guò)程,同時(shí)卵巢進(jìn)入黃體期。而血清LH和FSH已完成卵泡成熟與排卵的任務(wù),隨之進(jìn)入下降階段。
本試驗(yàn)結(jié)果表明:母羊清E2含量在撤栓前1天最高,P含量在發(fā)情周期第10天左右進(jìn)入高位態(tài)勢(shì)、之后降低,血清LH和FSH含量也呈降低趨勢(shì);通過(guò)在飼糧中添加α-亞麻酸,母羊血清中的生殖激素(包括E2、P、LH和FSH含量)水平均有提高。說(shuō)明在飼料中補(bǔ)充α-亞麻酸能夠促進(jìn)母羊繁殖相關(guān)激素的分泌。