黃文華 羅敏 張青 陳文 王李俊 艾瑛 郭三保

（1 江西省撫州市中醫(yī)藥發(fā)展中心 撫州 344000；2 建昌幫藥業(yè)有限公司 江西撫州 344000；3 江西中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校藥學(xué)系 撫州 344000）

天麻是我國(guó)一種著名的常用中藥材，來(lái)源于蘭科植物天麻（Gastrodia elataBl.）的干燥塊莖，臨床上主要用于治療風(fēng)虛眩暈、頭疼等病癥，具有平抑肝陽(yáng)、祛風(fēng)通絡(luò)功效[1]。天麻的食用營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值都非常高[2]，已于2019 年納入國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)頒布的“按照傳統(tǒng)既是食品又是中藥材的物質(zhì)”管理品種。歷代本草和醫(yī)方對(duì)天麻的記載描述都非常多。天麻藥材的質(zhì)量和藥效與其炮制方法、工藝有密切的關(guān)聯(lián)[3]。目前對(duì)天麻品質(zhì)考察多基于測(cè)定天麻素及羥基苯甲醇的含量[4～5]。姜天麻的炮制記載可追溯到《幼幼集成》[6]，天麻的姜制是江西“建昌幫”特色炮制技術(shù)之一，早在20 世紀(jì)80 年代，江西建昌幫主要傳人炮制大師上官賢就呼吁：“天麻姜制法為‘建昌幫’中藥傳統(tǒng)炮制技術(shù)，已瀕臨失傳和湮沒(méi)之危。亟需有關(guān)方面給予關(guān)注[7]?！北狙芯恳罁?jù)《中國(guó)藥典》（2020 版）方法檢測(cè)比較建昌幫傳統(tǒng)特色姜制天麻工藝炮制品與天麻生品的水分、總灰分、二氧化硫殘留量、浸出物、天麻素等指標(biāo)成分含量，旨在為制定建昌幫姜天麻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物與試劑 天麻藥材產(chǎn)地為貴州?。ㄙ裰萜杖A藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)y132-220104），經(jīng)鑒定為蘭科植物天麻的干燥塊莖。天麻素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)為110807-20201002）；對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)為111970-20170203）。水為超純化水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 安捷倫1260 型高效液相色譜儀、島津LC-2030 型高效液相色譜儀、電子分析天平（BT253）、電子天平（Sartorius/SQP-224-1）、電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒/DHG-9053A）、粉碎機(jī)（欣鎮(zhèn)企業(yè)/6202）、電熱恒溫水浴鍋（上海一恒/HWS-26）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 天麻炮制方法

2.1.1 天麻生品 依照《中國(guó)藥典》（2020 版）中天麻生品的制法，取原藥材，洗凈、蒸軟、切薄片、干燥，即得。

2.1.2 建昌幫姜制天麻 工藝細(xì)化根據(jù)江西省撫州市南城縣發(fā)掘整理建昌幫中藥傳統(tǒng)炮制技術(shù)科研小組梅開(kāi)豐、張禎祥、上官賢等編輯的《建昌幫中藥傳統(tǒng)炮制法》（86 版）中“姜天麻”項(xiàng)的操作進(jìn)行。工藝標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《江西省中藥飲片炮制規(guī)范》（2008 版）項(xiàng)下“姜天麻”的相關(guān)規(guī)定操作。

2.2 水分測(cè)定 精密稱(chēng)取樣品粉末2 g，平鋪于干燥至恒重的扇形稱(chēng)量瓶中，厚度不超過(guò)5 mm，打開(kāi)瓶蓋在105℃條件下干燥5 h，將瓶蓋蓋好轉(zhuǎn)置干燥器中，冷卻30 min 至室溫，精密稱(chēng)定，再在上述溫度條件下干燥1 h，冷卻至室溫，稱(chēng)重至連續(xù)兩次干燥稱(chēng)重的差異不超過(guò)5 mg 為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量（%）。

2.3 總灰分測(cè)定 精密稱(chēng)取樣品粉末2 g，置熾灼至恒重的坩堝中，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至500～600 ℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中總灰分的含量（%）。

2.4 二氧化硫殘留量測(cè)定 依照《中國(guó)藥典》2020版四部通則（2331）二氧化硫殘留量測(cè)定法第一法（酸堿滴定法）測(cè)定。

2.5 醇溶性浸出物測(cè)定 取95%乙醇263 ml，加入純化水237 ml，混勻配制成500 ml 稀乙醇備用。將樣品粉碎至通過(guò)二號(hào)篩，混合均勻后，精密稱(chēng)取3 g，置250 ml 錐形瓶中，精密加入稀乙醇100 ml 密塞。稱(chēng)定重量，靜置1 h 后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。冷卻之后，錐形瓶取下，密塞，再次精確稱(chēng)定重量。用稀乙醇補(bǔ)足減失重量，振搖均勻，用干燥漏斗快速濾過(guò)，精密量取該續(xù)濾液25 ml，置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃條件下干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱(chēng)定重量。以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量（%）。

2.6 天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量測(cè)定

2.6.1 色譜條件 色譜柱：Agilent C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液（3:97）；流速設(shè)定為 1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng) λ 為 220 nm；理論塔板數(shù)按天麻素峰進(jìn)行計(jì)算，按規(guī)定應(yīng)不低于5 000。

2.6.2 制備混合對(duì)照品溶液 取對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品和天麻素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定重量，置于容量瓶中，加乙腈-水（3:97）混合流動(dòng)相溶液制成每1 毫升含對(duì)羥基苯甲醇40.84 μg、天麻素46.95 μg 的混合對(duì)照品溶液。

2.6.3 制備供試品溶液 分別取姜天麻和天麻生品樣品粉碎，過(guò)三號(hào)篩。取過(guò)篩后的粉末約2 g，精密稱(chēng)定重量，精密加入50 ml 稀乙醇，精密稱(chēng)定總重量，超聲（功率120 W，頻率40 kHz）提取30 min，放冷，再次稱(chēng)定總重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失重量，濾過(guò)，精密量取10 ml 續(xù)濾液，置水浴上濃縮至無(wú)醇味近干，殘?jiān)踊旌狭鲃?dòng)相溶液乙腈- 水（3:97），分多次蕩洗，轉(zhuǎn)移至25 ml 容量瓶中，加混合流動(dòng)相溶液乙腈-水（3:97）稀釋至刻度，振搖均勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.6.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取已經(jīng)制備好的混合對(duì)照品溶液和供試品溶液，按2.6.1 中的描述設(shè)定色譜條件，進(jìn)樣。色譜圖顯示，混合對(duì)照溶液色譜中的天麻素與對(duì)羥基苯甲醇保留時(shí)間分別為8.716 min、14.646 min；樣品色譜中天麻素與對(duì)羥基苯甲醇的保留時(shí)間分別為8.837 min、14.814 min；樣品中天麻素與對(duì)羥基苯甲醇理論板數(shù)分別為6 571.605、20 455.531。樣品中理論板數(shù)按天麻素峰計(jì)算，結(jié)果為6 571.605，高于5 000。見(jiàn)圖1、圖2。

2.6.5 測(cè)定方法 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液與姜天麻樣品溶液各5 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。

2.7 特征圖譜檢測(cè)

2.7.1 色譜條件 迪瑪C18色譜柱，以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫：0～10 min，A 相：3%→10%；10～15 min，A 相：10%→12%；15～25 min，A 相 ：12% →18% ；25～40 min，A 相 ：18% ；40～42 min，A 相 ：18% →95% 。 流 速 ：0.8 ml/min，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm。

2.7.2 參照物溶液的制備 稱(chēng)取天麻對(duì)照藥材約0.5 g，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇25 ml，超聲處理30 min，放冷、搖勻，濾過(guò)，收集續(xù)濾液，作為對(duì)照藥材溶液。另取2.6.2 項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.7.3 供試品溶液制備 取姜天麻粉末（過(guò)四號(hào)篩）約0.5 g，置具塞錐形瓶中，超聲處理30 min，放冷、搖勻，濾過(guò)，收集續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.7.4 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照藥材溶液與姜天麻供試品溶液各5 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖，即得。供試品色譜中共呈現(xiàn)6 個(gè)特征峰，與對(duì)照藥材溶液色譜中的6 個(gè)特征峰一一對(duì)應(yīng)，其中峰1、峰2 與天麻素對(duì)照品和對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品色譜峰的保留時(shí)間一致。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 水分、總灰分、二氧化硫殘留量 建昌幫姜天麻和天麻生品中水分、總灰分、二氧化硫殘留量的含量檢測(cè)結(jié)果。見(jiàn)表1。

表1 水分、總灰分、二氧化硫殘留量

3.2 浸出物、天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量 建昌幫姜天麻和天麻生品中浸出物、天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量檢測(cè)結(jié)果。見(jiàn)表2。

表2 浸出物、天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量（%）

3.3 建昌幫姜制天麻炮制品的特征圖譜檢測(cè)結(jié)果供試品色譜峰中共出現(xiàn)6 個(gè)特征峰，與對(duì)照藥材溶液色譜中的6 個(gè)特征峰一一對(duì)應(yīng)，其中峰1、峰2 與天麻素對(duì)照品和對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相一致。見(jiàn)圖3～圖5，各峰歸屬見(jiàn)表3。

表3 建昌幫姜制天麻樣品特征圖譜峰表

4 討論

本研究結(jié)果顯示，與天麻生品比較，天麻經(jīng)建昌幫姜制工藝炮制后，水分和二氧化硫殘留量減少，尤其是二氧化硫殘留量下降明顯，浸出物及天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總含量增加。中藥材中二氧化硫殘留帶來(lái)的危害很多，被吸收進(jìn)入血液，會(huì)對(duì)全身產(chǎn)生毒作用，它能破壞酶的活力，從而明顯影響碳水化合物及蛋白質(zhì)的代謝，尤其對(duì)肝臟有一定損害。而天麻經(jīng)姜制后二氧化硫殘留量下降，而有效成分天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總含量增加，起到了很好的增效減毒效果。

目前，在炮制技術(shù)方面，業(yè)內(nèi)廣泛認(rèn)可的傳承流派主要有樟幫、建昌幫、京幫以及川幫[8～9]。姜制天麻是建昌幫傳統(tǒng)特色炮制品之一，以地方區(qū)域性使用為主。雖然該炮制品已載入《江西省中藥飲片炮制規(guī)范》2008 年版[10]和《廣東省中藥飲片炮制規(guī)范》2011年版[11]，但對(duì)其姜制工藝和炮制機(jī)理的現(xiàn)代研究較少。姜制天麻飲片被列為江西“建昌幫”特色飲片[12]，其炮制的理論依據(jù)是“姜制溫散”理論，可加強(qiáng)天麻鎮(zhèn)靜止痛、抗眩暈、止嘔等作用。近年來(lái)，有一些關(guān)于姜制天麻的現(xiàn)代研究報(bào)道,如李清等[13]學(xué)者分析發(fā)現(xiàn)天麻姜制后化學(xué)成分含量、性質(zhì)都有所改變。尤其是乙酸乙酯萃取部位，姜制后出現(xiàn)3 個(gè)新特征峰。張霞等[14]研究提示姜制天麻對(duì)天麻的功效有增效減毒的效果。陸平等[15]對(duì)生天麻、姜制天麻和硫磺熏蒸天麻這三種不同天麻炮制品中的天麻素含量進(jìn)行了比較，結(jié)果表明姜制天麻中的天麻素含量最高。范暉等[16]通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)天麻經(jīng)姜制后，能提高天麻對(duì)眩暈小鼠的抗眩暈作用。張霞等[17～18]發(fā)現(xiàn)天麻經(jīng)姜制后可增強(qiáng)天麻抗偏頭痛作用能使腦組織中的小膠質(zhì)細(xì)胞增加，對(duì)神經(jīng)保護(hù)作用有利。謝宇璐等[19]研究提示姜制天麻后對(duì)偏頭痛可能的作用機(jī)制是：通過(guò)Ca2+、cAMP、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和花生四烯酸代謝等信號(hào)通路，以減少炎癥介質(zhì)和神經(jīng)遞質(zhì)的產(chǎn)生，緩解偏頭痛癥狀，以達(dá)到治療作用。以上說(shuō)明，天麻姜制工藝炮制法具有合理性和科學(xué)性。

《中國(guó)藥典》（2020 版）尚未收載姜制天麻炮制品，其收載的天麻飲片（炮制方法為洗凈，潤(rùn)透或蒸軟，切薄片，干燥）規(guī)定水分不得過(guò)15.00%、總灰分不得過(guò)4.50%、二氧化硫殘留量不得過(guò)400.00 mg/kg、浸出物15.00%、天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的總量不得少于0.25%。本項(xiàng)目參考《中國(guó)藥典》（2020版）天麻飲片標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定3 批次建昌幫姜天麻的水分、總灰分、二氧化硫殘留量、浸出物、天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的總量的平均值分別為10.73%、2.02%、2.67 mg/kg、21.90%、0.56%。均符合《中國(guó)藥典》（2020 版）天麻飲片標(biāo)準(zhǔn)要求。經(jīng)測(cè)定建昌幫姜制天麻特征圖譜也符合《中國(guó)藥典》（2020 版）天麻飲片標(biāo)準(zhǔn)。說(shuō)明建昌幫姜制天麻的質(zhì)量較為穩(wěn)定可靠。

天麻是我國(guó)原衛(wèi)生部審批通過(guò)的第一批藥食兩用的植物，不僅臨床上有著重要的應(yīng)用，而且作為養(yǎng)生保健品的原料，也具有極大的開(kāi)發(fā)應(yīng)用價(jià)值[20]，因此，值得深入研究。以往的研究多集中在對(duì)天麻素等酚類(lèi)成分變化的分析，對(duì)天麻炮制方法的影響研究較少，對(duì)姜制等炮制法專(zhuān)屬標(biāo)志物的探索等還需要深入研究。國(guó)家特別重視中醫(yī)藥健康產(chǎn)業(yè)，尤其是具有地方傳統(tǒng)特色優(yōu)勢(shì)的中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)。本研究可為建昌幫傳統(tǒng)特色姜制天麻飲片的炮制工藝建立和完善科學(xué)性提供依據(jù)，制定姜制天麻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。有填補(bǔ)建昌幫地方特色流派產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)空白的作用，對(duì)深入開(kāi)展建昌幫傳統(tǒng)特色炮制方法和工藝的傳承和創(chuàng)新發(fā)展具有特殊意義，更能為建昌幫深入開(kāi)展“傳承精華、守正創(chuàng)新”工作提供科學(xué)依據(jù)。