鄧卉 陳曉燕 嚴(yán)園 魏征 肖鳳蓮 余曉

(1. 重慶市中醫(yī)院婦科，重慶 400011；2. 重慶市九龍坡區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科，重慶 400051)

子宮平滑肌肉瘤是較罕見的婦科泌尿生殖道惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，僅有2%～5%的子宮惡性腫瘤是子宮平滑肌肉瘤，但由于其侵略性較強(qiáng)，且治療方法有限，因此死亡率較高[1-3]。生促紅素肝細(xì)胞受體A2(Erythropoietin-producing hepatocyellular receptor A2，EphA2)屬于受體酪氨酸激酶超家族中最大的亞家族-Eph受體，EphA2及其配體EphrinA1與多種惡性腫瘤的形成和進(jìn)展相關(guān)，兩者在腫瘤細(xì)胞中存在過表達(dá)的現(xiàn)象[4-5]，且還有研究表明EphA2表達(dá)的增加與患者預(yù)后不良以及腫瘤轉(zhuǎn)移也相關(guān)[6]。鑒于此，本研究通過檢測EphA2和EphrinA1在子宮平滑肌肉瘤中是否存在異常表達(dá)，進(jìn)而利用siRNA技術(shù)沉默EphA2表達(dá)以觀察其對子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為和RelA/p65磷酸化的影響，以期為子宮平滑肌肉瘤的靶向治療及預(yù)后評估的研究提供新思路。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月～2020年6月在重慶市中醫(yī)院婦科診治的子宮平滑肌肉瘤患者共28例作為研究對象，收集術(shù)中切除的子宮平滑肌肉瘤樣本，對照組為子宮平滑肌瘤組織包膜外正常肌層，即為瘤旁組織。此次研究獲得了本院倫理委員批準(zhǔn)進(jìn)行，研究的所有患者均簽署了知情同意書?；颊吣挲g 34～54歲，平均(45.47±4.62)歲。所有患者符合子宮平滑肌瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)，以影像學(xué)診斷為依據(jù)；術(shù)前均未經(jīng)放、化療及服用激素藥物治療；均無卵巢腫瘤、糖尿病等并發(fā)癥；臨床和隨訪資料完整。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化染色檢測組織中EphA2與EphrinA1表達(dá) 取手術(shù)切除的子宮平滑肌肉瘤及瘤旁組織，置于4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切取5 μm厚的切片。取切片放置在烤箱中66℃處理1 h，接著在二甲苯中脫蠟，梯度酒精脫水，PBS沖洗3次，每次5 min；加入檸檬酸鈉進(jìn)行抗原修復(fù)，PBS沖洗3次，每次5 min；取0.3%過氧化氫液滴于切片上，室溫孵育10 min；采用10%山羊血清封閉，滴加稀釋的一抗(1:100)，4℃孵育過夜。第二天，PBS沖洗后，滴加生物素標(biāo)記二抗，室溫孵育1 h，DAB顯色，流水沖洗干凈，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察組織中陽性表達(dá)并捕獲圖像，胞質(zhì)染成黃色至棕色即為陽性，隨機(jī)選擇6個(gè)視野，Image-Pro Plus軟件統(tǒng)計(jì)陽性表達(dá)面積。

1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測EphA2、EphrinA1mRNA表達(dá) Trizol法提取不同組織及各處理組細(xì)胞總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測總RNA質(zhì)量與濃度。選擇符合要求的RNA樣品，根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行操作，將其反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，接著以cDNA為模板，通過實(shí)時(shí)熒光定量檢測系統(tǒng)檢測EphA2、EphrinA1mRNA表達(dá)，具體實(shí)驗(yàn)步驟按照SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒說明書進(jìn)行，選擇β-actin作為內(nèi)參基因。擴(kuò)增程序：95℃ 5 min；95℃ 30 s、60℃ 30 s、58℃ 30 s(循環(huán)40次)。擴(kuò)增結(jié)束后，運(yùn)用2-ΔΔCt法計(jì)算基因的表達(dá)水平，引物序列如下：EphA2上游引物5′-TCAGCAGCAGCGACTTCGAGGCA-3′，下游引物5′-GCCATGAAGTGC TCCGTAT -3′；EphrinA1上游引物5′-AACAAGCTGTGCAGGCATGG-3′，下游引物5′-CTCCACAGATGAGGTCTTGC-3′；β-actin上游引物 5′-ATGGTGGGAATGGGTCAGA-3′，下游引物 5′-TCTCCATGTCAGCCAGTTG-3′。

1.3.3 細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng) 將凍存的SK-UT-1細(xì)胞取出，放入37℃水浴加熱，快速搖動(dòng)使其完全溶解后，以800 rpm離心5 min，除去上清液，加入適量含10%一級胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素雙抗的培養(yǎng)液，在37℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2～3天貼壁后換液，融合達(dá)到80%左右時(shí)，傳代，加入0.25%胰酶消化液消化處理，繼續(xù)培養(yǎng)。

1.3.4 細(xì)胞分組與轉(zhuǎn)染 取生長狀態(tài)良好的SK-UT-1細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106個(gè)/mL并接種于96孔板，將細(xì)胞隨機(jī)分為空白對照組、陰性對照組(NC-siRNA)、EphA2-siRNA組3組。按照Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑說明書操作，分別配制EphA2-siRNA及陰性對照NC-siRNA與脂質(zhì)體Lipofectamine 2000復(fù)合物，在對應(yīng)組的細(xì)胞中加入適量復(fù)合物進(jìn)行轉(zhuǎn)染，在37℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～6 h，棄去培養(yǎng)液，換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)48 h，利用qRT-PCR和western blot檢測轉(zhuǎn)染效果。

1.3.5 Western blot檢測EphA2與RelA/p65磷酸化位點(diǎn)蛋白表達(dá) 在各組SK-UT-1細(xì)胞中加入預(yù)冷RIPA緩沖液進(jìn)行裂解，以4000 rpm離心15 min，提取各組樣品總蛋白，Bradford法檢測蛋白濃度。取40 μg各組蛋白樣品等量上樣，經(jīng)過10% SDS-PAGE電泳分離，將分離后的蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，室溫下置于5%脫脂奶粉中封閉2 h；TBST洗膜3次，每次5 min；加入兔抗EphA2(1:1000)、p53(1:1000)、RelA/p65 Ser536(1:1000)及RelA/p65 Ser276(1:1000)一抗工作液，4℃孵育過夜；第二天，棄去一抗，TBST洗膜后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔(1:5000)，室溫孵育1 h；TBST再次洗膜，滴加ECL試劑液顯色曝光，凝膠成像系統(tǒng)拍攝蛋白條帶圖像，Image J軟件分析各條帶的灰度值，并以β-actin作為內(nèi)參蛋白來計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。

1.3.6 CCK-8檢測細(xì)胞增殖 取生長狀態(tài)良好的各組SK-UT-1細(xì)胞，調(diào)整密度為5×55個(gè)/ml，吸取100μl接種于96孔板，置于37℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱過夜。次日，進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染處理實(shí)驗(yàn)，在轉(zhuǎn)染后24、48、72 h，分別于每孔加10 μl 的CCK-8，輕輕混勻，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，通過全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測各孔細(xì)胞在450 nm處的光密度(OD)值。

1.3.7 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移與侵襲 采用DMEM培養(yǎng)液稀釋Matrigel膠，取50 μL稀釋的Matrigel膠加入Transwell小室上室聚碳脂膜上，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)干燥。取轉(zhuǎn)染后各組SK-UT-1細(xì)胞，調(diào)整密度為2×104個(gè)/ml，取200 μL細(xì)胞懸液加入小室上室，并在下室中加入600 μL無血清DMEM培基液，置于37℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱孵育24 h，取出小室，棄去培養(yǎng)液，用濕棉簽輕輕擦去上室細(xì)胞，下室室面用4%多聚甲醛中固定30 min，擦去固定液，加入0.1%結(jié)晶紫染色20 min，流水洗掉多余染液，在光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選擇6個(gè)視野觀察并捕獲圖像，統(tǒng)計(jì)侵襲細(xì)胞數(shù)目，取平均值為實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。遷移實(shí)驗(yàn)除不進(jìn)行鋪膠外，其他操作均與上述過程一致。

風(fēng)選系統(tǒng)正常運(yùn)轉(zhuǎn)后，可提高商品煤品類精度，但相應(yīng)的排矸量也相應(yīng)增加，勢必減少商品煤總量，這就需要進(jìn)行項(xiàng)目經(jīng)濟(jì)性對比分析，從而佐證項(xiàng)目經(jīng)濟(jì)性和可行性。經(jīng)對風(fēng)選實(shí)驗(yàn)時(shí)商品煤質(zhì)量情況進(jìn)行測定，結(jié)合市場價(jià)格情況和具體資金投入等進(jìn)行綜合分析計(jì)算，來測算項(xiàng)目的經(jīng)濟(jì)效益。

1.3.8 TUNEL染色檢測細(xì)胞凋亡 收集轉(zhuǎn)染后的各組SK-UT-1細(xì)胞，PBS沖洗3次，每次5 min，加入4%多聚甲醛固定細(xì)胞30 min，加入含0.3% Triton X-100的PBS重懸細(xì)胞，室溫下繼續(xù)孵育5 min，接著加入TUNEL檢測液，反復(fù)吹打混勻，置于37℃避光孵育1 h，PBS洗滌細(xì)胞，進(jìn)行涂片處理后，在熒光顯微鏡觀察隨機(jī)選擇6個(gè)視野，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)目和TUNEL陽性染色細(xì)胞數(shù)目，計(jì)算TUNEL陽性率。

1.3.9 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡 收集轉(zhuǎn)染后的各組SK-UT-1細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞，PBS沖洗3次，每次5 min，以4000 rpm離心10 min，棄去上清液，用適量染色緩沖液binding buffer中調(diào)整細(xì)胞密度為 1×106個(gè)/mL，吸取100 μL細(xì)胞懸液，依次加入10 μL Annexin V-FITC試劑液與5 μL PI溶液，混合均勻，避光室溫孵育15 min，立即上流式細(xì)胞儀檢測各處理組細(xì)胞凋亡發(fā)生的比例。

1.3.10 免疫熒光染色檢測NF-κB p65表達(dá) 收集轉(zhuǎn)染后的各組SK-UT-1細(xì)胞，PBS沖洗3次，每次5 min，加入4%多聚甲醛固定15 min，滴加含有0.5%TritonX-100的PBS通透處理15 min，PBS再次清洗；采用10%山羊血清封閉細(xì)胞2 h，接著加入稀釋的兔抗p65抗體(1:200)，4℃孵育過夜；第2天，PBS洗滌后，滴加FITC標(biāo)記的熒光二抗(1:250)，室溫避光孵育1 h，采用DAPI避光孵育5 min染核，PBS洗滌細(xì)胞，使用熒光顯微鏡觀察并捕獲圖像。

2 結(jié)果

2.1 子宮平滑肌肉瘤及癌旁組織中EphA2與EphrinA1表達(dá)比較 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果所示，EphA2與EphrinA1在子宮平滑肌肉瘤組織中陽性染色較深且面積較多，而兩者在癌旁組織中陽性染色面積較少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖1。qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，相較于癌旁組織，子宮平滑肌肉瘤組織中的EphA2與EphrinA1 mRNA相對表達(dá)量均顯著上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖2。

圖1 免疫組化染色檢測組織EphA2與EphrinA1表達(dá)(100×)Figure 1 Immunohistochemical staining to detect the expression of EphA2 and EphrinA1 in tissues

圖2 qRT-PCR檢測組織EphA2、EphrinA1 mRNA表達(dá)Figure 2 qRT-PCR detection of tissue EphA2，EphrinA1 mRNA expression

2.2 轉(zhuǎn)染后子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞中EphA2表達(dá)變化 qRT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)染48 h后，EphA2-siRNA組SK-UT-1細(xì)胞中EphA2 mRNA與蛋白的相對表達(dá)量較空白對照組均顯著下調(diào)(P<0.05)，而EphA2-siRNA組和EphA2-NC組的EphA2 mRNA與蛋白相對表達(dá)量之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖3。

圖3 qRT-PCR和Western blot檢測各組SK-UT-1細(xì)胞中EphA2 mRNA及蛋白表達(dá)Figure 3 qRT-PCR and Western blot detection of EphA2 mRNA and protein expression in SK-UT-1 cells of each group

2.3 沉默EphA2表達(dá)對子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞增殖的影響 CCK-8檢測沉默EphA2表達(dá)后對SK-UT-1細(xì)胞增殖活性的影響，檢測結(jié)果顯示，相較于空白對照組，EphA2-siRNA組細(xì)胞在轉(zhuǎn)染24、48及72 h后，細(xì)胞的增殖活性顯著下降(P<0.05)，而NC-siRNA組與空白對照組的細(xì)胞增殖活性之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖4。

圖4 CCK-8檢測各組SK-UT-1細(xì)胞增殖活性Figure 4 CCK-8 detects the proliferation activity of SK-UT-1 cells in each group注：與Blank組比較，①P<0.05

2.4 沉默EphA2表達(dá)對子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞遷移與侵襲的影響 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測沉默EphA2表達(dá)對SK-UT-1細(xì)胞遷移與侵襲的影響，見圖5。與空白對照組比較，EphA2-siRNA組細(xì)胞的遷移數(shù)目與侵襲數(shù)目均顯著減少(P<0.05)，而NC-siRNA組細(xì)胞遷移數(shù)目與侵襲數(shù)目均無顯著變化(P>0.05)。

圖5 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測各組SK-UT-1細(xì)胞遷移與侵襲Figure 5 Transwell chamber experiment to detect the migration and invasion of SK-UT-1 cells in each group

2.5 沉默EphA2表達(dá)對子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞凋亡的影響 TUNEL染色檢測結(jié)果所示，三組SK-UT-1細(xì)胞中均有陽性染色，與空白對照組比較，EphA2-siRNA組TUNEL陽性染色細(xì)胞率顯著增加(P<0.05)，NC-siRNA組TUNEL陽性染色細(xì)胞率則無顯著變化(P>0.05)，見圖6。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，與空白對照組比較，EphA2-siRNA組SK-UT-1細(xì)胞凋亡率顯著增加(P<0.05)，而NC-siRNA組和空白對照組的細(xì)胞凋亡率之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖7。

圖6 TUNEL染色檢測各組SK-UT-1細(xì)胞凋亡Figure 6 TUNEL staining to detect the apoptosis of SK-UT-1 cells in each group

圖7 流式細(xì)胞術(shù)檢測各組SK-UT-1細(xì)胞凋亡Figure 7 Flow cytometry detection of SK-UT-1 cell apoptosis in each group

2.6 沉默EphA2表達(dá)對子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞p65表達(dá)的影響 免疫熒光染色結(jié)果所示，空白對照組SK-UT-1細(xì)胞中p65在核中染色明顯，綠色熒光強(qiáng)，NC-siRNA組細(xì)胞中p65核染色也較明顯，綠色熒光強(qiáng)度與空白對照組相似，而EphA2-siRNA組染色較空白對照組變淺，核內(nèi)無明顯綠色熒光表達(dá)，見圖8。

圖8 免疫熒光染色檢測各組SK-UT-1細(xì)胞p65表達(dá)(100×)Figure 8 Immunofluorescence staining to detect p65 expression of SK-UT-1 cells in each group

2.7 沉默EphA2表達(dá)對子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞RelA/p65磷酸化水平的影響 Western blot檢測SK-UT-1細(xì)胞中RelA/p65主要活性位點(diǎn)的磷酸化水平，與空白對照組比較，EphA2-siRNA組細(xì)胞中p53蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05)，RelA/p65 Ser536和RelA/p65 Ser276磷酸化蛋白水平顯著降低(P<0.05)；而空白對照組和NC-siRNA組以上各蛋白水平表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖9。

圖9 Western blot檢測各組SK-UT-1細(xì)胞中RelA/p65磷酸化位點(diǎn)蛋白表達(dá)Figure 9 Western blot detection of RelA/p65 phosphorylation site protein expression in SK-UT-1 cells in each group

3 討論

子宮平滑肌肉瘤是一種較為罕見的腫瘤，由于臨床表現(xiàn)與普通肌瘤相似，因此檢測及治療困難。目前，子宮平滑肌肉瘤的治療手段包括全腹子宮切除術(shù)、雙側(cè)輸卵管卵巢切除術(shù)和使用化療藥物，但患者3年無進(jìn)展生存率僅為50%。大多數(shù)患者在治療后8～16個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)，通過血流轉(zhuǎn)移至別處器官，多數(shù)復(fù)發(fā)發(fā)生在骨盆外區(qū)域，肺是最常見的復(fù)發(fā)部位[7-9]。導(dǎo)致子宮平滑肌肉瘤的發(fā)生發(fā)展的尚不清楚，研究表明，在子宮平滑肌肉瘤中涉及了一些基因突變或者表達(dá)改變，通過全面的基因組分析已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種基因的改變，鑒別這些特異性基因蛋白在開發(fā)新型針對子宮平滑肌肉瘤的分子靶向療法中起著十分關(guān)鍵的作用。

Eph受體構(gòu)成了一個(gè)較大的受體酪氨酸激酶家族，其能夠通過與聚集在鄰近細(xì)胞中的Ephrin配體結(jié)合，從而介導(dǎo)細(xì)胞之間信號傳遞過程?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)EphA2在多種腫瘤組織或細(xì)胞中存在過表達(dá)現(xiàn)象，并與其配體EphrinA1結(jié)合參與調(diào)控腫瘤血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移、體液穩(wěn)態(tài)以及血管重組等過程[4，10]。本研究結(jié)果顯示，EphA2與EphrinA1在子宮平滑肌肉瘤組織中的表達(dá)水平明顯高于瘤旁組織中的表達(dá)水平，這提示EphA2及其配體EphrinA1可能參與了子宮平滑肌肉瘤的發(fā)生發(fā)展。在以往研究中，李黎等[11]通過檢測發(fā)現(xiàn)在宮頸鱗癌組織中EphA2和EphrinA1呈高表達(dá)，且兩者表達(dá)水平均與宮頸鱗癌的腫瘤分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及局部侵潤深度相關(guān)。Shao等[12]研究發(fā)現(xiàn)EphA2/EphrinA1在涎腺腺樣囊性癌中高表達(dá)，與微血管密度、臨床TNM分期、神經(jīng)周浸潤和血管浸潤相關(guān)，表明了EphA2/ EphrinA1可以作為腺樣囊性癌的新型治療靶點(diǎn)。以上結(jié)果說明EphA2及其配體EphrinA1在多種腫瘤中存在異常高表達(dá)，并與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

Eph受體家族由兩個(gè)亞類EphA(EphA1-10)和EphB(EphB1-6)組成。研究發(fā)現(xiàn)，EphA2作為該家族成員之一，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化等惡性生物學(xué)過程，其過度表達(dá)也與乳腺癌、胃癌、宮頸癌、膀胱癌、鼻咽癌等發(fā)生發(fā)展以及患者不良預(yù)后之間均密切相關(guān)[13-18]。考慮到以EphA2為靶點(diǎn)的治療方法在臨床治療中的應(yīng)用，本研究通過脂質(zhì)體介導(dǎo)法將EphA2-siRNA轉(zhuǎn)染至子宮平滑肌肉瘤SK-UT-1細(xì)胞以沉默EphA2表達(dá)。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞的增殖活性明顯下降，細(xì)胞遷移與侵襲能力均受到抑制，同時(shí)，促進(jìn)了細(xì)胞凋亡的發(fā)生。因此推測，以EphA2為靶點(diǎn)的療法應(yīng)用于以EphA2表達(dá)作為生物標(biāo)記物的腫瘤進(jìn)行治療時(shí)，可能會(huì)為子宮平滑肌肉瘤患者帶來臨床益處。

NF-κB是一個(gè)普遍存在與表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子家族，可參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、存活、應(yīng)激反應(yīng)和炎癥相關(guān)基因的表達(dá)[19-22]。NF-κB信號傳導(dǎo)途徑在兩層反應(yīng)中被激活，IKKB的IKK依賴性磷酸化和降解可以使NF-κB發(fā)生核易位，但核易位和DNA結(jié)合不足以發(fā)揮其最大的轉(zhuǎn)錄活性，需要進(jìn)行復(fù)雜的翻譯后修飾來調(diào)節(jié)其反式激活潛力[23]。RelA/p65是NF-κB家族中最重要的亞基，其磷酸化是關(guān)鍵的翻譯后激活機(jī)制。迄今為止，在RelA/p65中已經(jīng)鑒定出總共12個(gè)磷酸化位點(diǎn)，包括9個(gè)絲氨酸和3個(gè)蘇氨酸位點(diǎn)，其中Ser276和Ser536是RelA/p65中的兩個(gè)重要的磷酸化位點(diǎn)[24]。Ser276被蛋白激酶A和MSK1磷酸化；而Ser536被IκB激酶、TANK結(jié)合激酶(TBK1)和核糖體亞基激酶-1(RSK1)磷酸化。RelA/p65一些相關(guān)位點(diǎn)的磷酸化激活可能有助于腫瘤發(fā)生發(fā)展[25]。本研究結(jié)果顯示，在沉默EphA2后子宮平滑肌瘤細(xì)胞中RelA/p65 Ser536和RelA/p65 Ser276磷酸化蛋白水平均降低，而抑癌因子p53蛋白表達(dá)則升高。由此推測，沉默EphA2可能抑制了RelA/p65相關(guān)位點(diǎn)的磷酸化，以阻礙腫瘤細(xì)胞的生長與轉(zhuǎn)移。

4 結(jié)論

在子宮平滑肌肉瘤組織中EphA2及其配體EphrinA1均呈現(xiàn)高表達(dá)，沉默EphA2表達(dá)可抑制子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并調(diào)控RelA/p65中Ser276和Ser536位點(diǎn)磷酸化水平。這說明兩者聯(lián)合檢測有助于子宮平滑肌肉瘤的診斷與預(yù)后評估，可為今后子宮平滑肌肉瘤的靶向治療提供新思路。