張曉莉， 裴雨洋， 于天水

JNK信號(hào)通路在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠施萬細(xì)胞自噬過程中的調(diào)控機(jī)制*

張曉莉， 裴雨洋▲， 于天水△

［證據(jù)科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（中國政法大學(xué)），司法文明協(xié)同創(chuàng)新中心，北京 100088］

探討c-Jun氨基末端激酶（JNK）信號(hào)通路在氧化應(yīng)激（OS）誘導(dǎo)的施萬細(xì)胞自噬中的作用及相關(guān)機(jī)制。體外常規(guī)培養(yǎng)小鼠坐骨神經(jīng)施萬細(xì)胞，利用缺糖缺氧后復(fù)糖復(fù)氧建立施萬細(xì)胞OS模型，并對(duì)已經(jīng)OS的小鼠施萬細(xì)胞施加JNK抑制劑SP600125。將細(xì)胞分為正常對(duì)照組、OS組、OS+DMSO組、OS+SP600125 （2 d）組、OS+SP600125 （4 d）組和OS+SP600125 （6 d）組（=5）。采用RT-qPCR、細(xì)胞免疫熒光染色和Western blot檢測(cè)JNK1/2、叉頭框蛋白O1/3（FoxO1/3）、自噬相關(guān)蛋白7/8（Atg7/8）和微管相關(guān)蛋白1輕鏈3-I/II（LC3-I/II）的mRNA和蛋白表達(dá)水平。OS后小鼠施萬細(xì)胞中JNK1/2和FoxO1/3表達(dá)顯著增加（<0.05），Atg7/8和LC3-II的表達(dá)水平亦顯著升高（<0.05），LC3-I則反之。隨著JNK抑制劑SP600125作用時(shí)間的延長(zhǎng)，小鼠施萬細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白（Atg7、Atg8和LC3-II）與FoxO1/3表達(dá)趨勢(shì)一致，均呈時(shí)間規(guī)律性下降。JNK可能通過激活其下游FoxO1/3，促進(jìn)自噬相關(guān)蛋白表達(dá)，從而導(dǎo)致OS后小鼠施萬細(xì)胞發(fā)生自噬。

c-Jun氨基末端激酶；叉頭框蛋白O；氧化應(yīng)激；施萬細(xì)胞；自噬

冠心病患者心臟結(jié)構(gòu)上會(huì)發(fā)生的一系列病理生理改變，如心肌細(xì)胞壞死、凋亡、自噬（autophagy）、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、心肌纖維化及瘢痕、心室壁變薄及擴(kuò)張等，稱為心肌重構(gòu)（myocardial remodeling）［1］。但近年來研究發(fā)現(xiàn)，心肌梗死后不僅發(fā)生心肌重構(gòu)，支配該區(qū)域的交感神經(jīng)也會(huì)出現(xiàn)類似病理變化，即交感神經(jīng)重構(gòu)（sympathetic nerve remodeling），表現(xiàn)為去神經(jīng)支配、交感神經(jīng)芽生（sympathetic nerve sprouting）及交感神經(jīng)分布密度增高（sympathetic hyperinnervation）［1］。但是心肌梗死后發(fā)生交感神經(jīng)重構(gòu)的分子機(jī)制尚不完全清楚。目前可以肯定的是心肌梗死會(huì)引起氧化應(yīng)激（oxidative stress， OS）反應(yīng)，使支配該區(qū)域的交感神經(jīng)施萬細(xì)胞通過自噬清除髓鞘碎片，由此決定著交感神經(jīng)芽生的進(jìn)程。本研究采用缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧誘導(dǎo)小鼠施萬細(xì)胞OS，模擬體內(nèi)心肌梗死后交感神經(jīng)的狀態(tài)，探討c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase， JNK）信號(hào)通路在OS誘導(dǎo)的小鼠施萬細(xì)胞自噬過程中的作用機(jī)制。

材料和方法

1　主要實(shí)驗(yàn)試劑

兔抗叉頭框蛋白O1（forkhead box protein O1， FoxO1）抗體（ab52857）和兔抗FoxO3抗體（ab47285）均購自Abcam；小鼠抗GAPDH抗體（60004-1-Ig）、小鼠抗JNK1抗體（66210-1-Ig）、兔抗JNK2抗體（51153-1-AP）、小鼠抗自噬相關(guān)蛋白7（autophagy-related protein 7， Atg7）抗體（67341-1-Ig）、兔抗Atg8抗體（11010-1-AP）、兔抗微管相關(guān)蛋白1輕鏈3-I（microtubule-associated protein 1 light chain 3-I， LC3-I）抗體（18722-1-AP）、Cy3標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG（SA00009-1）、Cy3標(biāo)記的山羊抗兔IgG（SA00009-2）和FITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG（SA00003-2）均購自Proteintech；兔抗LC3-II抗體（3868）購自Cell Signaling Technology；辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase， HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG（ZB-2301）和HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG（ZB-2305）均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；JNK抑制劑SP600125（HY-12041）購自MedChemExpress；BCA蛋白定量試劑盒（KGPBCA）購自南京凱基；Hoechst 33258（C1017）和RIPA強(qiáng)效裂解液（P0013B）均購自上海碧云天；ECL發(fā)光液（ECL-0011）購自北京鼎國生物技術(shù)有限公司；PVDF膜（HATF00010）購自Millipore；蛋白預(yù)染Marker（26616）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（#K1622）和SYBR Green PCR試劑盒（F-415XL）均購自Thermo。

2　主要實(shí)驗(yàn)儀器

細(xì)胞培養(yǎng)箱（Thermo）；熒光倒置顯微鏡（型號(hào)IX71，OLYMPUS）；超凈工作臺(tái)（型號(hào)SW-CJ-1FD，蘇州安泰科技有限公司）；電泳儀（型號(hào)Mini Protean 3 Cell，Bio-Rad）；電轉(zhuǎn)儀（型號(hào)PS-9，大連競(jìng)邁科技有限公司）；酶標(biāo)儀（型號(hào)MK3，Thermo）；脫色搖床（型號(hào)TS-1000，Qilinbeier）；一體式化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（ChemiScope 5300，上海勤翔科學(xué)儀器有限公司）；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)3K15，Sigma）；PRISM?7500 Real-Time PCR System（ABI）。

3　主要方法

3.1細(xì)胞株小鼠施萬細(xì)胞系是前期本實(shí)驗(yàn)室從清潔級(jí)（SPF）新生3日齡ICR小鼠（購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司）的坐骨神經(jīng)中分離、純化及傳代培養(yǎng)所獲得。前期本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)不同條件下活性氧（reactive oxygen species， ROS）及細(xì)胞存活率檢測(cè)結(jié)果，成功建立體外缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧誘導(dǎo)小鼠施萬細(xì)胞OS模型。

3.2分組將小鼠施萬細(xì)胞分為正常對(duì)照（control）組、OS組、OS+DMSO組、OS+SP600125 （2 d）組、OS+SP600125 （4 d）組和OS+SP600125 （6 d）組（=5）。

3.3細(xì)胞培養(yǎng)首先制作OS模型，方法如下：小鼠施萬細(xì)胞（5×105）鋪板于6孔板中培養(yǎng)8 d；用無糖培養(yǎng)液洗2次，將細(xì)胞培養(yǎng)液換為無糖培養(yǎng)液，放入缺氧培養(yǎng)箱中（95% N2、5% CO2），37 ℃培養(yǎng)3 h；再吸棄培養(yǎng)液，每孔加入DMEM培養(yǎng)液2 mL；放入37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)24 h。再對(duì)上述已經(jīng)OS的細(xì)胞用JNK抑制劑SP600125（20 μmol/L）分別培養(yǎng)2 d（處理1次）、4 d（處理2次）和6 d（處理3次）。具體方法為每隔2天換液一次，換液時(shí)棄去原先培養(yǎng)液，加入新鮮的培養(yǎng)液，同時(shí)繼續(xù)加入SP600125（20 μmol/L）。正常對(duì)照組用有糖培養(yǎng)液洗2次，并換為有糖培養(yǎng)液，在正常氣體條件下培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間。

3.4RT-qPCR檢測(cè)以逆轉(zhuǎn)錄所得cDNA為模板在96孔板內(nèi)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。以GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參照，按照SYBR Green PCR試劑盒要求配制20 μL反應(yīng)體系：ddH2O 7.0 μL，SYBR Green qPCR Master Mix （2×） 10.0 μL，上、下游引物各1.0 μL，cDNA溶液1.0 μL。PCR擴(kuò)增條件：94 ℃ 20 s，55 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，共40個(gè)循環(huán)。由PRISM?7500 Real-Time PCR System自動(dòng)采集給出目的基因和內(nèi)參照的Ct值，mRNA表達(dá)量采用2-ΔΔCt進(jìn)行計(jì)算。所有引物均由上海生工公司通過Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)并合成，序列見表1。

表1　RT-qPCR引物序列

F： forward； R： reverse.

3.5細(xì)胞免疫熒光染色將各組細(xì)胞PBS漂洗1次后，4%多聚甲醛固定30 min，0.1% Triton室溫下處理15 min，PBS洗2次，5% FBS室溫下封閉15 min；加入Ⅰ抗（JNK2和LC3-I抗體，1∶50；JNK1、FoxO1、Atg7和Atg8抗體，1∶100；FoxO3和LC3-II抗體，1∶200），4 ℃孵育過夜；PBS洗3次，加入Cy3標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG、Cy3標(biāo)記的山羊抗兔IgG或FITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG（均1∶100），37 ℃孵育1 h；室溫避光孵育核染色（Hoechst 33258）15 min；熒光顯微鏡下觀察。

3.6Western blot檢測(cè)（1）蛋白定量：首先繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；在酶標(biāo)板中加入2.5 μL待測(cè)蛋白和17.5 μL PBS，加入200 μL BCA工作液，把酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30 s，37 ℃放置30 min，然后在562 nm下測(cè)定吸光度；根據(jù)所測(cè)樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白濃度（g/L），根據(jù)樣品濃度確定上樣量。（2）蛋白樣品的制備：在提取的蛋白中加入5× SDS上樣緩沖液，混合均勻后，放入沸水中水浴5 min，使蛋白變性，12 000 r/min離心5 min，所得蛋白樣品直接上樣檢測(cè)或置于-80 ℃保存。（3）制備聚丙烯酰胺凝膠：根據(jù)待檢測(cè)蛋白分析量大小確定分離膠濃度。將玻璃板清洗干凈，晾干后將玻璃板對(duì)齊插入夾子中卡緊，將12%分離膠沿玻璃板緩慢注入，然后在膠面上注入適量的水，待膠凝固后將水倒出，用濾紙將剩下的水吸凈，沿玻璃板注入5%濃縮膠將剩余空間灌滿，插入梳子，將凝膠連同模具一起放入4 ℃冰箱冷卻，待膠凝固后將梳子拔出。（4）上樣：裝好電泳裝置，倒入電泳緩沖液，用移液器分別將Marker和25 μg蛋白注入樣品孔。（5）電泳：濃縮膠恒定電壓80 V、30 min；分離膠恒定電壓120 V、60 min，至溴酚藍(lán)接近膠底部時(shí)停止電泳，進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。（6）切膠：將玻璃板輕輕撬開，以Marker為對(duì)照進(jìn)行切膠。（7）轉(zhuǎn)膜：將濾紙、PVDF膜剪成與凝膠尺寸大小相同，用甲醇浸泡PVDF膜15 s，使膜由白色變?yōu)榘胪该骱蠓湃氤兯?，靜置2 min，將處理好的PVDF膜放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡15 min，按海綿墊、濾紙、凝膠、PVDF膜、濾紙、海綿墊的順序疊加在一起，用玻璃棒趕走各層之間的氣泡，放入轉(zhuǎn)膜槽中，倒入轉(zhuǎn)移緩沖液。（8）封閉：將膜用TBST漂洗3次，每次5 min，再用5%脫脂奶粉37 ℃緩慢震蕩2 h。（9）孵育Ⅰ抗：用封閉液稀釋抗體至合適濃度（JNK1抗體，1∶3 000；JNK2抗體、FoxO1抗體、FoxO3抗體、LC3-I抗體和LC3-II抗體，1∶1 000；Atg7抗體，1∶5 000；Atg8抗體，1∶500），4 ℃過夜孵育。（10）孵育Ⅱ抗：TBST沖洗3次，每次1 min，將PVDF膜放入以1∶5000稀釋的HRP標(biāo)記的兔Ⅱ抗或鼠Ⅱ抗溶液中，37 ℃緩慢振蕩孵育1 h，TBST沖洗3次，每次5 min。（11）顯色：在膜上加入適量的ECL發(fā)光液，利用一體式化學(xué)發(fā)光儀拍攝照片。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。以<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1　OS促進(jìn)小鼠施萬細(xì)胞JNK1/2和FoxO1/3表達(dá)

RT-qPCR結(jié)果顯示，小鼠施萬細(xì)胞OS后JNK1、JNK2、FoxO1和FoxO3的mRNA表達(dá)水平均比正常對(duì)照組顯著升高（<0.01），見圖1。細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，小鼠施萬細(xì)胞OS后JNK1、JNK2、FoxO1和FoxO3熒光強(qiáng)度均顯著增強(qiáng)，見圖2、3。Western blot結(jié)果顯示，小鼠施萬細(xì)胞OS后JNK1、JNK2、FoxO1和FoxO3蛋白灰度值與正常對(duì)照組相比均顯著增高（<0.01），見圖4。

Figure 1. Effects of JNK inhibitor SP600125 on the mRNA expression of JNK1/2 （A） and FoxO1/3 （B） in Schwann cells after oxidative stress （OS）. Mean±SD. n=5. *P<0.05， **P<0.01 vs control group； #P<0.05， ##P<0.01 vs OS group.

Figure 2. Immunofluorescence staining of JNK1 （A） and JNK2 （B）. Scale bar=20 μm.

Figure 3. Immunofluorescence staining of FoxO1 （A） and FoxO3 （B）. Scale bar=20 μm.

Figure 4. Effects of JNK inhibitor SP600125 on the protein expression of JNK1/2 （A） and FoxO1/3 （B） in Schwann cells after oxidative stress （OS）. Mean±SD. n=5. **P<0.01 vs control group； #P<0.05， ##P<0.01 vs OS group.

2　OS誘導(dǎo)小鼠施萬細(xì)胞自噬增加

RT-qPCR結(jié)果顯示，小鼠施萬細(xì)胞OS后Atg7、Atg8和LC3-II的mRNA表達(dá)水平比正常對(duì)照組均顯著升高（<0.01），見圖5。細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，小鼠施萬細(xì)胞OS后Atg7、Atg8和LC3-II熒光強(qiáng)度均顯著增強(qiáng)，見圖6、7。Western blot結(jié)果顯示，小鼠施萬細(xì)胞OS后Atg7、Atg8和LC3-II蛋白灰度值與正常對(duì)照組相比均顯著升高（<0.01），見圖8。然而，OS后LC3-I的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著降低，見圖5～8。

Figure 5. Effects of JNK inhibitor SP600125 on the mRNA expression of Atg7/8 （A） and LC3-I/II （B） in Schwann cells after oxidative stress （OS）. Mean±SD. n=5. *P<0.05， **P<0.01 vs control group； #P<0.05， ##P<0.01 vs OS group.

Figure 6. Immunofluorescence staining of Atg7 （A） and Atg8 （B）. Scale bar=20 μm.

Figure 7. Immunofluorescence staining of LC3-I （A） and LC3-II （B）. Scale bar=20 μm.

Figure 8. Effects of JNK inhibitor SP600125 on the protein expression of Atg7/8 （A） and LC3-I/II （B） in Schwann cells after oxidative stress （OS）. Mean±SD. n=5. **P<0.01 vs control group； #P<0.05， ##P<0.01 vs OS group.

3　JNK抑制劑SP600125降低OS后小鼠施萬細(xì)胞自噬水平

隨著JNK抑制劑SP600125作用時(shí)間的延長(zhǎng)，小鼠施萬細(xì)胞Atg7、Atg8和LC3-II的mRNA和蛋白水平逐漸下降（<0.05或<0.01），LC3-I的mRNA和蛋白水平逐漸升高（<0.01）；SP600125處理6 d時(shí)，Atg7、Atg8和LC3-II的mRNA和蛋白水平達(dá)到最低值，而LC3-I的mRNA和蛋白水平則達(dá)到最高，見圖5～8。

4　JNK抑制劑SP600125下調(diào)OS后小鼠施萬細(xì)胞FoxO1/3表達(dá)

隨著JNK抑制劑SP600125作用時(shí)間的延長(zhǎng)，OS后小鼠施萬細(xì)胞FoxO1/3的mRNA和蛋白表達(dá)規(guī)律與自噬相關(guān)蛋白（Atg7/8和LC3-II）一致，見圖1、3、4。

討論

JNK是絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase， MAPK）的一個(gè)亞家族。JNK信號(hào)通路是一種對(duì)細(xì)胞內(nèi)外應(yīng)激的保守響應(yīng)，如DNA損傷、葡萄糖剝奪、熱應(yīng)激、OS、炎癥因子和生長(zhǎng)因子等，均可激活組織細(xì)胞中的JNK信號(hào)通路［2-3］。

自噬（autophagy）是一種保守的細(xì)胞分解代謝途徑。在正常情況下，自噬處于相當(dāng)?shù)偷乃?，但?dāng)機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，體內(nèi)細(xì)胞的自噬被激活，表現(xiàn)為自噬增強(qiáng)。當(dāng)刺激程度過強(qiáng)時(shí)，進(jìn)一步發(fā)展為自噬受損，可能導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的損傷，對(duì)機(jī)體造成損害。本研究首先應(yīng)用RT-qPCR、免疫熒光染色和Western blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白，發(fā)現(xiàn)OS可以促進(jìn)Atg7、Atg8和LC3-II表達(dá)，而降低LC3-I水平，說明OS可以誘導(dǎo)小鼠施萬細(xì)胞自噬；繼續(xù)采用JNK抑制劑SP600125處理OS的小鼠施萬細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，自噬相關(guān)蛋白（Atg7、Atg8和LC3-II）均呈時(shí)間依賴性下降，LC3-I則升高，表明了JNK對(duì)OS后小鼠施萬細(xì)胞的自噬水平起到促進(jìn)作用。研究發(fā)現(xiàn)，JNK有多種途徑誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，其中，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平可能性最大［4］。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)OS不僅能增加小鼠施萬細(xì)胞JNK1/2表達(dá)，還可促進(jìn)JNK下游分子FoxO1/3的表達(dá)。FoxO轉(zhuǎn)錄因子家族能夠調(diào)節(jié)多種靶基因的表達(dá)，從而參與細(xì)胞自噬活動(dòng)，是目前公認(rèn)重要的自噬調(diào)節(jié)因子［5-7］。該家族包含4位成員，分別為FoxO1（也稱為FKHR）、FoxO3（也稱為FKHRL1）、FoxO4（也稱為AFX1）和FoxO6。由于后來發(fā)現(xiàn)FoxO2與FoxO3同源以及FoxO5僅在斑馬魚中表達(dá)，所以未將二者列為FoxO轉(zhuǎn)錄因子家族成員［8］。FoxOs通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)表達(dá)變化和翻譯后修飾來調(diào)控不同的生理或病理過程［9］。FoxOs蛋白主要位于胞核內(nèi)，有研究表明，胞核FoxOs通過促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄參與自噬調(diào)控，而胞質(zhì)FoxOs可通過與胞質(zhì)自噬相關(guān)蛋白（如Atg7）直接作用，調(diào)節(jié)自噬，該過程與FoxOs的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用無關(guān)［10-11］。近年來，對(duì)FoxOs的研究熱度逐漸從腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移到了神經(jīng)細(xì)胞。FoxOs在很多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要的作用，如海馬神經(jīng)元損傷及認(rèn)知障礙［12］等，但是在外周神經(jīng)中的作用機(jī)制研究甚少。

為了進(jìn)一步探討OS后小鼠施萬細(xì)胞內(nèi)JNK對(duì)下游分子FoxOs的作用機(jī)制，我們采用JNK抑制劑SP600125處理OS小鼠施萬細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)OS的小鼠施萬細(xì)胞FoxO1/3表達(dá)亦呈時(shí)間依賴性下降，變化規(guī)律與自噬相關(guān)蛋白（Atg7、Atg8和LC3-II）表達(dá)一致。這提示JNK可能激活了其下游FoxO1/3，活化的FoxOs進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)直接與基因的啟動(dòng)子結(jié)合，參與調(diào)控其轉(zhuǎn)錄［13-14］；還能使FoxO下游靶物L(fēng)C3-II蛋白表達(dá)增加，減少ROS產(chǎn)生［15］。

綜上所述，本研究初步闡明了OS狀態(tài)下小鼠施萬細(xì)胞JNK1/2通過激活FoxO1/3，使自噬相關(guān)蛋白Atg7、Atg8及LC3-II上調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致小鼠施萬細(xì)胞自噬增加。這為JNK信號(hào)通路在心肌梗死后交感神經(jīng)重構(gòu)中的作用提供了理論基礎(chǔ)。后續(xù)本實(shí)驗(yàn)組還將采用腺病毒過表達(dá)技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證JNK與FoxO1/3之間的關(guān)系。

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Role of JNK signaling pathway in autophagy of Schwann cells induced by oxidative stress

ZHANG Xiao-li， PEI Yu-yang▲， YU Tian-shui△

（，，，，100088，）

To investigate the role of c-Jun N-terminal kinase （JNK） signaling pathway in Schwann cell autophagy induced by oxidative stress （OS）.Schwann cells from mouse sciatic nerves were used. The OS model was established by oxygen-glucose deprivation and reoxygenation， and the Schwann cells in OS group were treated with JNK inhibitor SP600125. The cells were divided into control group， OS group， OS+DMSO group， OS+SP600125 （2 d） group， OS+SP600125 （4 d） group and OS+SP600125 （6 d） group （=5 each）. The mRNA and protein expression levels of JNK1/2， forkhead box protein O1/3 （FoxO1/3）， autophagy-related protein 7/8 （Atg7/8） and microtubule-associated protein 1 light chain 3-I/II （LC3-I/II） were detected by RT-qPCR， immunofluorescence staining and Western blotRESULTS： The expression levels of JNK1/2， FoxO1/3， Atg7/8 and LC3-II in the Schwann cells were increased （<0.05）， while the expression of LC3-I remarkably decreased during oxidative stress. SP600125， a JNK inhibitor， inhibited the expression of Atg7/8， LC3-II and FoxO1/3 in a time-dependent manner.The JNK-FoxO1/3 signaling pathway serves a critical role in the autophagy of Schwann cells after OS.

c-Jun N-terminal kinase； Forkhead box protein O； Oxidative stress； Schwann cells； Autophagy

R541.4； R363.2

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2022.03.011

1000-4718（2022）03-0471-08

2022-01-06

2022-03-01

［基金項(xiàng)目］國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助（No. 81971796）；中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金資助；中國政法大學(xué)科研創(chuàng)新引導(dǎo)專項(xiàng)項(xiàng)目（No. 20ZFY34001）

Tel： 13811429667； E-mail： 30030005@qq.com

▲并列第一作者

（責(zé)任編輯：盧萍，羅森）