余道武，余天霧，茍 毅，楊陸蒙

胰腺癌是臨床常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，具有進展快、病死率高的特點[1]。因其起病隱匿且早期無典型癥狀，導致多數(shù)患者就診時已進展至中晚期，錯過根治性手術治療的最佳時期，故預后較差[2]。為改善胰腺癌患者的預后，延長生存期，急需尋找便捷、準確的診斷方法，以提高早期診斷率[3]。目前，胰腺癌診斷除CT、MRI等影像學方法外，還常用癌胚抗原、糖類抗原199等腫瘤標志物，但此類標志物診斷胰腺癌的敏感度、特異度較差，早期通常無明顯升高，檢測到其異常升高時通常疾病已發(fā)展至中晚期[4]。因此，有必要尋找敏感度與特異度更高的生物標志物，以提高胰腺癌的早期診斷率。胰腺癌具有較強的浸潤、轉移特性，是其預后較差的主要原因[5]。黏附分子異常表達在腫瘤的浸潤、轉移中發(fā)揮重要作用，其中細胞間黏附分子-1(ICAM-1)是目前研究較多的黏附分子，在免疫應答、腫瘤轉移等多種病理、生理過程中發(fā)揮關鍵作用[6]；富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)是一種抗凋亡因子，其過度表達與腫瘤細胞的遷移有關[7]；三結構域蛋白14(TRIM14)屬三結構域蛋白家族成員，能夠參與抗細胞凋亡、促進血管生成、腫瘤轉移等諸多過程[8]。本研究通過檢測胰腺癌組織ICAM-1、LRG1、TRIM14表達情況，分析三者在胰腺癌中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入2016年3月—2018年3月我院收治的86例胰腺癌作為研究對象，其中男49例，女37例；年齡34～80(58.27±11.65)歲。導管腺癌46例，囊腺癌12例，黏液腺癌13例，鱗腺癌8例，低分化惡性內分泌瘤7例。①納入標準：均符合胰腺癌診斷標準，并經(jīng)手術后病理檢查確診；術前未接受任何抗腫瘤治療；對本研究知情同意；臨床資料完整。②排除標準：合并其他部位惡性腫瘤者；合并嚴重的肝腎功能損傷者；未接受定期隨訪者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準執(zhí)行。

1.2方法 收集患者癌組織及距離癌灶2 cm的癌旁組織標本，常規(guī)固定并經(jīng)石蠟包埋切片，用于免疫組織化學檢查。

1.2.1ICAM-1、LRG1、TRIM14表達檢測：采用免疫組織化學法檢測，石蠟切片常規(guī)脫蠟脫水；室溫下使用3%過氧化氫-PBS阻斷內源性過氧化物酶15 min，PBS沖洗3次，每次3 min；95 ℃條件下將切片置于枸櫞酸鹽緩沖液10 min，室溫下冷卻30 min，PBS沖洗3次，每次3 min，濾紙吸干；滴加山羊血清封閉液，放置于37 ℃濕盒內孵育30～60 min；濾紙吸取封閉液，加入一抗(1∶100)，4 ℃條件下過夜；PBS沖洗3次，每次3 min，加入生物素標記的羊抗兔二抗，37 ℃條件下孵育30～60 min；PBS沖洗3次，每次3 min，加入辣根過氧化物酶標記的三抗鏈霉卵白素35～50 μl，37 ℃條件下孵育30～60 min；PBS沖洗3次，每次3 min，滴加DAB，避光顯色，蒸餾水沖洗，10%蘇木精復染；梯度乙醇脫水、二甲苯透明、封片。陰性對照采用PBS，陽性對照購自濟南芯博生物科技有限公司。

1.2.2ICAM-1、LRG1、TRIM14表達陽性判定標準[9]：高倍鏡下隨機選取10個視野，依據(jù)染色強度及陽性細胞百分數(shù)進行計分。①染色強度：未顯色0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分。②陽性細胞百分數(shù)：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。染色強度與陽性細胞百分數(shù)分值相加為總得分，1分為-，2～3分為+，4～5分為++，6～7分為+++；其中-和+記為低表達，++和+++記為高表達。

1.2.3神經(jīng)浸潤判定[10]：組織切片在100倍光學顯微鏡下觀察，若胰內神經(jīng)纖維或胰周神經(jīng)干、神經(jīng)叢發(fā)現(xiàn)癌細胞則可判定為神經(jīng)浸潤。

1.3治療及隨訪 56例給予手術輔以放化療，30例給予手術輔以化療，根據(jù)腫瘤大小與位置選擇術式，胰頭癌實施胰十二指腸切除術聯(lián)合消化道重建，胰體尾部腫瘤實施胰腺遠端切除術。所有患者均每2個月門診隨訪1次，隨訪時間為3年。

1.4觀察指標 分別比較ICAM-1、LRG1、TRIM14在胰腺癌組織與癌旁組織中的表達情況，分析不同臨床病理特征胰腺癌患者ICAM-1、LRG1、TRIM14表達情況，觀察不同ICAM-1、LRG1、TRIM14表達胰腺癌患者的生存率，并分析三者與胰腺癌患者預后的關系。

2 結果

2.1胰腺癌組織與癌旁組織ICAM-1、LRG1、TRIM14表達比較 胰腺癌組織ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達率均高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 胰腺癌組織與癌旁組織ICAM-1、LRG1、TRIM14表達情況比較[例(%)]

2.2不同臨床病理特征胰腺癌患者ICAM-1、LRG1、TRIM14表達情況 TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤最大徑>2 cm、中低分化、有神經(jīng)浸潤、有淋巴結轉移胰腺癌患者ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達率分別高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤最大徑≤2 cm、高分化、無神經(jīng)浸潤、無淋巴結轉移患者(P<0.05，P<0.01)。見表2。

表2 不同臨床病理特征胰腺癌患者ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達率比較(例)

2.3不同ICAM-1、LRG1、TRIM14表達胰腺癌患者的生存分析 ICAM-1低表達胰腺癌患者的3年生存率為30.43%，高于ICAM-1高表達患者的14.29%(P<0.05)。LRG1低表達胰腺癌患者3年生存率為33.33%，高于LRG1高表達患者的12.90%(P<0.05)。TRIM14低表達胰腺癌患者3年生存率為32.00%，高于TRIM14高表達患者的13.11%(P<0.05)。見圖1。

圖1 不同ICAM-1、LRG1、TRIM14表達胰腺癌患者的生存曲線

2.4影響胰腺癌患者預后死亡的多因素Logistic回歸分析 ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達是胰腺癌患者預后死亡的獨立危險因素(P<0.01)。見表3。

表3 影響胰腺癌患者預后死亡的多因素Logistic回歸分析

3 討論

胰腺屬腹膜后位器官，位置較為隱蔽，因此胰腺癌的早期診斷較困難。又因其周圍有重要器官及血管，對腹主動脈、門靜脈等大血管及膽總管具有較強侵襲性，故胰腺癌是一種預后較差的惡性腫瘤。

淋巴結轉移是胰腺癌最主要的轉移方式，除此之外還可直接浸潤神經(jīng)束膜并沿束膜間隙轉移，這種浸潤轉移方式是導致臨床早期診斷、治療困難及預后較差的主要原因[11]。在胰腺癌的浸潤、轉移機制中，基因發(fā)揮著重要作用，但隨著研究深入，有學者發(fā)現(xiàn)黏附分子在其中具有重要影響[12]。黏附分子是腫瘤浸潤、轉移的必要條件，其異常表達發(fā)揮著關鍵作用。ICAM-1屬免疫球蛋白超家族成員，為目前研究較多的黏附分子，除了參與細胞間的黏附作用外，還在多種炎癥細胞和腫瘤細胞表面表達[13]。ICAM-1的正常表達對于免疫系統(tǒng)清除腫瘤細胞有一定的積極作用，但其持久、增強表達則對機體免疫系統(tǒng)有抑制作用，使腫瘤細胞能夠逃避免疫監(jiān)視[14]。根據(jù)既往研究，ICAM-1的表達與大腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤的臨床分期有密切關系，且在有淋巴結及遠處轉移的患者中高表達率明顯升高[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織ICAM-1高表達率高于癌旁組織，證實ICAM-1在胰腺癌組織中存在異常高表達。有研究證實，異常血管生成在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關鍵作用[16]。LRG1是中性粒細胞早期分化標志物，可通過調控轉化生長因子-β信號通路促進血管生成，參與細胞凋亡，調節(jié)腫瘤細胞的細胞周期[17]。除此之外，上皮細胞向間質細胞的轉化是腫瘤細胞獲得侵襲與轉移能力的重要過程，轉化生長因子-β已被證實在此過程中發(fā)揮關鍵作用[18-19]。本研究顯示，胰腺癌組織LRG1高表達率高于癌旁組織，提示其可能與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展有關。TRIM14屬三結構域蛋白家族成員，已被證實能夠參與免疫調節(jié)、血管生成、腫瘤轉移等諸多過程，關于其功能研究的報道較少，且主要集中于先天性免疫方面[20]。關于TRIM14在惡性腫瘤中的作用，僅在非小細胞肺癌、胃癌中有少量報道[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織TRIM14高表達率高于癌旁組織，因此推測TRIM14高表達在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。

本研究還發(fā)現(xiàn)，ICAM-1、LRG1、TRIM14在胰腺癌組織中的表達均與患者的主要惡性病理特征相關，具體表現(xiàn)為TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤最大徑>2 cm、中低分化、有神經(jīng)浸潤、有淋巴結轉移的胰腺癌患者ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達率分別高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤最大徑≤2 cm、高分化、無神經(jīng)浸潤、無淋巴結轉移患者，提示ICAM-1、LRG1、TRIM14可能參與胰腺癌的進展、浸潤與轉移相關調控；進一步多因素Logistic回歸分析顯示，ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達是胰腺癌患者預后死亡的獨立危險因素；生存分析提示，ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達胰腺癌患者3年生存率均顯著降低。以上結果證實，ICAM-1、LRG1、TRIM14在胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉移過程中發(fā)揮重要作用，其在癌組織中的表達水平對患者預后具有一定評估價值。

綜上所述，胰腺癌組織ICAM-1、LRG1、TRIM14表達水平與患者的臨床病理特征密切相關，可作為患者預后評估的指標，三者的作用機制有望為胰腺癌的治療提供新思路。