藍(lán) 瑩，陳綿綿，程昌勇，宋厚輝

(浙江農(nóng)林大學(xué) 動物科技學(xué)院 動物醫(yī)學(xué)院 浙江省畜禽綠色生態(tài)健康養(yǎng)殖應(yīng)用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗室 動物健康互聯(lián)網(wǎng)檢測技術(shù)浙江省工程實(shí)驗室，浙江 杭州 311300)

1 單增李斯特菌概述

單核細(xì)胞增多性李斯特菌(Listeriamonocytogenes)，簡稱單增李斯特菌，是一種重要的食源性病原微生物，廣泛分布于自然界中，包括土壤和水源等環(huán)境[1]。單增李斯特菌可以穿過胃腸道屏障進(jìn)入血液，引起胃腸炎、敗血癥和腦膜炎等病癥，孕婦感染時，單增李斯特菌可以穿過胎盤屏障從而導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)以及胎兒畸形[2-3]。全世界范圍內(nèi)多次發(fā)生人感染單增李斯特菌而死亡的案例，該菌感染后死亡率可以達(dá)到30%[4]。近10年來，在我國22個省份的759個案例中死亡率達(dá)到18%，在新生兒中的致死率更高達(dá)73%[5]。因此，單增李斯特菌致病機(jī)制的研究對于該病原的防制具有重要意義。

2 單增李斯特菌感染機(jī)制

單增李斯特菌能夠感染多種宿主，包括人、小鼠、兔子和鳥類等多種生物[6]。單增李斯特菌能夠感染吞噬細(xì)胞和非吞噬細(xì)胞，并在細(xì)胞內(nèi)增殖。單增李斯特菌感染吞噬細(xì)胞時，吞噬細(xì)胞被激活，而后通過“Trojan horse”效應(yīng)將細(xì)菌送到不同的組織和器官[7-8]。單增李斯特菌感染宿主非吞噬細(xì)胞時，毒力主要受PrfA調(diào)控，也會受到SigB調(diào)控的影響[9]。單增李斯特菌主要毒力基因(prfA-plcA-hly-ActA-plcB)組成的毒力島(LIPI-I)[10]和內(nèi)化素A、內(nèi)化素B(InlA、InlB)感染宿主非吞噬細(xì)胞時發(fā)揮著主要作用[11]。單增李斯特菌利用其表面蛋白InlA和InlB分別與宿主細(xì)胞表面的E-鈣黏蛋白(E-cadherin)和肝細(xì)胞生長因子(Met)黏附結(jié)合后通過胞吞方式侵入宿主細(xì)胞[12]。進(jìn)入宿主細(xì)胞的細(xì)菌被細(xì)胞膜包裹形成吞噬體，此時細(xì)菌分泌溶血素LLO，并協(xié)同磷脂酶A(PlcA)和磷脂酶B(PlcB)溶解吞噬泡，成功逃逸到細(xì)胞質(zhì)[13]。單增李斯特菌在胞質(zhì)內(nèi)利用細(xì)胞營養(yǎng)進(jìn)行增殖，同時表面蛋白ActA募集肌動蛋白絲actin形成“彗星狀”尾部[14]，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)運(yùn)動并在細(xì)胞膜上形成突起，這使單增李斯特菌完美逃脫先天免疫從而引起鄰近細(xì)胞的持續(xù)性感染[15]。

3 內(nèi)化素家族蛋白分類

內(nèi)化素家族蛋白在單增李斯特菌侵襲宿主非吞噬細(xì)胞的過程中發(fā)揮重要的作用[16]。除了InlA、InlB、InlC、InlP和InlK外，大部分內(nèi)化素蛋白的功能尚不清楚(表1)[17]。單增李斯特菌內(nèi)化素家族蛋白是一組富含亮氨酸重復(fù)區(qū)域(LRR)，N端含有信號肽的蛋白質(zhì)[16]。LRR是蛋白互作的多功能結(jié)合基序，存在于各種參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞黏附過程的蛋白[18]。根據(jù)內(nèi)化素蛋白的C末端一級結(jié)構(gòu)的不同可將其分為3類：含有LPXTG結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素、含有GW/WxL結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素和分泌型內(nèi)化素[19]。

表1 內(nèi)化素家族蛋白研究進(jìn)展

3.1 含有LPXTG結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素含有LPXTG結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素蛋白一共有19種，包括InlA、InlK、InlE、InlF、InlG、InlH、InlI、InlJ、InlL、Lmo1136、Lm-o0610、Lmo1289、Lmo0514、Lmo0331、Lmo0732、Lmo0801、Lmo0171、Lmo2396和Lmo0327(圖1)。這類內(nèi)化素C末端由LPXTG結(jié)構(gòu)、疏水基團(tuán)和帶正電荷的尾部組成分選信號[16]。單增李斯特菌有2種分選酶：SrtA和SrtB，與InlA的LPXTG基序發(fā)揮作用的主要是SrtA，SrtA識別并裂解含有LPXTG基序的蛋白底物的分選信號，裂解產(chǎn)生的蘇氨酸羧基與肽聚糖的前體脂質(zhì)Ⅱ連接，再通過生物合成機(jī)制連接在細(xì)菌表面[32]。InlH/J/K也可以被StrA識別，并以共價鍵的形式結(jié)合于肽聚糖上，其他含有LPXTG結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素目前還不清楚具體是通過什么方式固定在細(xì)胞壁上[33]。

3.2 含有GW/WxL結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素含有GW/WxL結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素有2種：InlB和Lmo0549(圖1)，這2種內(nèi)化素都通過非共價鍵的形式結(jié)合在細(xì)菌細(xì)胞壁[34-35]。InlB有3個以甘氨酸和色氨酸為起始的含80個氨基酸重復(fù)序列的GW結(jié)構(gòu)[35]，GW結(jié)構(gòu)與磷壁酸結(jié)合，并且磷壁酸的糖基化作用將蛋白更好地錨定于細(xì)菌細(xì)胞壁表面[36]。除了InlB，單增李斯特菌還有其他8個包含有GW結(jié)構(gòu)的蛋白，其中自溶素Ami和Auto也是與細(xì)胞黏附侵襲相關(guān)的蛋白[35,37]。Lmo0549蛋白是含有WxL結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素[38]。WxL結(jié)構(gòu)屬于Csc家族，單增李斯特菌基因組中有2組Csc基因簇，含有WxL結(jié)構(gòu)的蛋白有4個，但只有Lmo0549含有LRR區(qū)并被認(rèn)為是內(nèi)化素家族蛋白[39]。含有WxL結(jié)構(gòu)的蛋白通過與肽聚糖相互作用結(jié)合在革蘭陽性菌的細(xì)胞壁上[38]。其他菌種，如糞腸球菌中，缺失含有WxL結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素家族蛋白ElrA能使細(xì)菌在巨噬細(xì)胞以及小鼠模型中的定殖能力顯著下降[40]。但是目前Lmo0549結(jié)構(gòu)和功能尚不清楚，含有WxL結(jié)構(gòu)蛋白的共性及特性還需要繼續(xù)研究。

Ⅰ.含有LPXTG結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素蛋白；Ⅱ.含有GW/WxL結(jié)構(gòu)的內(nèi)化素蛋白；Ⅲ.分泌型內(nèi)化素蛋白

3.3 分泌型內(nèi)化素InlC在細(xì)胞上無法錨定，是分泌型內(nèi)化素的一種，其對細(xì)菌的黏附侵襲來說不是必要的，但是能夠促進(jìn)單增李斯特菌侵襲鄰近細(xì)胞時細(xì)胞膜突起的形成以及幫助細(xì)菌逃避宿主先天免疫反應(yīng)[28,41]。InlP、Lmo2027和Lmo2445也被認(rèn)為是分泌型內(nèi)化素(圖1)。最近報道InlP對促進(jìn)單增李斯特菌進(jìn)入胎盤屏障有重要作用[31]。

4 內(nèi)化素家族蛋白的功能

4.1 內(nèi)化素家族蛋白在黏附侵襲中的作用InlA蛋白是內(nèi)化素家族的重要成員，在李斯特菌黏附侵襲進(jìn)入細(xì)胞過程中起著重要的作用[42]，InlA是第1個被發(fā)現(xiàn)含有LRR序列和LPXTG結(jié)構(gòu)的表面蛋白[43]。當(dāng)前體蛋白在細(xì)胞質(zhì)中合成之后，N端在信號肽的作用下分泌出胞外，然后信號肽被切除，而C端由于有疏水區(qū)域和帶正電荷的尾部而被留在細(xì)胞膜中，這時分選基序LPXTG被分選酶共價結(jié)合到細(xì)胞壁上[44]，LRR序列與宿主細(xì)胞的受體E-鈣黏蛋白胞外結(jié)構(gòu)域中的第16位脯氨酸特異性結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)菌進(jìn)入上皮細(xì)胞的內(nèi)化作用(圖2)[19,24-45]。E-鈣黏蛋白主要在胃腸道上皮細(xì)胞中存在，比如杯狀細(xì)胞[25,46]。其他鈣黏蛋白，如N-鈣黏蛋白被發(fā)現(xiàn)在許多惡性腫瘤中異常表達(dá)，對癌癥的靶向治療的提供新的認(rèn)識[47]。E-鈣黏蛋白作為細(xì)胞受體與InlA結(jié)合，然后脂質(zhì)筏使E-鈣黏蛋白聚集，胞質(zhì)中E-鈣黏蛋白尾部被宿主激酶Src磷酸化和泛素連接酶Hakai泛素化，從而調(diào)節(jié)肌動蛋白成核劑Arp2/3招募肌動蛋白使細(xì)胞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)改變[48-49]。這種“觸發(fā)機(jī)制”引起的吞噬泡促使單增李斯特菌通過胃腸道屏障甚至胎盤屏障[50]。研究發(fā)現(xiàn)李斯特菌黏附蛋白LAP能夠介導(dǎo)細(xì)菌侵入腸道屏障，并且這可能給InlA介導(dǎo)細(xì)菌侵入腸道屏障的提供一個重要條件[51]。

GW型內(nèi)化素InlB在單增李斯特菌的感染中也發(fā)揮著重要作用，能夠幫助單增李斯特菌侵入大部分細(xì)胞，包括肝細(xì)胞和非上皮細(xì)胞[44]。GW基序以非共價鍵的形式作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁從而將InlB錨定在細(xì)胞壁上。InlB能夠與宿主細(xì)胞表面的糖胺聚糖(GAGs)、補(bǔ)體成分Clq受體(gClqR)和Met等結(jié)合并介導(dǎo)李斯特菌入侵宿主細(xì)胞[52-54]。InlB通過LRR區(qū)域的凹面與Met結(jié)合，引起Met瞬時磷酸化[55]，招募并磷酸化接頭蛋白Cbl、Gab1、Shc和CrkⅡ，然后激活PI3激酶(PI3K)[56]。接頭蛋白Cbl也顯示泛素連接酶活性，可促進(jìn)Met泛素化，從而調(diào)節(jié)Arp2/3、肌動蛋白解聚因子cofilin、LIM激酶以及GTPase Rac1參與InlB依賴途徑所需的細(xì)胞骨架重排，進(jìn)而促進(jìn)InlB依賴的單增李斯特菌進(jìn)入靶細(xì)胞[57-58]。InlB從細(xì)菌表面脫離后，其C端GW結(jié)構(gòu)與受體GAGs和gClqR相互作用，N端LRR與Met互作并導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)中Met的尾部被泛素化修飾(圖2)，展示了細(xì)胞入侵過程中InlB的氨基和羧基末端結(jié)構(gòu)域之間的協(xié)同作用[7,59]。

胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞能夠表達(dá)E-鈣黏蛋白和Met，因此認(rèn)為InlA和InlB對細(xì)菌跨過胎盤的屏障發(fā)揮作用[60]。在胎盤組織中，PI3K不能自主激活，而InlA介導(dǎo)的內(nèi)化作用需要PI3K活性，所以InlA需要InlB激活PI3K使單增李斯特菌進(jìn)入并感染胎盤[60]，但是InlA/B對細(xì)菌通過胎盤屏障的作用一直存在爭議[61]。InlA能夠介導(dǎo)單增李斯特菌入侵BeWo細(xì)胞系和人胎盤原代滋養(yǎng)細(xì)胞(PHTs)，但是在懷孕的豚鼠和能夠正常表達(dá)E-鈣黏蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠中InlA/B介導(dǎo)細(xì)菌侵入胎盤作用不顯著[62-63]。E-鈣黏蛋白在人胎盤合胞滋養(yǎng)細(xì)胞頂端層表面表達(dá)水平低，且母體血液對細(xì)菌有高度的抵抗力，所以細(xì)菌不能通過浸泡于母體血液的合胞滋養(yǎng)細(xì)胞侵入胎盤屏障[64]。而絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞能夠大量表達(dá)E-鈣黏蛋白，是感染的主要突破口，細(xì)菌從絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞突破，隨后感染胎盤[65]。

近來發(fā)現(xiàn)InlF在單增李斯特菌感染細(xì)胞、組織特別是通過血腦屏障發(fā)揮關(guān)鍵作用。Rho-相關(guān)蛋白激酶(ROCKs)抑制劑被發(fā)現(xiàn)能增強(qiáng)細(xì)菌對細(xì)胞系的黏附侵襲和組織定殖能力，在inlF缺失情況下，其介導(dǎo)侵襲小鼠細(xì)胞系和小鼠器官的定殖能力下降；并且感染了不表達(dá)InlF蛋白突變菌的小鼠，其大腦定殖的細(xì)菌數(shù)量比野生菌要顯著減少，但在其他臟器中無顯著變化，說明InlF對細(xì)菌定殖在大腦具有特殊作用[26,66]。波形蛋白在間充質(zhì)細(xì)胞和各種腦細(xì)胞表面中廣泛表達(dá)，能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、細(xì)胞外遷移和細(xì)胞信號傳導(dǎo)[67-68]。InlF能與波形蛋白互作，介導(dǎo)單增李斯特菌與大腦內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，給細(xì)菌感染大腦提供了必要條件，在波形蛋白缺失情況下，單增李斯特菌在大腦定殖能力顯著受損[26]。這表明細(xì)胞表面波形蛋白與InlF互作對細(xì)菌在大腦定殖的重要性。除了InlF，InlA和InlB在侵入血腦屏障時也可能發(fā)揮作用，在感染人上皮脈絡(luò)叢乳頭狀瘤(HIBCPP)和腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞系(HBMEC)時，inlA和inlB缺失株黏附侵襲能力顯著下降；然而有一些內(nèi)化素基因表現(xiàn)出相反的作用，當(dāng)inlGHE基因簇中某一基因缺失時，InlB介導(dǎo)的細(xì)菌對HBMEC的黏附侵襲能力增強(qiáng)[69-71]。

4.2 內(nèi)化素家族蛋白在免疫中的作用InlB與Met相互作用除了在細(xì)菌黏附侵襲中起到關(guān)鍵作用，還刺激宿主的PI3K、AKT、MAPK(MAP激酶)等多個信號通路的激活[72]。在小鼠巨噬細(xì)胞中，PI3K和AKT可通過IKKα激活NF-κB[73-74]。 InlB還可通過其誘導(dǎo)激活的PI3K/AKT通路，通過宿主IPO7(輸入蛋白7)和PPM1A/PPM1B(蛋白磷酸酶1A/1B)在S25(絲氨酸25)處的去磷酸化，使SIRT2(去乙?；窼irtuin 2)與染色質(zhì)結(jié)合并觸發(fā)組蛋白H3在賴氨酸18(H3K18)處的特異性去乙?；?圖2)[75-76]。H3K18去乙?；筍IRT2在基因啟動子上富集，并引起宿主基因轉(zhuǎn)錄被抑制，如在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用(lef1和cxcl12)[75]。

當(dāng)單增李斯特菌感染細(xì)胞時，細(xì)胞膜上TLR(Toll樣受體)識別信號，再通過MyD88(骨髓分化初級響應(yīng)因子88)、IRAK(IL-1R相關(guān)激酶)、TRAF6(TNF受體相關(guān)因子6) 和TAK1(TGFβ-活化激酶1)將信號傳播到IκB激酶(IKKα/IKKβ)組成的NEMO(NF-κB基本調(diào)制器)，激活NF-κB并將其轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，啟動促炎細(xì)胞因子和其他基因轉(zhuǎn)錄參與免疫反應(yīng)[77]。當(dāng)單增李斯特菌成功在宿主細(xì)胞內(nèi)定殖時，InlC能夠大量表達(dá)，幫助逃逸宿主的先天性免疫[78]。IKKα是IκB激酶復(fù)合物的1個亞基，InlC可與IKKα相互作用使IκB磷酸化減弱并延遲其降解，從而削弱NF-κB移動至細(xì)胞核和抑制NF-κB調(diào)控基因的激活，因此宿主的先天性免疫反應(yīng)減弱[28](圖2)。InlC第224位的賴氨酸被泛素化修飾后，能夠與警報蛋白S100A9互作，S100A9蛋白是先天性免疫反應(yīng)和炎癥過程的關(guān)鍵蛋白。在小鼠試驗中，接種表達(dá)被泛素化修飾的InlC突變菌后中性粒細(xì)胞產(chǎn)生的活性氧增加，并限制李斯特菌感染，因此泛素化修飾的InlC和與S100A9蛋白的互作可使宿主免疫應(yīng)答能力增強(qiáng)[29]。

圖2 幾種內(nèi)化素蛋白的作用示意圖[75-77,82-83]

InlK和InlA一樣是擁有LPXTG結(jié)構(gòu)的表面蛋白，被StrA識別而固定在細(xì)胞壁上。在體外培養(yǎng)環(huán)境中InlK很少表達(dá)，但是當(dāng)單增李斯特菌在體內(nèi)環(huán)境時，InlK表達(dá)上調(diào)，并與穹窿蛋白MVP互作[21,79]。已知ActA能夠逃避自噬感染并臨近細(xì)胞[80]，InlK也能幫助單增李斯特菌逃避宿主自噬，但其方式和ActA不同，在一定程度上，2種逃避自噬的方法存在協(xié)同作用[21]。當(dāng)ActA和InlK在體內(nèi)同時表達(dá)時，雖然InlK先招募MVP于細(xì)菌表面，但是Actin會取代MVP并聚集在細(xì)胞表面，使李斯特菌發(fā)揮ActA介導(dǎo)的逃避自噬作用[80]。但是當(dāng)ActA蛋白缺失時，InlK和MVP互作，使MVP聚集在細(xì)菌表面，幫助細(xì)菌逃避自噬[22]。

InlH蛋白受到sigB調(diào)控，在外界應(yīng)激壓力作用下，InlH能在單增李斯特菌表面大量聚集[81]。InlH的失活會增加感染小鼠肝臟和脾臟中IL-6(白介素-6)的產(chǎn)生。但是在體外，InlH不調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞中IL-6的分泌。由此猜測InlH可能在其他分泌IL-6的免疫細(xì)胞中發(fā)揮作用，通過緩和炎癥反應(yīng)促進(jìn)病原體在組織中的生存[20]。

4.3 內(nèi)化素家族蛋白在細(xì)菌遷移中的作用單增李斯特菌通過InlA/B內(nèi)化作用進(jìn)入細(xì)胞，再以肌動蛋白為基礎(chǔ)在細(xì)胞和組織中傳播。InlC可以和哺乳動物接頭蛋白Tuba互作促進(jìn)單增李斯特菌在細(xì)胞間的感染[84]。Tuba是有多功能域的支架蛋白，能與其效應(yīng)因子N-WASP和CDC42形成張力復(fù)合體，InlC競爭性抑制N-WASP和Tuba的羧基末端Src同源性3(SH3)結(jié)構(gòu)域之間的相互作用，因此細(xì)胞連接處皮質(zhì)張力減弱，單增李斯特菌突起的形成能力加強(qiáng)從而促進(jìn)細(xì)菌在細(xì)胞間的傳播[85]。InlC還能和Exo70互作，介導(dǎo)Exo70在細(xì)菌突起中的聚集[41]。Exo70是宿主細(xì)胞外囊復(fù)合體的組成蛋白之一，外囊復(fù)合體能夠直接促進(jìn)突起的延長。Exo70能在野生單增李斯特菌突起中大量聚集，但是在inlC缺失菌株的突起中顯著減少，并使細(xì)菌細(xì)胞間感染能力下降[41]。

近年來發(fā)現(xiàn)InlP是胎盤感染的關(guān)鍵毒力因子。InlP能夠極大地促進(jìn)單增李斯特菌感染胎盤，在人原代胎盤器官培養(yǎng)環(huán)境和滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)inlP基因缺失菌株的生長能力減弱[31]。研究發(fā)現(xiàn)InlP能夠和afadin相互作用，afadin和能與InlC特異性互作的Tube蛋白都是細(xì)胞間連接相關(guān)蛋白，但是與InlC促進(jìn)單增李斯特菌在細(xì)胞間單層水平感染不同，InlP與afadin互作引起細(xì)菌在胎盤的垂直感染[30]。單增李斯特菌inlP缺失株不能使Actin聚集，在細(xì)胞膜上無法形成突起，因此不能感染臨近的細(xì)胞，類似的情況在單增李斯特菌缺失掉InlP的LRR5 結(jié)構(gòu)時可以觀察到，說明InlP的LRR5結(jié)構(gòu)為其與afadin相互作用的關(guān)鍵位點(diǎn)[30]。這種情況可能是InlP-afadin相互作用調(diào)節(jié)了宿主細(xì)胞基面組織的性質(zhì)，或者與基底膜相互作用，這種活性促進(jìn)了細(xì)菌在細(xì)胞基底膜形成以Actin為基礎(chǔ)的突起，并垂直感染胎盤組織[30]。

4.4 內(nèi)化素家族蛋白在生物被膜形成中的作用細(xì)菌生物被膜是由細(xì)菌微生物及其表達(dá)產(chǎn)物構(gòu)成的附著于物體表面的結(jié)構(gòu)，它能夠更好地幫助細(xì)菌抵御環(huán)境中溫度、pH值和鹽離子濃度等變化帶來的各種壓力[86]。例如，在生物被膜中的單增李斯特菌對消毒劑和食品防腐劑等的耐受能力顯著增強(qiáng)[87]。一些單增李斯特菌蛋白已被證實(shí)會對其生物被膜形成產(chǎn)生影響，如鞭毛蛋白、PrfA和InlA/B等部分內(nèi)化素家族蛋白[88-89]；單增李斯特菌中InlL和InlK蛋白不表達(dá)也會減弱其生物被膜的形成能力[23,90]。在生物被膜的形成過程中不同內(nèi)化素發(fā)揮不同功能，在生物被膜形成初始階段，InlA/B能夠幫助單增李斯特菌在物體表面的附著，從而促進(jìn)生物被膜形成[88]，而InlC在成熟的生物被膜中大量表達(dá)[91]。

4.5 內(nèi)化素家族蛋白在細(xì)菌運(yùn)動性中的作用單增李斯特菌的運(yùn)動性能促進(jìn)其對宿主細(xì)胞的侵襲[92]，并在小鼠模型中增加其毒力[93]。細(xì)菌的運(yùn)動性由菌體表面鞭毛提供，鞭毛是分布在菌體外表面的絲狀蛋白復(fù)合物，鞭毛蛋白結(jié)構(gòu)基因flaA的轉(zhuǎn)錄與鞭毛蛋白的存在直接相關(guān)[7,16,94]。在30℃培養(yǎng)的inlA缺失株入侵Caco-2細(xì)胞的能力比37℃時強(qiáng)，說明鞭毛蛋白在侵入宿主細(xì)胞時可能起到重要作用；并且inlA/flaA雙基因缺失株比inlA、flaA單基因缺失株在30和37℃時對Caco-2的侵襲能力減弱，說明 InlA和FlaA蛋白在單增李斯特菌侵襲作用中存在顯著的協(xié)同作用[95]。

5 展望

單增李斯特菌內(nèi)化素家族蛋白在單增李斯特菌致病性中發(fā)揮著重要的作用，但是除了InlA和InlB的致病機(jī)制已經(jīng)被詳盡報道外，其他內(nèi)化素家族蛋白成員在單增李斯特菌致病機(jī)制中的實(shí)際發(fā)揮出的作用仍遠(yuǎn)未被了解[71]。雖然內(nèi)化素的主要功能是在幫助單增李斯特菌感染宿主細(xì)胞的黏附侵襲過程中發(fā)揮作用，例如InlA和InlB；但是內(nèi)化素在其他功能方面也發(fā)揮著不同的作用，比如InlK，其和InlA兩者在結(jié)構(gòu)上同為含有 LPXTG基序的表面蛋白，但是在細(xì)菌的致病機(jī)制中發(fā)揮的功能大不相同，前者的主要作用是幫助細(xì)菌逃避自噬，而后者主要功能為黏附侵襲。因此，我們還需要對內(nèi)化素家族蛋白進(jìn)行更多的探索，以期進(jìn)一步了解內(nèi)化素在單增李斯特菌致病性中的作用。