龍昕雁，羅榮華，鄭永唐

(1.中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所, 中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物模型與人類疾病機(jī)理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650223；2.中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京 100049)

新型冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)是一種與SARS病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS-CoV)具較高同源性的冠狀病毒，其感染導(dǎo)致新型冠狀病毒肺炎(coronavirus disease-19, COVID-19 )。SARS-CoV-2是具有囊膜結(jié)構(gòu)且基因組為單股正鏈RNA的β屬冠狀病毒。該病毒具有4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白及多個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，結(jié)構(gòu)蛋白包括刺突蛋白(spike protein，S)、膜蛋白(membrane protein，M)、囊膜蛋白(envelope protein，E)、核衣殼蛋白(nucleocapsid protein，N)，非結(jié)構(gòu)蛋白包括主蛋白酶 main protease，Mpro)、木瓜樣蛋白酶(papain-like protease，PLpro)、RNA依賴的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA-polymerase，RdRp)等。當(dāng)前新冠疫情仍然嚴(yán)峻，截止2021年3月底，全球累計(jì)確診的SARS-CoV-2感染者超過(guò)1.2億，累計(jì)死亡人數(shù)超過(guò)270萬(wàn)[1]。

雖然多種新冠疫苗已被批準(zhǔn)上市，但抗病毒藥物治療仍是應(yīng)對(duì)新冠疫情的重要手段。當(dāng)前僅有瑞德西韋(remdesivir)獲得FDA批準(zhǔn)用于臨床治療，但瑞德西韋在臨床試驗(yàn)中并未對(duì)COVID-19取得顯著治療效果[2]，因此仍需開(kāi)發(fā)出有效的治療藥物。SARS-CoV-2進(jìn)入細(xì)胞是病毒生命周期中研究相對(duì)清楚的過(guò)程，這一過(guò)程中涉及的各種分子是重要的治療靶點(diǎn)。進(jìn)入抑制劑對(duì)COVID-19的治療和預(yù)防有重要作用，因此本文結(jié)合SARS-CoV-2進(jìn)入細(xì)胞的分子機(jī)制，對(duì)SARS-CoV-2進(jìn)入抑制劑的研究進(jìn)展進(jìn)行介紹。

1 SARS-CoV-2進(jìn)入細(xì)胞的分子機(jī)制

SARS-CoV-2使用其表面的刺突蛋白作為配體，與宿主細(xì)胞膜表面血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2 (angiotensin converting enzyme 2，ACE2)、硫酸乙酰肝素(heparan sulfate，HS)、神經(jīng)纖毛蛋白(neuropilin-1，NRP-1)、B族Ⅰ型清道夫受體(scavenger receptor class B type 1，SR-B1)、CD147、酪氨酸蛋白激酶受體UFO(tyrosine-protein kinase receptor UFO，AXL)等膜蛋白結(jié)合，并由弗林蛋白酶(furin)、跨膜絲氨酸蛋白酶2 (transmembrane serine protease 2，TMPRSS2)、組織蛋白酶B (Cathepsin B，CatB)、組織蛋白酶L (Cathepsin C，CatL)等蛋白酶對(duì)S蛋白進(jìn)行切割激活，進(jìn)而發(fā)生膜融合，使得SARS-CoV-2能夠進(jìn)入細(xì)胞(Fig 1)。

Fig 1 Replication cycle of SARS-CoV-2

1.1 刺突蛋白S蛋白由同源三聚體組成，其單體被分為S1亞基和S2亞基兩個(gè)部分。S1亞基包含N末端域(N-terminal domain，NTD)、受體結(jié)合域( receptor binding domain，RBD)、亞區(qū)域1 (subdomain 1，SD1)和亞區(qū)域2 (subdomain 2，SD2)。S2亞基包含融合肽(fusion peptide，F(xiàn)P)、七肽重復(fù)序列1 (heptad repeat 1，HR1)、七肽重復(fù)序列2 (heptad repeat 2，HR2)、跨膜結(jié)構(gòu)域( transmembrane region，TM)和胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域(intracellular domain，IC)。

與SARS-CoV類似，SARS-CoV-2以RBD作為與細(xì)胞膜上功能性受體ACE2結(jié)合的主要區(qū)域[3]。由于SARS-CoV-2與ACE2的接觸面積更大，在促進(jìn)蛋白間原子互作的同時(shí)保持了兩者結(jié)合的穩(wěn)定性，使得SARS-CoV-2與ACE2的結(jié)合親和力較SARS-CoV更高[3]。通常情況下，S蛋白的RBD隱藏在其內(nèi)部，當(dāng)S蛋白發(fā)生構(gòu)象改變使得RBD暴露在S蛋白表面時(shí)，S蛋白才能與ACE2結(jié)合[4]。

S蛋白結(jié)合受體后，S2亞基介導(dǎo)膜融合發(fā)生。由于S2亞基位于S蛋白的中部，在膜融合發(fā)生前需要宿主細(xì)胞內(nèi)TMPRSS2或CatB/L對(duì)S蛋白進(jìn)行切割釋放S2亞基[5]。隨后，S2亞基的HR1和HR2通過(guò)互相識(shí)別并形成六螺旋束，促使病毒囊膜與細(xì)胞膜或內(nèi)體膜緊密結(jié)合繼而發(fā)生膜融合。

1.2 細(xì)胞膜表面受體ACE2作為SARS-CoV-2的功能性受體通常保持二聚體形態(tài)，其與S蛋白的結(jié)合是一動(dòng)態(tài)過(guò)程。ACE2偏好與開(kāi)放構(gòu)象的S蛋白結(jié)合，同時(shí)ACE2與S蛋白的結(jié)合能促進(jìn)S蛋白形成更為開(kāi)放的構(gòu)象[6]。除ACE2外，另外一些分子也可能參與了SARS-CoV-2進(jìn)入細(xì)胞的過(guò)程。

有研究證明HS能與SARS-CoV-2 S蛋白的RBD結(jié)合并由此促進(jìn)S蛋白與ACE2的結(jié)合，進(jìn)而增加吸附于細(xì)胞表面的病毒數(shù)量，促進(jìn)病毒進(jìn)入細(xì)胞[7]。NRP-1能與S蛋白的S1亞基結(jié)合并增強(qiáng)病毒進(jìn)入細(xì)胞及感染細(xì)胞的能力，但僅當(dāng)ACE2存在時(shí)NRP-1才可促進(jìn)病毒進(jìn)入細(xì)胞[8]。SR-B1是在多種細(xì)胞上表達(dá)的高密度脂蛋白(high-density lipoprotein，HDL)受體，SARS-CoV-2 S蛋白能通過(guò)NTD與HDL結(jié)合，隨后借助HDL間接與SR-B1發(fā)生互作。但與NRP-1類似，SR-B1促進(jìn)SARS-CoV-2吸附并進(jìn)入細(xì)胞需要ACE2的幫助[9]。此外，AXL能與SARS-CoV-2的NTD結(jié)合而有效促進(jìn)病毒進(jìn)入細(xì)胞，這一受體在病毒進(jìn)入人肺上皮細(xì)胞時(shí)至關(guān)重要[10]。除上述分子外，Wang等[11]研究表明CD147是能與SARS-CoV-2 RBD區(qū)域結(jié)合的細(xì)胞表面蛋白，通過(guò)介導(dǎo)內(nèi)吞作用促進(jìn)病毒進(jìn)入細(xì)胞，可作為ACE2的替代受體有效促進(jìn)病毒感染 。

綜上，ACE2是SARS-CoV-2的功能性受體，HS、SR-B1、NRP-1等作為潛在輔助受體，其中HS促進(jìn)病毒吸附，NRP-1促進(jìn)病毒進(jìn)入細(xì)胞，SR-B1則起到雙重作用。此外，CD147、AXL則是除ACE2外病毒進(jìn)入細(xì)胞的膜表面蛋白。除上述受體外，SARS-CoV-2還能與細(xì)胞膜表面的許多分子進(jìn)行結(jié)合，其受體偏好性仍待進(jìn)一步探究。

1.3 輔助蛋白在SARS-CoV-2進(jìn)入細(xì)胞的過(guò)程中，宿主細(xì)胞蛋白酶對(duì)病毒的進(jìn)入起到重要作用。TMPRSS2通過(guò)切割S蛋白FP區(qū)域前S2’位點(diǎn)而促進(jìn)病毒囊膜與細(xì)胞膜的融合，TMPRSS家族的成員同時(shí)表達(dá)能促進(jìn)SARS-CoV-2的感染[5]。存在于次級(jí)內(nèi)體或溶酶體膜上的CatB和CatL在病毒進(jìn)入細(xì)胞時(shí)能對(duì)S蛋白進(jìn)行切割激活，使病毒顆粒釋放到細(xì)胞質(zhì)中，其中CatL對(duì)SARS-CoV-2的進(jìn)入起主要的作用[5]。弗林蛋白酶在細(xì)胞內(nèi)分布范圍廣，它通過(guò)切割S蛋白的S1/S2位點(diǎn)，使S蛋白呈現(xiàn)開(kāi)放構(gòu)象達(dá)到預(yù)激活S蛋白目的，促進(jìn)病毒與細(xì)胞結(jié)合并使得感染細(xì)胞形成合胞體[12]。除弗林蛋白酶外，胰蛋白酶也能夠有效切割S1/S2位點(diǎn)，但無(wú)胰蛋白酶存在時(shí)病毒仍能進(jìn)行膜融合步驟，因此，胰蛋白酶在病毒感染細(xì)胞中的作用有待明確。

2 靶向刺突蛋白(S)的抑制劑

2.1 蛋白多肽抑制劑當(dāng)前，靶向S蛋白的多肽抑制劑(Tab 1)主要可分為兩類，一類以RBD為靶點(diǎn)阻斷病毒與受體的結(jié)合，一類以HR1為靶點(diǎn)阻斷病毒的膜融合。

Tab 1 Peptidic inhibitors of spike protein

以RBD為靶點(diǎn)的多肽抑制劑包括兩類，一類基于ACE2設(shè)計(jì)，另一類則從頭合成。人源化可溶性ACE2 (human recombinant soluble ACE2，hrsACE2)通過(guò)重組表達(dá)ACE2蛋白獲得，最初主要用于降低血管緊張素2水平并減少急性肺損傷。將hrsACE2用于治療COVID-19時(shí)，hrsACE2有效降低了血漿中病毒載量及炎癥因子的水平，同時(shí)對(duì)肺等臟器起到了一定的保護(hù)作用，患者并未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，具有良好的臨床治療潛力[13]。由于ACE2肽酶區(qū)域的α螺旋是RBD結(jié)合的重要區(qū)域，根據(jù)這一序列合成的多肽能與RBD結(jié)合從而抑制病毒吸附與細(xì)胞表面?；谶@一原理，Zhang等[14]合成了與RBD具微摩爾親和力的多肽SBP1 。隨后，Cao等[15]以同一原理設(shè)計(jì)得到多肽AHB1和AHB2，對(duì)SARS-CoV-2表現(xiàn)出較好親和力，但Cao等[15]采用從頭合成的方法得到的多肽LCB1和LCB3能以更高的親和力結(jié)合病毒并抑制病毒進(jìn)入細(xì)胞。因此與基于ACE2序列開(kāi)發(fā)的多肽相比較而言，從頭合成的多肽抗病毒活性更佳，表明從頭合成的抑制多肽更具治療潛力。除從頭合成外，Zhao等[16]將抗病毒多肽P9R進(jìn)行交聯(lián)獲得的多肽8P9R與病毒的結(jié)合能力更強(qiáng)，其抗病毒活性更高。因此，將單個(gè)多肽交聯(lián)形成多聚體是多肽抑制劑改進(jìn)的有效方式。

阻斷病毒膜融合發(fā)生的進(jìn)入抑制多肽是對(duì)HR2的氨基酸序列進(jìn)行修飾后得到的。由于冠狀病毒的S2亞基高度保守，因此基于HCoV-OC43 HR2開(kāi)發(fā)的多肽抑制劑EK1能有效抑制SARS-CoV-2的感染[17]。隨后基于EK1修飾得到的HR2P[17]、EK1C4[18]則對(duì)病毒感染表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制作用，表明氨基酸修飾和脂類修飾是改善多肽進(jìn)入抑制劑抗病毒效果的有效方式。膽固醇修飾后的多肽IPB02具有比未修飾多肽IBP01更好的抗病毒效果，這可能是由于SARS-CoV-2的S蛋白除NTD外，其RBD區(qū)域或許也能與脂類結(jié)合，因此脂類修飾能夠提高肽段的抗病毒活性[19]。但這些肽類藥物的安全性如何仍需進(jìn)一步的驗(yàn)證。

2.2 小分子抑制劑用作抗凝劑的肝素( heparin ) (IC50=5.99 μmol·L-1)以及用于預(yù)防和治療靜脈血栓及肺栓塞的依諾肝素( enoxaparin ) (IC50=1.08 mmol·L-1)，能夠模仿SARS-CoV-2進(jìn)入細(xì)胞所需蛋白HS而與S蛋白R(shí)BD區(qū)域競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，抑制病毒與細(xì)胞膜表面受體結(jié)合。同時(shí)這兩種小分子化合物能與S2水解切割位點(diǎn)進(jìn)行互作，進(jìn)一步抑制S蛋白的膜融合步驟[7]。已證明使用肝素對(duì)COVID-19患者進(jìn)行治療能有效降低患者的死亡率，減少感染引起的血栓形成，但尚未有證據(jù)顯示肝素能直接對(duì)病毒起效而降低患者的死亡率[20]。此外，肝素及依諾肝素在治療過(guò)程中會(huì)提高患者出現(xiàn)大出血癥狀的概率，需要謹(jǐn)慎使用[20]。

3 靶向細(xì)胞受體的抑制劑

3.1 靶向ACE2的抑制劑作為SARS-CoV-2主要受體，靶向ACE2進(jìn)行SARS-CoV-2感染的治療是一個(gè)有效途徑。但ACE2表達(dá)在一定程度上使得人體組織器官免受炎癥損傷。因此，靶向ACE2進(jìn)行COVID-19治療仍需慎重考慮。

氯碘羥喹(clioquinol)被用于研究及治療前列腺癌和神經(jīng)退行性疾病，氯碘羥喹(EC50=12.62 μmol·L-1)及其類似物CLBQ14(EC50=14.69 μmol·L-1)、CLCQ(EC50=16.30 μmol·L-1)，能與S蛋白競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合ACE2從而有效抑制SARS-CoV-2對(duì)細(xì)胞的感染[21]，但這一化合物在體內(nèi)抗病毒效果如何尚待進(jìn)一步研究。達(dá)巴萬(wàn)星(dabavancin)是一種糖肽類抗生素，已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市用于治療革蘭氏陽(yáng)性菌導(dǎo)致的皮膚感染性疾病。我們的研究表明，達(dá)巴萬(wàn)星能直接與ACE2結(jié)合從而抑制病毒S蛋白與ACE2的互作。這一抗生素藥物在細(xì)胞水平(EC50=12 nmol·L-1)及兩種動(dòng)物模型中均具有良好的抑制病毒效果，且對(duì)肺等臟器發(fā)揮了保護(hù)作用，具有進(jìn)入臨床試驗(yàn)的良好潛力[22]。

3.2 其他除ACE2外，HS、NRP1、SR-B1、CD147和AXL是近期發(fā)現(xiàn)的SARS-CoV-2進(jìn)入細(xì)胞相關(guān)膜蛋白，由于這些蛋白與SARS-CoV-2的相互作用剛發(fā)現(xiàn)，尚未針對(duì)這些靶標(biāo)進(jìn)行專一性抗病毒藥物的研究。但已有研究顯示，以這些蛋白作為靶點(diǎn)可得到有效的病毒抑制劑。例如，抗腫瘤藥物米托蒽醌(mitoxantrone)能與HS結(jié)合并抑制HS依賴的內(nèi)吞作用，從而阻斷病毒進(jìn)入細(xì)胞[7]。但米托蒽醌使用后會(huì)引起消化系統(tǒng)不適、降低血小板和白細(xì)胞數(shù)量，且具有一定心臟毒性，在用于COVID-19臨床治療前需謹(jǐn)慎評(píng)估。

4 靶向SARS-CoV-2輔助蛋白的抑制劑

4.1 靶向TMPRSS2的抑制劑當(dāng)前，靶向TMPRSS2治療COVID-19的小分子化合物包括卡莫司他(camostat mesylate)和萘莫司他(nafamostat mesylate)。卡莫司他在日本被用于治療慢性胰腺炎及反流性食管炎，是跨膜絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑，已被證明能夠有效地抑制SARS-CoV-2的進(jìn)入[5]。萘莫司他在日本被用于治療急性胰腺炎和彌散性血管內(nèi)凝血，與卡莫司他類似，萘莫司他也通過(guò)結(jié)合TMPRSS2而抑制SARS-CoV-2進(jìn)入細(xì)胞。同等濃度下，萘莫司他的體外抗病毒效果比卡莫司他好[23]。將這兩種藥物用于治療COVID-19患者，會(huì)導(dǎo)致腦出血、過(guò)敏反應(yīng)、心臟驟停等[24]，因此將這兩種藥物用于COVID-19的治療尚需評(píng)估。

由于SARS-CoV-2可通過(guò)兩種不同途徑進(jìn)入細(xì)胞，因此，僅當(dāng)病毒是通過(guò)與細(xì)胞膜發(fā)生膜融合進(jìn)入細(xì)胞時(shí)，TMPRSS2抑制劑才能對(duì)病毒發(fā)揮有效的抑制作用。在以內(nèi)吞為病毒進(jìn)入途徑的Vero E6細(xì)胞中，TMPRSS2抑制劑無(wú)法抑制病毒感染細(xì)胞，但在以細(xì)胞膜膜融合為病毒進(jìn)入途徑的Calu-3、Caco2細(xì)胞中，TMPRSS2抑制劑對(duì)病毒具良好抑制效果[5]。因此，TMPRSS2抑制劑是否可作為有效的臨床藥物進(jìn)行廣泛應(yīng)用，尚待進(jìn)一步驗(yàn)證。

4.2 靶向CatB/L的抑制劑由于組織蛋白酶主要存在于內(nèi)體、溶酶體等細(xì)胞器中，因此組織蛋白酶抑制劑對(duì)病毒的抑制效果僅在病毒以內(nèi)吞為主要進(jìn)入途徑的細(xì)胞系中起效。阿洛司他丁(aloxistatin, E-64d)是一種已知的CatB/L抑制劑，在Vero E6細(xì)胞、HEK 293 / hACE2細(xì)胞中被證實(shí)能夠有效抑制SARS-CoV-2的進(jìn)入[5]。但這一化合物尚未進(jìn)入臨床試驗(yàn)，要將其應(yīng)用到COVID-19的治療中存在一定的困難。替考拉寧(teicoplanin) (EC50=1.66 μmol·L-1)主要被用于治療葡萄球菌感染，人體對(duì)該藥物的耐受性良好，使用后僅少數(shù)人群會(huì)出現(xiàn)過(guò)敏等不良反應(yīng)。替考拉寧能通過(guò)抑制CatL對(duì)內(nèi)體中病毒S蛋白的酶切激活而抑制病毒的膜融合過(guò)程，阻止SARS-CoV-2感染細(xì)胞[25]，但當(dāng)前尚未將替考拉寧應(yīng)用至COVID-19的臨床治療中。

CatB/L的酶活性受到內(nèi)體的PH值的影響，因此對(duì)內(nèi)體pH值有影響的化合物能在一定程度上對(duì)病毒感染起到抑制作用。阿比朵爾(arbidol)是一種抗流感病毒的藥物，已在體外證明其能有效阻止SARS-CoV-2進(jìn)入細(xì)胞并抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)(EC50=4.11 μmol·L-1)[16]。先前猜測(cè)阿比朵爾可能通過(guò)與SARS-CoV-2的S蛋白進(jìn)行結(jié)合而發(fā)揮活性，但最近的研究顯示，阿比朵爾主要通過(guò)改變內(nèi)體pH,調(diào)節(jié)CatB/L的酶活性而起效[16]。阿比朵爾在用于治療COVID-19是能顯著降低病毒載量，個(gè)別患者出現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)量激增，但經(jīng)治療后可恢復(fù)，未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)[26]。但阿比朵爾并未進(jìn)行大規(guī)模臨床試驗(yàn)評(píng)估，其療效尚待進(jìn)一步確定。氯喹和羥氯喹作為抗瘧疾藥物被廣泛使用，在新冠疫情爆發(fā)早期就已證實(shí)能有效抑制SARS-CoV-2感染細(xì)胞。早期猜測(cè)氯喹(chloroquine)和羥氯喹(hydroxychloroquine)能通過(guò)抑制ACE2糖基化或結(jié)合ACE2而起到抗病毒效果，但近期研究證實(shí)氯喹和羥氯喹主要通過(guò)抑制內(nèi)體酸化而抑制CatB/L的酶活性，進(jìn)而抑制病毒進(jìn)入細(xì)胞[16]。世界衛(wèi)生組織對(duì)氯喹及羥氯喹療效的臨床試驗(yàn)證明氯喹和羥氯喹并未能對(duì)COVID-19起到顯著的治療效果[2]，表明這一類抑制劑的抗病毒活性受到病毒進(jìn)入細(xì)胞方式的影響，在尚不清楚SARS-CoV-2感染人體細(xì)胞的具體進(jìn)入方式前，單獨(dú)使用這一類抑制劑并不能取得良好的治療效果。

4.3 靶向furin的抑制劑目前針對(duì)furin進(jìn)行的抗病毒藥物研究較少，但已證實(shí)弗林蛋白酶抑制劑CKM(decanoyl-RVKR-chloromethylketone，CMK ) (EC50=0.057 μmol·L-1)能夠有效抑制furin對(duì)S蛋白的酶切激活從而抑制病毒進(jìn)入，具有作為預(yù)防藥物的潛力[12]。此外，CKM能夠降低CPE，抑制具感染力的子代病毒的產(chǎn)生，具有一定的治療效果[12]。但弗林蛋白酶抑制劑D6R(hexa-D-arginine amide，D6R)及SSM3 (SSM 3 trifluoroacetate，SSM3)未能阻止S蛋白的酶切激活而對(duì)病毒無(wú)抑制效果，因此弗林蛋白酶在病毒進(jìn)入過(guò)程中所起的作用尚待進(jìn)一步明確，以furin為靶點(diǎn)的SARS-CoV-2進(jìn)入抑制劑仍需進(jìn)一步研究。

5 結(jié)語(yǔ)與展望

進(jìn)入細(xì)胞對(duì)病毒而言是極為重要一步，S蛋白作為病毒進(jìn)入細(xì)胞的重要元件，是極易突變的結(jié)構(gòu)蛋白。D614G突變株、A501Y突變株等均具有較原始病毒株更強(qiáng)的傳播能力與感染能力，現(xiàn)有疫苗對(duì)突變毒株的預(yù)防能力尚待評(píng)估，因此仍需加大對(duì)COVID-19藥物的研發(fā)力度。進(jìn)入抑制劑作為能起到治療和預(yù)防雙重作用的藥物，具有很高的開(kāi)發(fā)價(jià)值。當(dāng)前投入COVID-19臨床治療及試驗(yàn)中的多為已上市藥物或經(jīng)過(guò)臨床試驗(yàn)驗(yàn)證的藥物。雖然老藥新用是治療COVID-19的一個(gè)主要方式，但對(duì)天然化合物進(jìn)行篩選評(píng)估仍是開(kāi)發(fā)進(jìn)入抑制劑的有效方式。

當(dāng)前SARS-CoV-2進(jìn)入抑制劑的開(kāi)發(fā)還存在許多問(wèn)題。首先，處于臨床試驗(yàn)評(píng)估的進(jìn)入抑制劑中，hrsACE2價(jià)格較高，卡莫司他、萘莫司他及阿比朵爾的臨床相關(guān)實(shí)驗(yàn)尚未得到最終結(jié)果且均會(huì)導(dǎo)致不良反應(yīng)的出現(xiàn)，尚無(wú)法有效用于COVID-19的治療。其次，隨著研究的深入，SARS-CoV-2的其他受體也被進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，許多蛋白酶在病毒感染過(guò)程中的作用也被進(jìn)一步明確。同時(shí)由于病毒感染是多分子互作的過(guò)程，這一過(guò)程的復(fù)雜性使得針對(duì)單個(gè)靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)的抑制劑在臨床治療中不一定具有可靠療效，無(wú)法進(jìn)一步推廣。

因此，仍需加大對(duì)藥物開(kāi)發(fā)的力度，并在開(kāi)發(fā)過(guò)程中對(duì)藥物進(jìn)行多層次評(píng)估，從而為COVID-19的治療提供依據(jù)。同時(shí)，在治療中應(yīng)將不同靶點(diǎn)的藥物進(jìn)行聯(lián)用，以達(dá)到預(yù)期治療效果。