隋 明， 吳亞楠， 李俊儒， 張鳳英， 周 文，4， 王家瑞， 唐明妮

（1.四川工商職業(yè)技術學院，四川都江堰611830；2大慶市新科畜牧技術服務中心，黑龍江大慶163000；3.甘孜藏族自治區(qū)丹巴縣革什扎鎮(zhèn)鎮(zhèn)政府，四川丹巴626399；4.四川大學，四川成都610065）

在我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展過程中，存在著一些隱性疾病，如隱性乳房炎等，嚴重影響著奶牛產奶性能和乳品質（張江，2015）。益生菌作為一種活性微生物制劑，其是對動物機體有益的菌劑，動物食入后會在其腸道內定植，并與致病菌競爭黏附位點，在腸道內會形成維生素、有機酸及消化酶等多種活性物質，促進動物對營養(yǎng)物質的消化吸收，提高飼料轉化率，增強動物機體免疫力、抗應激能力等，從而提高養(yǎng)殖的經濟效益（劉政，2018；Prasad，2013）。目前應用較為廣泛的益生菌主要有芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌等（Giri，2014；Zhang，2014）。單一益生菌在反芻動物的養(yǎng)殖生產中已有一些研究報道，并取得一定進展（趙珺，2007），但對復合菌劑的研究甚少。因此，本文以荷斯坦奶牛為研究對象，在其基礎日糧中添加一定量的復合益生菌，探索其對荷斯坦奶生產性能、乳品質及腸道菌群的影響，以期為復合益生菌在奶牛養(yǎng)殖生產中的合理應用提供理論參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 本試驗用復合益生菌購自杭州利牧源科技有限公司，復合益生菌由乳酸菌、地衣芽孢桿菌和酵母菌組成，其中乳酸菌活菌數(shù)為8×109cfu/g，地衣芽孢桿菌活菌數(shù)為1×109cfu/g，酵母菌活菌數(shù)為3×109cfu/g。

1.2 試驗動物及試驗設計 按照年齡、胎次、體重、產奶量相近的原則，選用分娩后2～4月的健康奶牛120頭，隨機分成4組，每組30頭。分組后統(tǒng)計各組牛的體重和產奶量統(tǒng)計學不具有差異性（P＞0.05）。試驗1組（對照組）飼喂基礎日糧，試驗2、3、4組飼喂依次在基礎日糧中添加20、40、60 g/d的益生菌日糧，基礎日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。預試驗7 d，正式試驗60 d。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗在大慶市眾牧奶牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社進行。試驗開始前對所有試驗奶牛進行編號，使用伊維菌素對奶牛進行驅蟲，圈舍全方位消毒，按照常規(guī)飼養(yǎng)管理方法對奶牛進行飼養(yǎng)和管理，自由采食，自由飲水，定期進行日常免疫。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生產性能 每30 d測定每頭奶牛產奶量，取50 mL混合奶樣（早∶中∶晚=4:3:3）。

1.4.2 乳品質指標的測定 使用全自動乳成分分析儀測定乳脂率、乳蛋白率、乳總固體含量、乳糖含量等乳品質指標。

1.4.3 腸道菌群 在試驗結束前3天直腸收集新鮮糞樣約300 g，保存于-80℃，用于糞便菌群DNA的提取和后腸道菌群拷貝數(shù)的測定。OMEGA DNA提取試劑盒購自上海玉博生物科技有限公司。Real-time PCR SYB GreenⅠRT-PCR試劑盒購自寶生物（大連）有限公司。Real-time PCR擴增反應參數(shù)為：95℃、7 min，55℃、1 min，72℃、3 min，共35個循環(huán)；72℃延伸7 min。特異性引物序列由生工生物工程（上海）股份有限公司設計，具體信息見表2。將待測菌株乳酸桿菌、雙歧桿菌和大腸桿菌的標準菌株稀釋成不同濃度用于制作標準曲線。標準曲線通過菌的拷貝數(shù)和Ct值進行繪制。

表2 熒光定量PCR引物設計信息

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 試驗數(shù)據(jù)先使用Excel進行統(tǒng)計，之后采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，具有統(tǒng)計學意義后，用Duncan’s法進行組間的多重比較，試驗結果用“平均數(shù)±標準差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 益生菌對荷斯坦奶牛生產性能的影響

2.1.1 益生菌對荷斯坦奶牛產奶量的影響 在試驗開始第0、30、60天分別對產奶量稱重，結果見表3。隨著試驗天數(shù)的增加，各組產奶量逐漸增多。在試驗第30、60天及全程，試驗3組和試驗4組的產奶量顯著高于試驗1組，分別提高了12.39%、10.82%；14.79%、14.05%；8.74%、8.38%。試驗2組略高于試驗1組，但差異不顯著（P＞0.05）。

表3 益生菌對荷斯坦奶牛產奶量的影響kg/d

2.1.2 益生菌對荷斯坦奶牛干物質采食量的影響在試驗期第0、30、60天測定了奶牛干物質采食量，結果見表4，隨著試驗天數(shù)的增加，各組干物質采食量有增加的趨勢，但在每個時間點，各組的干物質采食量差異不顯著（P＞0.05），且益生菌組的采食量低于對照組，只有在試驗第60天時，試驗2組和3組的采食量高于試驗1組，但差異不顯著（P＞0.05）。

表4 益生菌對荷斯坦奶牛干物質采食量的影響kg/d

2.2 益生菌對荷斯坦奶牛乳品質的影響 在試驗結束后對采集的乳樣進行了乳品質等指標的檢測，具體檢測結果見表5。試驗3組和4組的乳脂率顯著高于試驗1組和2組（P＜0.05），分別提高了23.53%、21.89%；16.31%、14.77%。試驗3組的乳蛋白率顯著高于試驗1、2、4組（P＜0.05），分別提高了17.5%、10.26%、9.62%。試驗3組和4組的乳糖顯著高于試驗1組，分別提高了10.60%和8.52%；試驗2組略高于試驗1組，但差異不顯著（P＞0.05）。各試驗組的非脂乳固體、總固形物、體細胞數(shù)、乳尿素氮無顯著差異（P＞0.05）。

表5 益生菌對荷斯坦奶牛乳品質的影響

2.3 益生菌對荷斯坦奶牛腸道菌群的影響 益生菌對奶牛腸道菌群的影響見表6。試驗3組和4組的乳酸菌數(shù)量顯著高于試驗1組（P＜0.05），分別提高了70.00%和80.83%；試驗2組的乳酸菌略高于試驗1組，但差異不顯著（P＞0.05）。益生菌組的雙歧桿菌數(shù)量略高于試驗1組，但差異不顯著（P＞0.05）。益生菌組的大腸桿菌數(shù)量略低于試驗1組，但差異不顯著（P＞0.05）。

表6 益生菌對荷斯坦奶牛腸道菌群的影響

3 討論

3.1 益生菌對荷斯坦奶牛生產性能的影響 益生菌作為飼料添加劑應用于畜禽養(yǎng)殖生產中，不僅可以提高畜禽對營養(yǎng)物質的消化吸收率，提高動物生產性能，增加動物機體的抗病能力；而且可以改變動物腸道菌群結構，改善其腸道健康，減少有害氣體的排放，尤其是反芻動物產生的有害氣體（劉愛霞，2014）。復合益生菌中含有多種營養(yǎng)物質、促生長因子、消化酶、氨基酸等，為動物的生產需要提供了營養(yǎng)物質（曾光，2016；吳小燕，2016）。益生菌能夠提高反芻動物瘤胃微生物活力去降解瘤胃里的日糧，進而為奶牛的泌乳提供充足的代謝能和蛋白（劉程，2020）。廖智慧等（2020）報道，在奶牛日糧中添加40 g/d復合益生菌，顯著提高了奶牛的產奶量。夏天嬋等（2017）研究表明，在南方濕熱的夏季，飼料中添加一定量的益生菌可以減少奶牛熱應激，提高其泌乳中后期的產奶量。劉程等（2020）研究表明，在奶牛日糧中，添加由地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉組成的復合益生菌，對奶牛干物質采食量無顯著影響，但顯著提高了奶牛泌乳量。本試驗研究結果表明，在試驗第30、60天及全程，40 g/d和60 g/d益生菌組的產奶量顯著高于對照組，分別提高了12.39%、10.82%；14.79%、14.05%；8.74%、8.38%。本試驗結果與前人研究結論一致，說明在奶牛日糧中添加一定的復合益生菌有助于提高奶牛的產奶性能。

3.2 益生菌對荷斯坦奶牛乳品質的影響 本試驗研究結果表明，在奶牛日糧中添加一定量的益生菌可以顯著提高乳脂率、乳蛋白率和乳糖含量，對非脂乳固體、總固形物、體細胞數(shù)、乳尿素氮等含量無顯著影響。呂世民等（2016）研究表明，益生菌顯著提高了乳脂率，但未提高乳蛋白率。夏天嬋等（2017）研究表明，日糧中添加復合益生菌制劑后，乳蛋白率、乳糖率和總固形物含量顯著高于對照組，而乳脂率沒有顯著差異。本試驗研究結果與上述其他人的研究結果不完全一致，但有相似之處，可能與試驗所用的益生菌不同及試驗奶牛產奶階段不同有關。牛奶中的體細胞數(shù)量是否在正常值（2×105個/mL～3×105個/mL）范圍內可反映奶牛乳房是否健康，并能預測乳房炎的發(fā)病率，并且也與產奶量、乳品質及奶牛存放時間密切有關（王玲等，2015），本試驗中牛奶中的體細胞數(shù)量在正常值范圍內，說明益生菌對此指標未產生負面影響。

3.3 益生菌對荷斯坦奶牛腸道菌群的影響 動物的飲食和管理等因素能夠顯著地影響反芻瘤胃及腸道菌群的結構和活動。胃腸道菌群的破壞會影響動物的健康，并降低其生產性能。此外，奶牛的胃腸道菌群是否平衡還能影響奶牛新陳代謝、傳染、消化和生殖障礙等。奶牛瘤胃中高效的發(fā)酵系統(tǒng)主要功能是負責能量的轉換和積累（Itoii，2014）。對于奶牛來說，挑選適宜的益生菌可以改善瘤胃微生物對日糧中粗纖維的消化利用率。益生菌對不同的消化過程有不同的促進作用，尤其表現(xiàn)在纖維素的水解和微生物蛋白的合成等方面。奶牛日糧中通常使用酵母菌，能產生較好的效果。本試驗研究結果表明，在奶牛日糧中添加含有酵母菌的益生菌可以顯著提高奶牛腸道內乳酸菌的含量；有提高雙歧桿菌降低大腸桿菌數(shù)量的趨勢，說明在奶牛日糧中添加一定量益生菌改變了其腸道菌群結構，增加有益菌數(shù)量，降低有害菌數(shù)量，改善了腸道健康。李洋等（2017）在奶牛日糧中使用地頂孢霉培養(yǎng)物，顯著地提高了乳酸菌數(shù)量，與本試驗研究結果類似。

4 結論

在荷斯坦奶牛日糧中添加一定量的復合益生菌，可以提高產奶量，改善乳品質和腸道健康，改變腸道菌群數(shù)量。綜合本試驗研究結果，并考慮經濟成本，在奶牛日糧中添加40 g/d的益生菌效果較佳。