孫貴萍，馮樹(shù)慧，張衛(wèi)青，晏 晨

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550000；2.安順市人民醫(yī)院，貴州 安順 561000)

多穗金粟蘭屬于金粟蘭科(Chloranthus multistachys Pei)植物，民間又叫作四塊瓦，性味苦辛，微溫，有小毒；功效為活血散瘀、祛風(fēng)解毒；可用于治療跌打骨折、腰腿痛、疔腫、感冒、皮膚瘙癢等病癥[1-2]，具有很高的藥用價(jià)值。近年來(lái)，很多學(xué)者對(duì)該屬植物的化學(xué)成分以及藥理作用做了很多的研究[3-4]，據(jù)研究報(bào)道，該屬植物中分離得到的一些化合物可以作為K+離子和磷酸二酯酶-4的調(diào)節(jié)劑[5-6]、抗瘧疾[7]、抗乳腺癌活性[8]、抗炎活性[9]、抗真菌活性、HIV-1的抑制以及神經(jīng)保護(hù)[10]等方面的藥理作用。但有關(guān)金粟蘭屬植物中微量元素的研究較少，隨著野生中藥蘊(yùn)藏量不斷減少，種植品將成為藥材的主要來(lái)源，而且，種植的藥材必須考慮微量元素含量。微量元素的研究是現(xiàn)代中藥研究中的重要部分，是中藥歸經(jīng)以及藥性的物質(zhì)基礎(chǔ)，中草藥中微量元素的研究能夠從源頭上提高中藥質(zhì)量，對(duì)于道地藥材的形成、后期加工、功效確定、指導(dǎo)中藥最佳配伍等具有重大的意義[11]。此外，中醫(yī)中藥起效慢，有些藥需要長(zhǎng)期服用，如果中藥中含微量元素不達(dá)標(biāo)，長(zhǎng)期服用會(huì)中毒，所以，從源頭控制藥材中微量元素至關(guān)重要。本實(shí)驗(yàn)采用硝酸處理樣品多穗金粟蘭，經(jīng)微波消解定容后注入ICP-MS中，對(duì)凱里多穗金粟蘭中14種微量元素的含量進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器與材料

NexION2000電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(PerkinElmer)、ETHOS UP微波消解儀(北京萊伯泰科儀器股份有限公司)、電子分析天平(AY-120，島津公司)。娃哈哈純凈水(貴陽(yáng)娃哈哈飲料有限公司)、硝酸(優(yōu)級(jí)純，太倉(cāng)滬試劑有限公司)、15種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(CL3-19MKBY1,PerkinElmer)。實(shí)驗(yàn)所有藥材經(jīng)中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所劉海洋研究員鑒定為金粟蘭屬植物多穗金粟蘭。

2 方法及結(jié)果

2.1 樣品預(yù)處理 精密稱(chēng)取多穗金粟蘭的干燥全草藥材50目粉末約0.3 g，將稱(chēng)取的藥材粉末置于消解罐中，加入10 ml硝酸，將樣品密閉放置過(guò)夜，裝入微波消解儀中，按表1中設(shè)置的微波消解參數(shù)進(jìn)行消解，消解完成后將藥液濃縮至1～2 ml，轉(zhuǎn)移至50 ml容量瓶中，用水洗滌3次消解罐，同時(shí)將所有洗滌液轉(zhuǎn)移到容量瓶，定容即得到供試品溶液。

2.2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置 精密吸取各元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用1%的硝酸稀釋至每1 ml分別含0 μg、0.01 μg、0.02 μg、0.04 μg、0.08 μg、0.1 μg、0.2 μg的溶液，置于冰箱冷藏保存。

2.3 儀器工作參數(shù) 設(shè)定的儀器工作參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 ICP-MS工作參數(shù)

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 回歸方程及相關(guān)參數(shù) 在儀器設(shè)定的參數(shù)下對(duì)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，以溶液濃度(μg)為橫坐標(biāo)(x)，被測(cè)元素每一濃度測(cè)得的3次濃度與內(nèi)標(biāo)物讀數(shù)比值的平均值(CPS)值為縱坐標(biāo)(y)得出各元素的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。除不加樣品外，按照“2.1樣品預(yù)處理”進(jìn)行操作，制備空白溶液，連續(xù)測(cè)定11次，3倍響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差比上相應(yīng)元素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，所得到的斜率視為每個(gè)元素的檢出限[12-13]。得出每個(gè)元素的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及相關(guān)系數(shù)、檢出限等，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn) 取配置的混合標(biāo)準(zhǔn)品鉛(0.02 μg/ml)，在選定測(cè)試條件下平行測(cè)定(n=6)。每種元素含量都在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍，各元素的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)均小于4.0%，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知儀器精密度較好，達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 研究的藥材多穗金粟蘭樣品按“2.1樣品預(yù)處理”方法進(jìn)行操作，平行6份，測(cè)得每個(gè)元素的含量，并分別計(jì)算每個(gè)元素的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)。各元素重復(fù)性的RSD值均小于5.0%，符合痕量分析以及實(shí)驗(yàn)的要求，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 14種元素的測(cè)定結(jié)果

2.4.4 樣品含量測(cè)定結(jié)果及回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取供試品6份，稱(chēng)樣量每份約0.1 g，分別加混合對(duì)照品溶液，供試品溶液制備方法參照“2.1”，并將樣品溶液進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)測(cè)得多穗金粟蘭中微量元素含量較大的為Cu、Pb、Cr、Ni元素，Be、Mo、Ag、Sn、Sb、Tl等含量均低于1 mg/kg；14種元素的回收率范圍在84%～120%，符合痕量分析以及實(shí)驗(yàn)的要求。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 多穗金素蘭中微量元素含量測(cè)定結(jié)果及回收率

3 討論

本實(shí)驗(yàn)中多穗金粟蘭的樣品采用微波消解進(jìn)行處理，具有處理效果好以及樣品澄清等優(yōu)點(diǎn)。利用ICP-MS法對(duì)凱里多穗金粟蘭中重金屬及微量元素的含量進(jìn)行測(cè)定，此法具有較高靈敏度、檢出限高、分析速度快以及線(xiàn)性范圍寬等特點(diǎn)，且該法簡(jiǎn)便、可靠，可操作性強(qiáng)。

本實(shí)驗(yàn)可以大致了解凱里多穗金粟蘭中上述14種微量元素的含量，對(duì)于個(gè)別元素含量過(guò)高的原因是因?yàn)橥寥乐泻窟^(guò)高，還是藥材本身對(duì)這幾種元素吸收較強(qiáng)導(dǎo)致，具體原因還需要做進(jìn)一步研究。此外，多穗金粟蘭的不同藥用部位含重金屬的量還需要做進(jìn)一步研究。