翟夏音

腦梗死主要是由于供應(yīng)腦部血液的動(dòng)脈出現(xiàn)粥樣硬化和血栓形成，使管腔狹窄甚至閉塞，導(dǎo)致局灶性急性腦供血不足而發(fā)??；也有因異常物體(固體、液體、氣體)沿血液循環(huán)進(jìn)入腦動(dòng)脈或供應(yīng)腦血液循環(huán)的頸部動(dòng)脈，造成血流阻斷或血流量驟減而產(chǎn)生相應(yīng)支配區(qū)域腦組織軟化壞死。前者稱為動(dòng)脈硬化性血栓形成性腦梗死(atherothrombotic brain infarction，ABI)，占本病的40%～60%，后者稱為腦栓塞(cerebral embolism，CE)占本病的15%～20%。 對(duì)于急性腦梗死(ACI)患者認(rèn)知功能障礙的病情評(píng)估具有重要的意義，其能夠在疾病的診療及ACI患者隨訪方面發(fā)揮作用[1]。血清生物學(xué)指標(biāo)的研究，能夠在ACI的診療過(guò)程中發(fā)揮作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)上升，能夠通過(guò)提高損傷腦組織血流灌注水平，增加腦組織血氧含量，進(jìn)而促進(jìn)損傷神經(jīng)元細(xì)胞的修復(fù)和再生[2]；視錐蛋白樣蛋白-1(VILIP-1)的表達(dá)上升，能夠通過(guò)增加鈣超載，進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞的損傷[3]；可溶性CD40配體(sCD40L)的表達(dá)上升，能夠通過(guò)提高趨化因子或者補(bǔ)體成分C4的激活，最終提高其對(duì)于神經(jīng)元細(xì)胞的浸潤(rùn)程度[4]；β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)是神經(jīng)元細(xì)胞變性相關(guān)蛋白，其能夠通過(guò)反應(yīng)神經(jīng)元細(xì)胞的退行性病變，進(jìn)而參與到ACI的病情進(jìn)展過(guò)程[5]。為了揭示VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的表達(dá)與ACI患者的病情關(guān)系，為臨床ACI患者的診療提供參考，本次研究選取我院收治的110例ACI患者，探討了VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42表達(dá)及其與患者病情的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1月—2018年2月我院收治的ACI患者110例，依據(jù)MoCA量表評(píng)分分為認(rèn)知障礙組(<26分，54例)和認(rèn)知正常組(≥26分，56例)。選取60例同期住院的其他疾病患者作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)ACI患者均符合《實(shí)用神經(jīng)病學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；(2)腦梗死后24 h內(nèi)入院，在我院治療后出院；(3)起病至認(rèn)知功能評(píng)測(cè)時(shí)間間隔為3個(gè)月；(4)患者具備基本的聽(tīng)說(shuō)功能。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)高血壓腦出血患者；(2)急慢性感染；(3)顱內(nèi)腫瘤、顱腦外傷患者；(4)既往伴有精神疾病、認(rèn)知功能疾病。其中認(rèn)知障礙組，年齡52～77(64.6±8.4)歲；男32例，女22例；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)22.0±2.2 kg/m2。認(rèn)知正常組，年齡49～79(65.2±9.0)歲；男36例，女20例； BMI(22.2±2.1)kg/m2。對(duì)照組，年齡45～79(65.8±8.1)歲；男33例，女27例； BMI(22.4±2.6)kg/m2。

1.2 檢測(cè)方法 采集患者發(fā)病后3～7 d肘部靜脈血4 mL，一部分待血凝后采集上層清亮液體，放置冰箱-20 ℃保存。采用貝克曼庫(kù)爾特公司生產(chǎn)的DX800免疫發(fā)光儀器及配套試劑進(jìn)行VEGF檢測(cè)，室內(nèi)質(zhì)量控制符合標(biāo)準(zhǔn)；另一部分1 500 r/min離心15 min，收集上清液，在每個(gè)聚苯乙烯板中加入上述液體0.1 mL，4 ℃過(guò)夜孵育，加入磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次，每次3 min，在每個(gè)聚苯乙烯板孔中加入VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42抗體(1∶800 購(gòu)自南京伯斯金生物公司)，37 ℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次，每次3 min，每孔中加入TMB溶液底物0.1 mL,37 ℃ 20 min，加入2M硫酸0.05 mL終止反應(yīng)，采用DG5033A酶標(biāo)儀(南京華東電子科技公司)進(jìn)行OD值檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) (1)蒙特利爾認(rèn)知量表(MoCA)：評(píng)價(jià)ACI患者認(rèn)知功能，該量表主要包括執(zhí)行功能、注意與集中、語(yǔ)言、記憶、抽象思維、視結(jié)構(gòu)技能、計(jì)算機(jī)定向力等8個(gè)領(lǐng)域11個(gè)檢查項(xiàng)目，量表總分30分，MoCA≥26分為正常。 (2)血清分子水平：依照上述1.2檢測(cè)方法檢測(cè)所有研究對(duì)象的VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42水平。

2 結(jié)果

2.1 3組患者一般資料比較 3組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組患者一般資料比較

2.2 2組ACI患者入院時(shí)病情指標(biāo)比較 認(rèn)知障礙組患者入院時(shí)NIHSS評(píng)分高于認(rèn)知正常組，GCS評(píng)分低于認(rèn)知正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),2組患者腦梗死部位比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 2組ACI患者入院時(shí)病情指標(biāo)比較

2.3 3組患者血清VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42水平比較 認(rèn)知障礙組、認(rèn)知正常組、對(duì)照組3組的血清VILIP-1、sCD40L水平依次降低，Aβ1-42蛋白水平依次升高，且組間比較均差異顯著(P<0.05)；認(rèn)知功能障礙組血清VEGF水平低于認(rèn)知正常組，高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 3組患者血清VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42水平比較

2.4 ACI患者血清VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42蛋白水平與MoCA評(píng)分的相關(guān)性 ACI患者血清VILIP-1、sCD40L水平與MoCA呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)，Aβ1-42蛋白水平與MoCA評(píng)分呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05)，VEGF水平與MoCA無(wú)顯著的相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 相關(guān)性分析結(jié)果

2.5 多因素分析 以ACI患者是否發(fā)生認(rèn)知功能損害作為因變量，以單因素分析具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義指標(biāo)作為自變量，采用Logistic回顧分析矯正混雜因素，結(jié)果顯示NIHSS評(píng)分增高，VILIP1及sCD40L高水平，Aβ1-42蛋白表達(dá)降低是ACI患者并發(fā)認(rèn)知功能障礙的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 Logistic回歸分析

3 討論

腦血管的痙攣、動(dòng)脈粥樣硬化或血管微血栓形成，均能夠促進(jìn)ACI的發(fā)生[7]。流行病學(xué)調(diào)查表明，ACI發(fā)病率超過(guò)4.9%，臨床上ACI的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊咧職埪曙@著上升，并能夠增加患者并發(fā)認(rèn)知功能障礙風(fēng)險(xiǎn)[8]。長(zhǎng)期觀察發(fā)現(xiàn)，合并有認(rèn)知功能損害的ACI患者比例超過(guò)15%，同時(shí)隨著病程遷移、病程嚴(yán)重程度加劇，認(rèn)知功能損害程度可進(jìn)一步上升[9]。影像學(xué)檢查雖然能夠在ACI患者認(rèn)知功能損害評(píng)估過(guò)程中發(fā)揮作用，但影像學(xué)檢查費(fèi)用較高、檢查耗時(shí)較長(zhǎng)，同時(shí)影像學(xué)檢查不具有定量化指導(dǎo)意義。本文通過(guò)對(duì)ACI患者血清VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的表達(dá)分析，不僅揭示ACI患者的病情進(jìn)展機(jī)理，同時(shí)為臨床上ACI患者的認(rèn)知功能評(píng)估提供參考。

VEGF能夠通過(guò)促進(jìn)腦血管新生內(nèi)皮細(xì)胞形成，加劇腦組織的血流灌注水平。受體VEGFR1是為造血干細(xì)胞的招募和單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的遷移工作需要，受體VEGFR2調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能，VEGFR3調(diào)節(jié)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。VILIP-1是視錐細(xì)胞特有的一種鈣結(jié)合蛋白。雞的此類蛋白質(zhì)與牛的恢復(fù)蛋白類似，由191個(gè)氨基酸殘基組成，有3個(gè)鈣結(jié)合位點(diǎn)。視錐細(xì)胞是視細(xì)胞的重要部分。視細(xì)胞是視網(wǎng)膜的感光神經(jīng)元，分為視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞，均屬雙極神經(jīng)元，由樹(shù)突，胞體和軸突三部分構(gòu)成。樹(shù)突由較細(xì)的外節(jié)和稍膨大的內(nèi)節(jié)組成。VEGF表達(dá)上升，能夠提高損傷腦組織的修復(fù)能力，促進(jìn)損傷神經(jīng)元細(xì)胞膜完整性修復(fù)[10]；VILIP-1是視錐細(xì)胞相關(guān)因子，其主要參與神經(jīng)元細(xì)胞的鈣離子通道調(diào)控，并影響下游信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)。VILIP-1上升能夠反應(yīng)神經(jīng)纖維鞘膜完整性的破壞程度，神經(jīng)纖維的分解能夠顯著促進(jìn)胞漿內(nèi)VILIP-1釋放[11]；sCD40L是細(xì)胞粘附相關(guān)因子，其對(duì)于下游炎癥性因子的誘導(dǎo)，能夠加劇巨噬細(xì)胞募集，進(jìn)而促進(jìn)腦組織損害[12]；Aβ1-42是卷曲蛋白因子，其能夠通過(guò)誘導(dǎo)神經(jīng)纖維的變性和凋亡，促進(jìn)腦組織退行性改變[13]。有研究探討了VEGF表達(dá)與ACI的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)ACI患者VEGF表達(dá)明顯上升[14]，但對(duì)于VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的研究較少。

由于糖尿病、高血壓或者體重指數(shù)等指標(biāo)，能夠影響到ACI患者的病情，本次研究首先探討了3組患者的基礎(chǔ)性疾病，發(fā)現(xiàn)不同組患者的一般臨床資料并無(wú)明顯差異，排除了相關(guān)臨床資料對(duì)于ACI患者病情的影響，體現(xiàn)了本次研究的科學(xué)性。本研究重點(diǎn)探討了VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的表達(dá)與ACI患者認(rèn)知功能關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在認(rèn)知功能障礙的患者中，VILIP-1、sCD40L的表達(dá)明顯上升，而Aβ1-42的表達(dá)明顯下降，提示了相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)均能夠影響到ACI患者的病情進(jìn)展。分析其機(jī)制，可能由于VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的下列幾個(gè)方面改變有關(guān)[15-17]：(1)VILIP-1、sCD40L表達(dá)上升，能夠提高下游腫瘤壞死因子a的富集程度，加劇其對(duì)于神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu)的損害，導(dǎo)致神經(jīng)電沖動(dòng)完整性的破壞；(2)Aβ1-42的表達(dá)下降，主要與損傷的腦組織對(duì)于其清除能力的降低有關(guān)，而Aβ1-42的下降還能夠影響到卷曲蛋白的沉積，最終導(dǎo)致神經(jīng)元生理功能的障礙，促進(jìn)認(rèn)知功能損傷。陳健明等[18]研究發(fā)現(xiàn)，在ACI患者中，sCD40L的表達(dá)濃度顯著上升，其平均上升幅度超過(guò)30%，在合并有明顯的空間定向障礙或者言語(yǔ)功能障礙的患者中，sCD40L的表達(dá)濃度可進(jìn)一步上升。在認(rèn)知功能障礙患者中，VEGF的表達(dá)雖然比正常對(duì)照組有所上升，但相比認(rèn)知功能正常組，VEGF表達(dá)有所下降，提示了VEGF表達(dá)呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì)，這主要由于VEGF的半衰期較短、發(fā)病后不同病情階段檢測(cè)所得的VEGF濃度不同有關(guān)。MoCA量表是評(píng)估患者認(rèn)知功能的指標(biāo)，MoCA量表評(píng)分越高，患者的認(rèn)知功能越為理想[19]。本次研究中VILIP-1、sCD40L水平與MoCA呈正相關(guān)關(guān)系，Aβ1-42蛋白水平與MoCA評(píng)分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示了VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的表達(dá)與ACI患者的認(rèn)知功能密切相關(guān)。 VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42可能通過(guò)調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥介質(zhì)和補(bǔ)體系統(tǒng)在認(rèn)知障礙病程中發(fā)揮作用。

本研究由于總體樣本數(shù)量較低，對(duì)于入選患者梗死的部位及梗死灶體積沒(méi)有作對(duì)比分析，因此還存在一定不足，旨待對(duì)以上問(wèn)題進(jìn)一步的探討。

綜上所述，在ACI患者中，VILIP-1、sCD40L的表達(dá)明顯上升，而Aβ1-42的表達(dá)明顯下降，與認(rèn)知功能受損程度存在關(guān)聯(lián)性。