■胡 虹 權(quán)淑靜 谷立峰 向凌云 劉 麗 王秋菊 馮 菲 張秀江*

（1.河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司，河南鄭州450008；2.河南省工業(yè)酶工程技術(shù)研究中心，河南鄭州450008）

隨著人們生活水平的日益提高以及人們對食品 安全、健康、環(huán)保等問題的關(guān)注度的提高,抗生素的濫用、殘留和耐藥性等關(guān)乎安全的關(guān)鍵問題重視度也明顯提高。自從禁止在動物飼料中添加抗生素以來，研究人員開始探尋其他可以替代抗生素的技術(shù)和產(chǎn)品，使畜牧業(yè)的生產(chǎn)不受到影響。在整個養(yǎng)豬過程中難度最大且復(fù)雜的環(huán)節(jié)是仔豬生長階段，此階段抗生素的使用呈普遍現(xiàn)象，雖然在國家各種政策的大力影響下有所改觀,但形勢仍然嚴峻[1-4]。近年來,一些試驗研究發(fā)現(xiàn)，將飼料進行適當(dāng)?shù)奶幚砑凹庸?，可以在一定程度上降低仔豬對飼料及環(huán)境過敏的應(yīng)激反應(yīng)[5],進而減緩仔豬應(yīng)激綜合癥，所以研發(fā)應(yīng)用于仔豬的發(fā)酵飼料意義非凡。

發(fā)酵液體飼料（Fermented Liquid Feed, FLF）是一種環(huán)保、綠色的生物飼料，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于歐洲等地，它有著與抗生素相同的作用，已經(jīng)有試驗充分證明了FLF在仔豬上的優(yōu)勢。經(jīng)國內(nèi)外研究者發(fā)現(xiàn)，飼料原料經(jīng)過發(fā)酵后會有益生菌、酶、乳酸、代謝產(chǎn)物、維生素、蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物的產(chǎn)生，具有酸香氣味，適口性好，動物喜食，經(jīng)乳酸菌發(fā)酵的飼料，大部分抗?fàn)I養(yǎng)因子被消除，營養(yǎng)更加豐富，飼喂畜禽后可抑制腸道有害菌的生長，有效防止畜禽多種疾病的發(fā)生，維持動物腸道的菌群平衡進而改善動物生長性能的作用。在發(fā)酵過程中不添加抗生素，所以在動物體內(nèi)不會造成抗生素藥物的殘留，研發(fā)FLF對我國畜牧業(yè)的發(fā)展意義重大。

目前，國內(nèi)關(guān)于乳酸菌FLF在仔豬應(yīng)用效果的研究報道還少之甚少，本研究主要是利用乳酸菌發(fā)酵液體飼料為研究對象，探究將FLF應(yīng)用在仔豬階段飼喂后，仔豬的日采食量、日增重、料重比等生長性能改善情況，對腸道健康和對血液生化指標(biāo)是否有改善作用，為乳酸菌FLF在生豬無抗養(yǎng)殖應(yīng)用生產(chǎn)中替代抗生素提供試驗理論依據(jù)，為進一步研發(fā)安全、高效、環(huán)保的發(fā)酵飼料奠定了理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 試驗設(shè)計及基礎(chǔ)日糧

2019年5月5日～6月8日在信陽羅山縣鑫隆家庭農(nóng)場養(yǎng)豬場進行了應(yīng)用試驗，預(yù)試期5 d，試驗期30 d。選用體況良好的150頭約重20 kg的“杜×長×大”健康仔豬，按要求隨機分為3組，每組5個重復(fù)。Ι組飼喂基礎(chǔ)日糧作為對照試驗，試驗Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)飼料日糧添加5%金霉素的預(yù)混劑，試驗Ⅲ組飼喂乳酸菌FLF。平均每舍飼喂試驗豬10頭，每天定時對豬舍通風(fēng)換氣，溫度為15～20 ℃，日常定時打掃豬舍2次，其他日常管理按常規(guī)進行?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 發(fā)酵飼料

1.2.1 試驗菌種

植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）UR-3 是由河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司通過紫外誘變得來，現(xiàn)保存于中國微生物菌種保藏中心。

1.2.2 乳酸菌發(fā)酵液體飼料生產(chǎn)工藝

試驗過程中，河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司提供本研究所用的FLF，主要使用30 kg 桶裝式進行液體發(fā)酵，主要提供于養(yǎng)殖場和應(yīng)用試驗的研究。發(fā)酵過程中所用的桶自帶排氣閥，密封性好,可保質(zhì)一個月。乳酸菌FLF 是將基礎(chǔ)日糧中的玉米∶豆粕和麩皮∶水都按1∶2的比例放入發(fā)酵桶中進行發(fā)酵，每桶總質(zhì)量30 kg，接入UR-3種子液1 800 ml，常溫發(fā)酵48～72 h，飼喂前每桶按基礎(chǔ)日糧配方干物質(zhì)的量添加4%的仔豬預(yù)混料，最后制成Ⅲ組的飼喂日糧。發(fā)酵前后，乳酸菌發(fā)酵液體飼料營養(yǎng)成分變化顯著，粗蛋白、生物量和乳酸含量都顯著高于尚未發(fā)酵的發(fā)酵液體飼料，具體營養(yǎng)成分價值分析參照參考文獻[6]，此乳酸菌FLF 的pH 值≤4.0，且有濃郁的酸香味時即可飼喂[7]。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 生長性能的測定

分別在試驗階段的第0 d和第30 d的清晨，將試驗仔豬逐頭空腹稱重，以每重復(fù)組為單位，記錄體重，計算飼喂期間仔豬的平均日增重（ADG）。

每天記錄每個豬圈的投料量和飼喂結(jié)束的剩余量得到總的采食量，計算試驗期間仔豬的平均日采食量（ADFI）和料重比(F/G)。

1.4 糞樣菌群

1.4.1 樣品采集

在試驗進行的第20 d 和第30 d 清晨，每個重復(fù)隨機選2 頭健康仔豬，采集其新鮮無污染微生物糞便，放冰箱-20 ℃待測。

1.4.2 糞樣的稀釋

在無菌條件下，稱取1 g 糞樣放入加有9 ml 磷酸鹽緩沖液的試管內(nèi)，放玻璃珠進行震蕩使糞便均質(zhì)化，振蕩器中振蕩5 min后制成10-1稀釋液，隨后將此稀釋液加入放有9 ml 無菌磷酸鹽緩沖液的試管中制成10-2稀釋液，再次在振蕩器中振蕩5 min，依此分別進行10-3～10-6倍的稀釋液的制備。

1.4.3 培養(yǎng)及菌落計數(shù)

大腸桿菌：在EMB 固體培養(yǎng)基上接入糞樣稀釋液，37 ℃、24 h培養(yǎng)后分別進行生理生化鑒定和平板計數(shù)。

沙門氏菌：在SS固體培養(yǎng)基上接入糞樣稀釋液，37 ℃、24 h有氧培養(yǎng)后進行平板計數(shù)。

乳酸菌：在MRS固體培養(yǎng)基上接入糞樣稀釋液，37 ℃、48 h厭氧培養(yǎng)后進行平板計數(shù)。

1.5 發(fā)病率

對仔豬的每日采食量、糞便質(zhì)量、發(fā)病數(shù)量、死亡量、腹瀉情況、精神狀況和仔豬肛門污染狀況等進行密切觀察和記錄，包括仔豬出現(xiàn)感冒、發(fā)熱、關(guān)節(jié)腫痛、咳嗽、皮膚出現(xiàn)異常等常見病也要記錄在案。

1.6 血液生化指標(biāo)

1.6.1 血清的制備

試驗完成的倒數(shù)第二天，將試驗仔豬禁飼12 h，這期間自由飲水。隨機選1頭健康接近平均體重的仔豬，頸靜脈采血，常溫靜置15 min后進行血清的分離，用離心機4 000 r/min離心5 min，保存于-20 ℃冰箱。

1.6.2 血液生化指標(biāo)測定

先解凍血清，再采用血液生化分析儀測定血清中的總膽固醇、三酰甘油、總蛋白、葡萄糖的等指標(biāo)含量；用免疫透射比濁法測定血清中免疫球蛋白A 、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M的指標(biāo)含量[6]。

1.7 數(shù)據(jù)處理

用DPS軟件進行數(shù)據(jù)方差分析。

2 結(jié)果

2.1 乳酸菌FLF對仔豬生長性能的影響（見表2）

表2 乳酸菌FLF對仔豬生長性能的影響

由表2 可知，各組仔豬初始體重差異不顯著；但在試驗結(jié)束時，與對照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組的末重明顯增加，分別提高了7.95%(P＜0.05)和8.17%(P＜0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）；與對照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組的平均日增重分別提高了14.88%(P＜0.05)和16.12%(P＜0.05),Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）；與對照組相比,Ⅱ組和Ⅲ組的平均日采食量分別提高了4.82%(P＜0.05)和8.91%(P＜0.05)；Ⅱ組和Ⅲ組的料肉比與對照組相比都有不同程度的降低，分別降低了8.76%(P＜0.05)和6.20%(P＜0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 乳酸菌FLF對仔豬糞樣菌群的影響（見表3）

表3 乳酸菌FLF對仔豬糞樣菌群的影響（log10 CFU/g）

從表3 可知，與對照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組糞樣中大腸桿菌的數(shù)量分別降低了45.10%(P＜0.05)和46.46%(P＜0.05)；沙門氏菌的數(shù)量分別降低了78.57%(P＜0.05)和84.87%(P＜0.05)；Ⅲ組的乳酸菌的數(shù)量顯著提高(P＜0.05)。

2.3 乳酸菌FLF對仔豬發(fā)病率的影響（見表4）

表4 乳酸菌FLF對仔豬發(fā)病率的影響(%)

如表4所示，試驗過程中無試驗豬死亡。與對照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組的發(fā)病率分別顯著降低了68.36%(P＜0.05)和71.35(P＜0.05)，Ⅱ組與Ⅲ組之間的差異顯著(P＜0.05)。

2.4 乳酸菌FLF對仔豬血液生化指標(biāo)的影響(見表5)

表5 乳酸菌FLF對仔豬血液生化指標(biāo)的影響

由表5的血液生化指標(biāo)可以得出，三組試驗血樣中總膽固醇、三酰甘油和免疫球蛋白M含量差異不顯著(P＞0.05)。與對照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組血樣中總蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G 指標(biāo)明顯提高，差異顯著(P＜0.05)，且Ⅱ組與Ⅲ組間差異顯著(P＜0.05)。與對照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組血樣中尿素氮含量明顯降低，差異顯著(P＜0.05)，而且Ⅱ組與Ⅲ組間差異顯著(P＜0.05)；Ⅱ組和Ⅲ組血樣中葡萄糖含量明顯提高，差異顯著(P＜0.05)，且Ⅱ組與Ⅲ組間差異顯著(P＜0.05)。

3 討論

從試驗測定的仔豬生長性能一系列指標(biāo)如：平均日增重、平均日采食量、料重比以及發(fā)病率等來看，試驗Ⅲ組乳酸菌FLF的試驗效果最好，不但提高了仔豬平均日增重和平均日采食量，而且明顯降低了料肉比和發(fā)病率。把固體飼料制成液體飼料，可以分解、軟化固體飼料，減少了仔豬胃腸道刺激，這樣可以使仔豬對飼料原料中營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收速度加快，進一步提高了仔豬的采食量[8-9]。

由于仔豬的食物由母乳轉(zhuǎn)為固態(tài)所造成的一系列應(yīng)激反應(yīng)，當(dāng)飼喂仔豬液體飼糧后，可以有效降低并防止仔豬機能的紊亂，并保護了仔豬的胃腸道，降低腹瀉率[10-11]，還能降低固體飼料粉末刺激仔豬呼吸道的幾率，從而降低動物的呼吸道發(fā)病率，進而提高成活率[12-13]。但液體飼料也存在一些弊端，如液體飼料增加了環(huán)境濕度，豬場的衛(wèi)生環(huán)境難度加大；另外料槽內(nèi)余下的液態(tài)飼料易霉變，極易發(fā)生仔豬中毒或感染腹瀉，所以勤清掃飼槽是十分有必要的[14]。

FLF作為新型的綠色飼料，比固體飼料或一般的液體飼料更具明顯的優(yōu)勢，雖然益生菌FLF還存在著質(zhì)量不穩(wěn)定，使用范圍小，使用效果不均一等方面的問題，而且當(dāng)前FLF 尚處在初期探索研究階段，也僅僅局限于斷奶仔豬應(yīng)用階段，但我們有理由相信，隨著FLF 加工設(shè)備的不斷發(fā)展，生產(chǎn)技術(shù)的不斷完善，只要解決了加工控制、菌種選擇和飼喂系統(tǒng)等問題，F(xiàn)LF 必將是理想的抗生素促生長因子替代品[15]。FLF的普及應(yīng)用會進一步快速提高畜牧業(yè)的生產(chǎn)水平，為綠色畜產(chǎn)品的生產(chǎn)提供有力的支持。

綜上，本試驗結(jié)果可能與FLF產(chǎn)生作用效果的機理有關(guān)：經(jīng)乳酸菌發(fā)酵的飼料，營養(yǎng)更豐富，含有豐富的乳酸菌及其代謝產(chǎn)物、乳酸菌素、小肽和維生素等，呈酸性，具有酸香氣味，適口性好，動物喜食，提高了動物的日采食量和日增重，從而提高仔豬的生長性能；飼喂畜禽后可抑制腸道有害菌的生長，乳酸菌數(shù)量大量增加，可以在動物腸道內(nèi)大量定植，有效調(diào)整腸道菌群平衡，可分泌乳酸，并產(chǎn)生多種消化酶，幫助食物消化和代謝，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用，進一步增強了動物機體的免疫力，而且改善了仔豬的腸道健康并預(yù)防動物的腹瀉。

4 結(jié)論

本試驗表明，與對照相比飼喂乳酸菌FLF的仔豬的末重提高了8.17%，平均日增重提高了16.12%，平均日采食量提高了8.91%，料肉比降低了6.20%，同時也可以降低仔豬發(fā)病率,提高仔豬血液中總蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G、葡萄糖的含量，降低血液中尿素氮的含量。可見，F(xiàn)LF不僅可以使仔豬的應(yīng)激反應(yīng)減少、采食量增加，而且可以提高仔豬的生長速度和成活率，進而降低養(yǎng)殖成本。因此，F(xiàn)LF作為一種高效、綠色、生態(tài)和安全的飼料具有在各類養(yǎng)豬場推廣應(yīng)用的潛力。