劉 繼，童輝純，彭建明，袁春雷，葉貴誠，官燕飛

中山市博愛醫(yī)院檢驗科，廣東中山 528400

鐵蛋白(FER)是一種相對分子質量約為450×103的含鐵蛋白質，具有強大的鐵結合和儲備能力，是人體內除血紅蛋白外含鐵最豐富的蛋白質[1]，主要分布于骨髓、肝、脾內。FER在鐵缺乏疾病中降低，是診斷缺鐵性貧血最可靠和最敏感的指標[2]，特別是可極早診斷體內鐵缺乏[3]。FER在鐵超負荷疾病、炎癥、肝臟疾病及惡性腫瘤時可以顯著升高[4]，被廣泛應用于腫瘤的篩查和輔助診斷。本文對免疫透射比濁法檢測FER進行方法學評價驗證，判斷其是否能滿足臨床檢測需求。

1 材料與方法

1.1試劑與儀器 免疫透射比濁法檢測FER試劑盒、校準物、質控物均由重慶中元生物技術股份有限公司提供，儀器為美國貝克曼庫爾特AU5800型自動生化分析儀。比對系統(tǒng)為羅氏Cobas E601全自動化學發(fā)光分析儀分析系統(tǒng)及配套FER試劑盒。

1.2免疫透射比濁法檢測血清FER性能評價

1.2.2線性范圍 參考CLSI EP6-A文件，取FER水平接近10 ng/mL及1 000 ng/mL血清標本各1份，按4L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、4H的關系配制，形成系列水平梯度。將每個標本重復檢測3次，計算平均值作為實測水平(Y)，理論水平(X)與實測水平(Y)采用線性回歸進行線性評價，并計算出回歸方程及相關系數(shù)r2。

1.2.6參考范圍驗證 參照美國臨床實驗室標準化委員會C28-A2文件，選擇在本院體檢中心體檢的健康體檢者血清標本40份(男女各20例，年齡16～65歲)作為參考人群，將測定結果進行統(tǒng)計并對試劑說明書提供的參考區(qū)間進行驗證。如果參考人群的FER檢測值不超過4個落在廠家申明的參考區(qū)間外，則驗證通過。

1.3統(tǒng)計學處理 利用SPSS20.0 統(tǒng)計軟件和Microsoft Excel 2013軟件進行數(shù)據(jù)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1精密度試驗結果 免疫透射比濁法測定FER低值、中值、高值批內CV分別為3.48%、0.97%、2.09%，批間CV分別為4.43%、2.88%、2.10%，均符合試劑廠家標明的精密度要求，見表1。

表1 FER批內及批間精密度

2.2線性試驗結果 將FER理論值作為橫坐標(X)，測量值為縱坐標(Y)進行線性回歸分析。結果顯示免疫透射比濁法檢測FER在10～1 000 ng/mL，線性良好，回歸方程Y=1.008 4X-1.679 7，r2=0.999 4，符合廠家要求，見圖1。

圖1 FER線性測定

2.3比對試驗結果 免疫透射比濁法測定FER結果與電化學發(fā)光法檢測結果相關性良好。線性回歸方程Y=0.980 7X+1.391 3，線性回歸系數(shù)r2=0.998 1。兩個檢測系統(tǒng)測定結果均值差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見圖2。

圖2 FER比對試驗

2.4回收試驗結果 回收率為96.02%～102.74%，平均回收率為99.94%，符合試驗要求，見表2。

表2 免疫透射比濁法對不同水平FER樣品的回收試驗結果

2.5干擾試驗結果 由表3可見，當標本中BIL≤498.40 μmol/L、TG≤9.90 mmol/L、Hb≤500 mg/dL時,對免疫透射比濁法無干擾。

表3 免疫透射比濁法對不同水平干擾物的回收試驗結果

2.6參考范圍驗證結果 經(jīng)驗證FER水平有38個在試劑說明書提供的參考區(qū)間范圍，有2個超出所驗證的參考區(qū)間，參考區(qū)間通過驗證。

3 討 論

血清FER與骨髓鐵染色結果相關性良好[5-7]，一般認為血清FER<15 ng/mL即可診斷為鐵缺乏[8]，是反映體內鐵貯存量最有價值的參數(shù)。肝臟作為合成和儲存FER的主要場所，F(xiàn)ER水平與肝細胞受損程度呈正相關[9]，故而FER可以作為診斷肝癌等肝臟疾病比較靈敏的指標[10]。除此之外，血清FER在肺癌、乳腺癌、卵巢癌、惡性血液病患者中也明顯增高[11-13]。

目前臨床實驗室測定FER的方法主要有化學發(fā)光法、放射免疫法等，前者檢測的靈敏度高，反應時間短，線性范圍廣，但需要特定配套的化學發(fā)光儀和試劑盒，測定的成本較高,這也限制了其在基層單位的應用；后者加樣、離心全部是手工操作，步驟較復雜，帶來誤差的環(huán)節(jié)較多，而且存在同位素的半衰期短、放射性的危害等缺點。

根據(jù)ISO15189對實驗室質量的要求，實驗室必須對檢測系統(tǒng)進行驗證。本文主要是對重慶中元生物技術股份有限公司生產(chǎn)的膠乳增強免疫透射比濁法FER檢測試劑盒進行性能評價。在美國貝克曼庫爾特AU5800型自動生化分析儀上，參照CLSI系列文件，結果顯示，膠乳增強免疫透射比濁法檢測FER批內和批間CV均小于5%，說明此試劑盒重復性較好，符合廠家聲明的精密度的要求；在10～1 000 ng/mL線性良好(r2=0.999 4)，能較好滿足臨床需求；比對試驗顯示，免疫透射比濁法與化學發(fā)光法相比較二者相關性好(r2=0.998 1)；96.02%～102.74%的回收率提示免疫透射比濁法具有較高的準確性；當標本中BIL≤498.40 μmol/L、TG≤9.90 mmol/L、Hb≤500 mg/dL時，對免疫透射比濁法無干擾。

綜上所述，免疫透射比濁法可應用于全自動生化分析儀檢測FER，隨機誤差小、重復性好、線性范圍廣、抗干擾能力強，能滿足臨床需求；與化學發(fā)光法比較，結果準確，費用相對較低，能減輕患者負擔，廣泛適用于臨床。