李崗 鄧宇亭 陳冬梅

【摘要】 目的：研究PM2.5和AngⅡ的共同干預(yù)下，人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡率及可能的凋亡機(jī)制。方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株，分別以不同濃度PM2.5、AngⅡ、PM2.5+AngⅡ處理24、48 h，CCK-8法檢測細(xì)胞活性，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率，Western blot法檢測凋亡相關(guān)蛋白p-AKT的表達(dá)變化。結(jié)果：48 h CCK-8結(jié)果顯示，PM2.5在100.00、200.00、800.00 μg/mL時、AngⅡ在20.00 μmol/L時與對應(yīng)組別的PM2.5+AngⅡ組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步的流式結(jié)果顯示，48 h時PM2.5+AngⅡ組凋亡率與單PM2.5或AngⅡ處理比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01，P<0.001）。Western Blot結(jié)果顯示，PM2.5+AngⅡ處理比單PM2.5或單AngⅡ處理后P-AKT的表達(dá)量下調(diào)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.005）。結(jié)論：本研究表明體外實(shí)驗(yàn)中，PM2.5對AngⅡ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡具有促進(jìn)作用，并可能通過PI3K/Akt/eNOS信號通路來實(shí)現(xiàn)。

【關(guān)鍵詞】 細(xì)顆粒物 AngⅡ P-AKT 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 凋亡

Effect of PM2.5 on Apoptosis of Human Umbilical Vein Endothelial Cells Induced by AngⅡ/LI Gang， DENG Yuting， CHEN Dongmei. //Medical Innovation of China， 2020， 17（04）： 00-006

[Abstract] Objective： To study the apoptosis rate and possible apoptosis mechanism of Human Umbilical Vein Endothelial Cells （HUVEC） under the co-intervention of PM2.5 and AngⅡ. Method： HUVEC were treated with different concentrations of PM2.5， AngⅡand PM2.5 + AngⅡ for 24 and 48 h. The cell activity was detected by CCK-8 assay and the apoptosis rate was detected by flow cytometry （FCM）. The expression of apoptosis-related protein p-AKT was detected by Western blot. Result： The results of CCK-8 showed that there were significant differences between PM2.5 at 100.00， 200.00， 800.00 μg/mL and AngⅡ at 20.00 μmol/L and PM2.5 + AngⅡ （P<0.05）. The further results of FCM showed that there were differences significantly between PM2.5 with AngⅡ and single PM2.5 or single AngⅡ treatment group in the apoptosis rate （P<0.01， P<0.001）. The results of Western Blot showed that the expression of p-AKT in PM2.5 with AngⅡ treatment group was significantly lower than that in single PM2.5 or single AngⅡ treatment group （P<0.005）. Conclusion： This study shows that in vitro experiments， PM2.5 can promote the apoptosis effect of AngⅡ to HUVEC. It may be achieved through PI3K/Akt/eNOS signaling pathway.

[Key words] PM2.5 AngⅡ P-AKT Human umbilical vein endothelial cells Apoptosis

First-authors address： School of Basic Medicine， Shenyang Medical College， Shenyang 110034， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.04.001

近些年，隨著我國城市化進(jìn)程的加快，大氣污染備受關(guān)注。其中，顆粒物對人體健康有著嚴(yán)重的危害性[1]。根據(jù)粒徑大小，大氣顆粒物被分成總懸浮顆粒物（total suspended particles，TSP）、可吸入顆粒物（inhalable particles，PM10）、細(xì)顆粒物（fine partieles，PM2.5）和超細(xì)顆粒物（ultrafine particles，UFP）四類。其中PM 2.5粒直徑小、表面積大，吸附的重金屬和有毒物質(zhì)較多，在大氣中停留時間長、輸送距離遠(yuǎn)，且可直接到達(dá)終末肺泡，在呼吸系統(tǒng)中易于溶解吸收，對人體健康危害最為嚴(yán)重。大量流行病學(xué)研究表明PM2.5能增加人體呼吸和心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生率，有調(diào)查顯示霧霾天醫(yī)院住院人數(shù)明顯增加，其中主要是以呼吸和心血管系統(tǒng)疾病患者常見[2-3]。血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷可引起心血管疾病的發(fā)生，這是心血管疾病的一個重要病因[4-5]。而血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的一個重要因素就是血管組織局部RAS系統(tǒng)激活，AngⅡ（血管緊張素Ⅱ）作為該系統(tǒng)的活性肽，當(dāng)其與受體AT1R結(jié)合后對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能及結(jié)構(gòu)發(fā)揮損害作用。文獻(xiàn)[6]表明AngⅡ可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，同時也有研究表明暴露于PM2.5中，內(nèi)皮細(xì)胞的AngⅡ濃度能夠增加[7]。但并未見PM2.5對AngⅡ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡作用的相關(guān)文獻(xiàn)報道，因此通過本實(shí)驗(yàn)來探究大氣污染物PM2.5與AngⅡ及血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的相關(guān)性，為進(jìn)一步探究大氣污染對心血管疾病的發(fā)生機(jī)制提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 低溫高速離心機(jī)（eppendorf，Centrifuge 5804 R），CO2培養(yǎng)箱，顯微鏡（OLYMPUS，CKX310），酶標(biāo)儀（TECAN，infinite M200 PRO）;流式細(xì)胞儀，蛋白電泳儀（BIO-RAD，Mini-PROTEAN Tetra System），電轉(zhuǎn)儀和曝光機(jī)。

1.2 主要試劑 DMEM完全高糖培養(yǎng)液（江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司），TBD胰蛋白酶（Solarbio），細(xì)胞活力檢測試劑盒（CCK-8）（Eno Gene Cell TM CountingKit-8），Annexin V-FITC/PI凋亡試劑盒（Solarbio），RIPA組織/細(xì)胞裂解液（Solarbio），BCA蛋白濃度試劑盒（Solarbio），彩虹180廣譜蛋白Marker（Solarbio），SDS-PAGE凝膠制備試劑盒（Solarbio），ECL Plus熒光檢測試劑（Solarbio），抗P-AKT抗體（EnoGene，E1A0016），HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG（EnoGene）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 PM2.5的制備 在遼寧省沈陽市交通要道（周圍無明顯污染源）使用120F型大流量粉塵采樣器（采樣流量：1 000 L/min）進(jìn)行大氣PM2.5采樣，采樣時間選擇冬季采暖季節(jié)，每天連續(xù)采集24 h，含塵濾膜于-20 ℃短期保存。采集所用濾膜為恒重的玻璃纖維濾紙，將采有PM2.5的濾膜裁剪成（2×2）cm2大小，于高壓蒸汽滅菌后的燒杯中使用三蒸水浸泡，超聲振蕩10 min后，用六層紗布過濾震蕩液，連續(xù)浸泡、震蕩、過濾3次，將濾液于低溫超速離心機(jī)中離心（1 000 r/min，4 ℃）棄去上清液，收集底層顆粒物，冷凍后真空干燥，稱重后計算粉塵量，低溫冰箱保存?zhèn)溆?，使用時按照濃度進(jìn)行制備。

1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng) HUVEC用DMEM完全高糖培養(yǎng)液37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)取對數(shù)生長期用于實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 CCK-8法檢測細(xì)胞活性 將細(xì)胞制成懸液，以每孔8×103個接種96孔板。實(shí)驗(yàn)分為對照組，PM2.5組（PM2.5終濃度分別為50、100、200、400、800 μg/mL），AngⅡ組（AngⅡ終濃度分別為1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 μmol/L），PM2.5+AngⅡ組（終濃度為50.00 μg/mL+1.25μmol/L、100.00 μg/ml+2.50 μmol/L、200.00 μg/ml+5.00 μmol/L、400.00 μg/mL+10.00 μmol/L、800 μg/mL+20 μmol/L）。每組設(shè)3個復(fù)孔。分別于24、48 h后檢測結(jié)果按照CCK-8試劑盒說明書進(jìn)行操作，使用酶標(biāo)儀在450 nm處檢測各孔吸光度（OD）值。細(xì)胞存活率（%）=處理組OD值/對照組OD值×100%。

1.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡 以每孔30×104個接種到6孔板，實(shí)驗(yàn)分為：對照組，PM2.5組

（400.00 μg/mL），AngⅡ組（20.00 μmol/L），PM2.5+AngⅡ組（400.00 μg/mL+20.00 μmol/L），培養(yǎng)48 h后用胰蛋白酶將細(xì)胞消化下來，制成懸液，用預(yù)冷PBS洗滌一次，用1 mL Binding Buffer重懸細(xì)胞，取100 μL懸液，先在室溫避光條件下用5 μL Annexin V-FITC染色10 min，再加入5 μL PI 孵育5 min，最后加入PBS至500 μL，1 h內(nèi)流式細(xì)胞儀檢測。

1.3.5 Western Blot法檢測凋亡相關(guān)蛋白 以每孔30×104個接種到6孔板，分組同上。48 h后，用預(yù)冷PBS洗滌，在孔板中加入含PMSF的RIPA細(xì)胞裂解液在冰上裂解。4 ℃、11 000 g，離心4 min，取上清，用BCA法測蛋白濃度。后取5 μg蛋白，進(jìn)行SDS-PAGE分離，分離后用PVDF膜進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜后用5%脫脂奶粉室溫封閉，清洗后孵育一抗（抗P-AKT抗體），二抗（HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG），內(nèi)參，最后用ECL法顯色，曝光拍照，用Image J 分析軟件分析條帶的灰度值，用目標(biāo)蛋白與GAPDH灰度值的比值來表示蛋白的相對表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 以GraphPad Prism 6統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計量資料采用（x±s）表示，多樣本組間比較采用多因素方差分析（Two-way ANOVA），以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01為差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組細(xì)胞存活率比較 （1）24 h時對照組OD值為（2.620±0.019），PM2.5組（PM2.5終濃度分別為50.00、100.00、200.00、400.00、800.00 μg/mL）OD值分別為（2.384±0.295）（2.173±0.149）（1.992±0.066）（1.789±0.343）（1.656±0.269），AngⅡ組（AngⅡ終濃度分別為1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 μmol/L）OD值分別為（2.493±0.087）（2.298±0.088）（2.163±0.373）（2.063±0.204）（1.961±0.170），PM2.5+AngⅡ組（終濃度為50.00 μg/mL+1.25μmol/L、

100.00 μg/mL+2.50 μmol/L、200.00 μg/mL

+5.00 μmol/L、400.00 μg/mL+10.00 μmol/L、800.00 μg/mL+20.00 μmol/L）OD值分別為（2.299±0.077）（2.147±0.181）（1.806±0.094）（1.773±0.044）（1.812±0.509）。各處理組OD值與對照組相比，均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。（2）48 h各處理組OD值為（2.425±0.015），PM2.5組（PM2.5終濃度分別為50.00、100.00、200.00、400.00、800.00 μg/mL）

OD值分別為（1.971±0.074）（1.904±0.135）（1.893±0.059）（1.160±0.270）（1.599±0.489），AngⅡ組（AngⅡ終濃度分別為1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 μmol/L）OD值分別為（1.906±0.157）（1.677±0.137）（1.104±0.096）（1.086±0.163）

（1.671±0.201），PM2.5+AngⅡ組（終濃度為50.00 μg/mL+1.25μmol/L、100.00 μg/mL+

2.50 μmol/L、200.00 μg/mL+5.00 μmol/L、

400.00 μg/mL+10.00 μmol/L、800.00 μg/mL+

20.00 μmol/L）OD值分別為（1.691±0.104）（1.196±0.210）（0.942±0.412）（0.940±0.247）（0.443±0.104）。各處理組OD值均低于對照組比，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。PM2.5在100.00、200.00、800.00 μg/mL時，AngⅡ在20.00 μmol/L時，與對應(yīng)組別的PM2.5+AngⅡ處理相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖1、2。

PM2.5+AngⅡ（50.00 μg/mL+1.25 μmol/L）;2示PM2.5（100.00 μg/mL），AngⅡ（2.50 μmol/L），PM2.5+AngⅡ（100.00 μg/mL+2.50 μmol/L）;3示PM2.5（200.00 μg/mL），

AngⅡ（5.00 μmol/L），PM2.5+AngⅡ（200.00 μg/mL+5 μmol/L）;4示PM2.5（400.00 μg/mL），AngⅡ（10.00 μmol/L），PM2.5+AngⅡ（400.00 μg/mL+10.00 μmol/L）;5示PM2.5（800.00 μg/mL），AngⅡ（20.00 μmol/L），PM2.5+AngⅡ（800.00 μg/mL+20.00 μmol/L）。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005，****P<0.001，與對照組比較。

PM2.5+AngⅡ（50.00 μg/mL+1.25 μmol/L）;2示PM2.5（100.00 μg/mL），AngⅡ（2.50 μmol/L），PM2.5+AngⅡ（100.00 μg/mL

+2.50 μmol/L）;3示PM2.5（200.00 μg/mL），AngⅡ（5.00 μmol/L），PM2.5+AngⅡ（200.00 μg/mL+5.00 μmol/L）;4示PM2.5（400.00 μg/mL），AngⅡ（10.00 μmol/L），PM2.5+AngⅡ（400.00 μg/mL

+10.00 μmol/L）;5示PM2.5（800.00 μg/mL），AngⅡ（20.00 μmol/L），PM2.5+AngⅡ（800.00 μg/mL+20.00 μmol/L）。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005，****P<0.001，與對照組比較;ΔΔP<0.01，ΔΔΔP<0.005，與PM2.5+AngⅡ組比較。

2.2 各組血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡檢測 流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，處理48 h后對照組細(xì)胞凋亡率為（5.837±0.527）%，PM2.5（400.00 μg/mL）組、AngⅡ（20.00 μmol/L）組、PM2.5（400.00 μg/mL）+AngⅡ（20.00 μmol/L）組細(xì)胞凋亡率分為（10.017±0.876）、（8.513±0.612）、（13.047±0.520）%。各組細(xì)胞凋亡率與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01，P<0.01，P<0.005），PM2.5（400.00 μg/mL）+AngⅡ（20.00 μmol/L）處理組與單用PM2.5（400.00 μg/mL）比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），PM2.5（400.00 μg/mL）+AngⅡ（20.00 μmol/L）處理與AngⅡ（20.00 μmol/L）組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.005）。見圖3。

2.3 凋亡相關(guān)蛋白P-AKT檢測 48 h后，各組蛋白相對表達(dá)量：對照組為（2.094±0.420），PM2.5（400.00 μg/mL）組為（1.566±0.196），AngⅡ（20.00 μmol/L）組為（1.372±0.139），PM2.5（400.00 μg/mL）+AngⅡ（20.00 μmol/L）組為（0.604±0.093）。各組與對照組相比，P-AKT的表達(dá)量均下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;PM2.5（400.00 μg/mL）+AngⅡ（20.00 μmol/L）處理組與單用PM2.5（400.00 μg/mL）比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;PM2.5（400.00 μg/mL）+AngⅡ（20.00 μmol/L）處理組與AngⅡ（20.00 μmol/L）組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖4、5。

3 討論

隨著城市化進(jìn)程的加快，大氣污染在我國愈加嚴(yán)重。大氣污染物的細(xì)顆粒物對心血管疾病的影響在近些年的研究中已逐漸被證實(shí)。在臨床觀察統(tǒng)計中顯示，大氣顆粒物中PM2.5的升高可使多種心血管疾?。ǜ哐獕?、動脈粥樣硬化，缺血性心臟病和心力衰竭等）的發(fā)病率明顯上升[1，8-10]。2010年5月，美國心臟協(xié)會（AHA）指出細(xì)顆粒物暴露與心血管疾病發(fā)病率和死亡率存在明確的因果關(guān)系，細(xì)顆粒物暴露可視為心血管疾病發(fā)病和死亡的可改變危險因素。

血管內(nèi)皮細(xì)胞為單層、裱襯在整個心血管系統(tǒng)內(nèi)表面的上皮樣細(xì)胞，是形成心血管封閉管道系統(tǒng)的形態(tài)基礎(chǔ)，也是血管內(nèi)膜的保護(hù)屏障。內(nèi)皮細(xì)胞能夠分泌多種活性物質(zhì)，具有維持循環(huán)系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)的功能，包括調(diào)控血液與周圍組織之間的物質(zhì)交換、維持正常的血液流動、調(diào)控血流、調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)等。因此，正常的血管內(nèi)皮細(xì)胞功能是維持心血管系統(tǒng)正常運(yùn)行所必需的。研究表明血管內(nèi)皮細(xì)胞功能與心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展有著極為密切的關(guān)系，內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡則被認(rèn)為是心血管疾病獨(dú)立的危險因子[10]。動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是心血管疾病中最常見的疾病之一，血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡參與了AS的發(fā)生、發(fā)展過程[11]，被認(rèn)為是動脈粥樣硬化的始動環(huán)節(jié)。有研究表明PM2.5可通過上皮細(xì)胞間隙或借助巨噬細(xì)胞直接進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，對心血管能夠產(chǎn)生直接毒性作用，PM2.5能直接接觸血管內(nèi)皮細(xì)胞引起其功能改變或損傷，最終促進(jìn)心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展[11-12]。PM2.5作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙，從而加速AS進(jìn)展。內(nèi)皮細(xì)胞損傷的一個重要因素就是血管組織局部RAS激活，該系統(tǒng)的活性肽AngⅡ（血管緊張素Ⅱ）與其受體AT1R結(jié)合后對內(nèi)皮細(xì)胞功能及結(jié)構(gòu)發(fā)揮損害作用。研究表明，AngⅡ可促進(jìn)活性氧（ROS）的產(chǎn)生，過量的ROS能夠損傷內(nèi)皮細(xì)胞，促使細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙[6，13]。

本實(shí)驗(yàn)采用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，將PM2.5與AngⅡ分成不同處理組，體外作用于HUVEC。CCK-8法檢測各組細(xì)胞活性狀況，結(jié)果顯示：24 h時，各處理組OD值均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;48 h時，各處理組OD值均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;48 h時，PM2.5在100.00、200.00、800.00 μg/mL，AngⅡ在20.00 μmol/L時，與對應(yīng)組別的PM2.5+AngⅡ處理相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明在處理達(dá)到48 h時，PM2.5對AngⅡ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡有明顯的促進(jìn)作用。后續(xù)實(shí)驗(yàn)中采用流式細(xì)胞術(shù)來檢測PM2.5對AngⅡ誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的情況，48 h結(jié)果顯示：各組細(xì)胞凋亡率與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。PM2.5（400.00 μg/mL）+AngⅡ（20.00 μmol/L）組與AngⅡ（20.00 μmol/L）組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.005），說明單獨(dú)AngⅡ處理細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡數(shù)增多，PM2.5+AngⅡ混合處理后，細(xì)胞凋亡數(shù)進(jìn)一步升高。PM2.5（400.00 μg/mL）+AngⅡ（20.00 μmol/L）處理組與單用PM2.5（400.00 μg/mL）比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），說明PM2.5+AngⅡ的混合處理比PM2.5的單獨(dú)處理，對細(xì)胞凋亡的影響更顯著，進(jìn)一步證實(shí)PM2.5對AngⅡ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡具有促進(jìn)作用。

PTEN（phosphatase and tensin hemology deleted on chromosome ten gene，PTEN）是一種抑癌基因，近些年來隨著研究深入，科研人員發(fā)現(xiàn)PTEN在心肌肥大、動脈粥樣硬化及支氣管哮喘等領(lǐng)域也發(fā)揮重要的作用[14-15]。PTEN發(fā)揮經(jīng)典的抑制細(xì)胞生長作用主要是通過其在膜上的磷酸酶活性抑制PI3K/AKT信號通路來實(shí)現(xiàn)。PTEN基因蛋白通過抑制PI3K/Akt的活性而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。PI3K/AKT/eNOS信號通路在參與血管再生、心肌細(xì)胞代謝等發(fā)揮著重要作用[16]。AKT是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，與細(xì)胞的生長和生存有關(guān)。而且Akt是抑制各種應(yīng)激反應(yīng)的生存因子，它的作用底物與許多生存相關(guān)蛋白，PI3K/AKT信號通路通過激活其下游通路，使AKT被激活為P-AKT，P-AKT通過磷酸化作用參與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖，參與抑制凋亡等[17-18]。有研究證實(shí)PI3K/AKT/eNOS信號通路具有抗氧化、抗凋亡等心肌保護(hù)作用，AngⅡ可引起PI3K/AKT/eNOS信號通路的損傷，導(dǎo)致心肌肥厚[19-20]。因此，為進(jìn)一步探究PM2.5是否通過PI3K/AKT/eNOS信號通路增強(qiáng)AngⅡ?qū)UVEC的誘導(dǎo)凋亡作用。本實(shí)驗(yàn)是體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，采用Western Blot法檢測P-AKT的相對表達(dá)量。結(jié)果顯示，與對照組相比，經(jīng)PM2.5、AngⅡ、PM2.5+AngⅡ分別處理后P-AKT的表達(dá)量均下降，且PM2.5+AngⅡ組P-AKT的表達(dá)量明顯低于單獨(dú)PM2.5組和單獨(dú)AngⅡ組，差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.005），與相應(yīng)的流式結(jié)果相符。進(jìn)一步說明PM2.5對AngⅡ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡可能是通過PI3K/Akt/eNOS信號通路來實(shí)現(xiàn)，具體機(jī)制還需進(jìn)一步探究。

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（收稿日期：2019-06-27） （本文編輯：周亞杰）