齊樂輝，李嘉欣，孟 鑫，田 園，許樹軍

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040）

廣藿香為唇形科廣藿香Pogostemon cablin（Blanco）benth.的干燥地上部分，主治、脘痞嘔吐、暑濕表證等，厚樸為木蘭科厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.及凹葉厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥外皮或根皮,具有行氣消積、燥濕平喘功效[1]。藿香的藥理作用主要有調(diào)節(jié)胃腸道功能、抗菌、鎮(zhèn)痛等[2,3]?，F(xiàn)代研究中，大多數(shù)將廣藿香的揮發(fā)油類成分作為評(píng)價(jià)廣藿香的指標(biāo)，其揮發(fā)油有廣藿香醇和廣藿香酮等[4,5]。其揮發(fā)性成分具有抗菌、調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)等功效[6,7]。廣藿香抗菌實(shí)驗(yàn)也表明，廣藿香的水提物及揮發(fā)性成分均具有抗菌作用[8]。目前，對(duì)廣藿香與厚樸配伍的研究較少，關(guān)于廣藿香與厚樸配伍后，厚樸對(duì)廣藿香水溶性成分的影響幾乎無文獻(xiàn)報(bào)道，極有必要進(jìn)行進(jìn)一步的研究，完善研究廣藿香水提物的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究采用HPLC測(cè)定廣藿香與厚樸配伍前后水提物中香草酸、原兒茶酸的含量[9,10]，為深入研究廣藿香的水溶性成分提供基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料及儀器

LT502型電子天平（常熟市天量?jī)x器有限責(zé)任公司）；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HR-20 1000g多功能粉碎機(jī)（上海哈瑞斯電器有限公司）；Ultimate 3000超快速液相色譜儀（賽默飛世爾科技（中國）有限公司）。

廣藿香藥材產(chǎn)于廣東肇慶；姜厚樸產(chǎn)于浙江；香草酸和原兒茶酸對(duì)照品購買于上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜純）購買于天津星馬克科技發(fā)展有限公司；乙腈（色譜純）、磷酸（色譜純）購買于天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；純凈水為娃哈哈集團(tuán)生產(chǎn)。

1.2 供試品溶液的制備

精密稱取廣藿香2.5g兩份、厚樸2.5g。將廣藿香、廣藿香與厚樸1∶1配伍后分別置于圓底燒瓶中，加100mL蒸餾水，回流3次，每次30min，合并濾液，將濾液蒸干，殘?jiān)状既芙庵?0mL容量瓶作為供試品溶液。

1.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取香草酸酸0.0039g、原兒茶酸對(duì)照品0.0036g，用適量甲醇（色譜純）進(jìn)行溶解定容至10mL容量瓶，制成原兒茶酸和香草酸溶液濃度分別為0.39、0.36mg·mL-1儲(chǔ)備液。吸取上述兩種對(duì)照品溶液各0.5mL成為混合對(duì)照品溶液，混合對(duì)照品溶液中香草酸濃度和原兒茶酸濃度分別0.195mg·mL-1，0.180mg·mL-1。

1.4 色譜條件

Ultimate 3000 HPLC儀器，Supersil ODS2（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱，柱溫：30℃，流速：1.0mL·min-1，進(jìn)樣量：10μL，流動(dòng)相：乙腈-水（含 0.1%H3PO4），0～10min，10%～25%乙腈，檢測(cè)波長：254nm。

1.5 線性關(guān)系的考察

1.5.1 線性及相關(guān)系數(shù) 混合對(duì)照品過0.45μm微孔濾膜置于樣品瓶中，分別精密吸取 0.5 、3、5、7、9、11、13μL進(jìn)高效液相檢測(cè)。測(cè)定兩種對(duì)照品溶液的峰面積，以峰面積（mAu·min）為 Y 軸，進(jìn)樣量（L）為X軸作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到兩種成分的回歸方程，測(cè)定線性。

1.5.2 重復(fù)性考察 精密稱取廣藿香-厚樸各2.5g，進(jìn)行6次平行實(shí)驗(yàn)。按“1.4”項(xiàng)下檢測(cè)，過0.45μm微孔濾膜，記錄對(duì)照品峰面積RSD值。

1.5.3 含量測(cè)定 供試品溶液過0.45μm微孔濾膜，進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，從而測(cè)得廣藿香中兩種水溶性成分（香草酸，原兒茶酸）的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 共有峰確認(rèn)

將兩種對(duì)照品溶液、對(duì)照混合溶液分別按“1.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，分別確定對(duì)照品保留時(shí)間。如圖1所示，峰形較好，保留時(shí)間一致。

圖1 共有峰的確認(rèn)的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of confirmed peaks

2.2 線性關(guān)系考察

以混合對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)X（μL），峰面積為縱坐標(biāo)Y。得原兒茶酸回歸方程為y=7.895x+4.5154，R2=0.9998。得香草酸峰回歸方程為y=7.6977x+1.7205，R2=0.9997，線性良好。

圖2 原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve of primary catechin

圖3 香草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Standard curve of vanilla acid

2.3 重復(fù)性考察

廣藿香重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中香草酸峰面積RSD值為2.37%，原兒茶酸峰面積RSD值為1.09%。二者均符合標(biāo)準(zhǔn)，證明重復(fù)性良好，見圖4。

圖4 廣藿香重復(fù)性考察的HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatogram for repeatability of patchouli

廣藿香與厚樸配伍重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，香草酸的RSD值為2.79%，原兒茶酸RSD值為2.87%。二者均符合標(biāo)準(zhǔn)，證明重復(fù)性良好。

圖5 廣藿香厚樸配伍后的重復(fù)性考察的HPLC色譜圖Fig.5 HPLC chromatogram of repeatability of patchouli after compatibility

2.4 含量測(cè)定

按上述方法進(jìn)行廣藿香加熱回流后的供試品測(cè)定，得色譜圖見圖6和峰面積見表1。

表1 廣藿香含量測(cè)定Tab.1 Determination of Patchouli

實(shí)驗(yàn)測(cè)得廣藿香中原兒茶酸的含量為0.001572mg·g-1，香草酸含量為 0.000485mg·g-1。

圖6 廣藿香含量測(cè)定HPLC色譜圖Fig.6 Determination of patchoulicontentby HPLC

按上述方法進(jìn)行廣藿香與厚樸1∶1配伍后加熱回流后的供試品測(cè)定，得色譜圖見圖7、峰面積見表2。

圖7 廣藿香與厚樸配伍后的含量測(cè)定HPLC色譜圖Fig.7 Determination of content of patchouli and magnolia after compatibility HPLC chromatogram

表2 廣藿香與厚樸配伍后的含量測(cè)定Tab.2 Determination of the contentsof patchouli and magnolia after compatibility

實(shí)驗(yàn)測(cè)得廣藿香加入厚樸后原兒茶酸的含量為0.002475mg·g-1，香草酸含量為 0.007693mg·g-1。

3 結(jié)論

線性、精密度、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)均符合標(biāo)準(zhǔn)，證明該方法可以準(zhǔn)確測(cè)定。廣藿香與厚樸進(jìn)行1∶1配伍后，原兒茶酸含量約是配伍前的1.6倍；廣藿香與厚樸1∶1配伍后對(duì)香草酸含量影響較大，廣藿香與厚樸1∶1配伍后香草酸含量約是配伍前的15.9倍。