葉 勇 李俊賢 吳 英 萬春平 汪子君 趙 淳△

（1.云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，云南 昆明 610000；2.云南省曲靖市中醫(yī)醫(yī)院，云南 曲靖655000）

急性酒精中毒是指短時(shí)間內(nèi)攝入過量酒精造成機(jī)體機(jī)能的損害，嚴(yán)重者引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮或抑制狀態(tài)，使患者出現(xiàn)昏迷、休克、甚至呼吸衰竭［1］。中醫(yī)學(xué)對酒精中毒有較為詳細(xì)的描述，有 “酒?！薄熬贫尽薄熬曝省薄熬泼洝薄熬齐钡炔∶?］。本研究旨在觀察枳椇飲對急性酒精中毒小鼠解酒作用，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 昆明小鼠50只，雌雄各半，7～8周齡，體質(zhì)量 20～25 g，許可證號 SCXK（川）2008-24；用 SPF級動物房飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動物，實(shí)驗(yàn)動物至少飼養(yǎng)1周后使用。動物飼養(yǎng)在云南省中醫(yī)醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室SPF級動物房，實(shí)驗(yàn)動物至少飼養(yǎng)1周后使用。溫度（22±1）℃，濕度（55±5）%，12 h光暗循環(huán)。飼料和水均在消毒后由動物自由攝取。所有實(shí)驗(yàn)均嚴(yán)格按照《實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》以及動物實(shí)驗(yàn)學(xué)的“3R”原則進(jìn)行。

1.2 試藥與儀器 1）試藥：枳椇飲系本文通信作者，云南省名老中醫(yī)趙淳教授經(jīng)驗(yàn)方，其組方為：枳椇子20 g，葛根 10 g，豆蔻 10 g，青橄欖 10 g，玉米肽 8 g，柚皮 10 g，烏梅 10 g，虎杖 10 g，鹿仙草 10 g，枸杞子 10 g。按劑量制成顆粒劑 （由云南麥谷農(nóng)業(yè)科技有限公司提供）備用；牡蠣大豆肽肉堿口服液（海王金樽牌）；56°食用白酒（北京紅星二鍋頭）。2）儀器：YLS-1A自主活動測試儀（山東益延科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)）。

1.3 造模及分組 實(shí)驗(yàn)前將昆明小鼠禁食不禁水12 h，然后將50只昆明小鼠隨機(jī)分為模型組及枳椇飲低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對照組，每組10只。各組均以10 mL/kg為標(biāo)準(zhǔn)給小鼠灌酒，誘導(dǎo)急性酒精中毒小鼠模型。

1.4 干預(yù)方法 枳椇飲低劑量組、中劑量組、高劑量組分別灌胃給藥0.25 g/kg、0.5 g/kg和1 g/kg枳椇飲。模型組以相同劑量給0.9%氯化鈉注射液0.4 mL。陽性對照組予牡蠣大豆肽肉堿口服液給予10 mL/kg牡蠣大豆肽肉堿口服液口服液。灌胃1次。

1.5 小鼠翻正反射記錄 灌胃白酒和藥物以后，即將小鼠背向下輕輕放在動物籠里，若仰位姿勢保持30 s以上，則認(rèn)為翻正反射消失，記錄小鼠從灌酒到翻正反射消失的潛伏時(shí)間 （從造模到翻正反射消失時(shí)間）和翻正反射的恢復(fù)時(shí)間（從造模到翻恢復(fù)翻正反射的時(shí)間）。

1.6 小鼠自主活動記錄 使用自主活動儀分別記錄各組小鼠5、30、150 min自主活動次數(shù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示。均值間差異比較采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠翻正反射比較 見表1。與模型組比較，枳椇飲高劑量藥物干預(yù)組顯著提高了翻正反射消失潛伏時(shí)間（P＜0.05）；與模型組比較，陽性組、枳椇飲低、高劑量組翻正反射的恢復(fù)時(shí)間顯著縮短（P＜0.05）。

表1 各組小鼠翻正反射比較（min，±s）

表1 各組小鼠翻正反射比較（min，±s）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01下同

組 別 n 翻正反射消失潛伏時(shí)間 翻正反射的恢復(fù)時(shí)間模型組 10 18.16±10.98 169.67±50.12陽性對照組 10 19.67±7.63 100.83±29.67*枳椇飲低劑量組 10 26.17±15.63 139.00±33.51枳椇飲中劑量組 10 36.17±18.53 111.16±23.26*枳椇飲高劑量組 10 28.80±6.45* 73.00±46.11**

2.2 各組小鼠自主活動比較 見表2。給予酒精后，隨著時(shí)間的推移，實(shí)驗(yàn)小鼠由興奮變?yōu)榘察o。5 min時(shí)，與模型組比較，枳椇飲高劑量組自主活動顯著減少（P＜0.05）；30 min時(shí)，與模型組比較，各組實(shí)驗(yàn)小鼠自主活動無顯著性差異。150 min時(shí)，與模型組比較，陽性組及枳椇飲低、中、高劑量組自主活動顯著增加（P＜0.01）。

表2 各組小鼠自主活動比較（次，±s）

表2 各組小鼠自主活動比較（次，±s）

組 別 n 5 min 30 min 150 min正常組 10 147.50±38.55 148.00±46.99 155.25±38.78模型組 10 162.37±33.87 138.16±35.50 53.42±33.21**陽性對照組 10 176.50±36.80枳椇飲低劑量組 10 161.50±38.85枳椇飲中劑量組 10 143.57±46.73枳椇飲高劑量組 10 88.00±31.36**146.83±32.40 132.28±50.50**102.33±58.70 145.55±46.01**108.33±58.10 149.33±48.21**121.50±50.62 145.71±38.20**

3 討 論

急性酒精中毒主要表現(xiàn)在對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用上，作用于小腦時(shí)主要表現(xiàn)為走路不穩(wěn)、共濟(jì)失調(diào)等運(yùn)動障礙；作用于腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，則進(jìn)入昏睡期，最后會因?yàn)橐种蒲铀瓒霈F(xiàn)休克、呼吸衰竭進(jìn)而導(dǎo)致死亡。小鼠翻正反射、攀附實(shí)驗(yàn)和轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)及自主活動評價(jià)是主要評價(jià)大鼠醉酒后肌力和運(yùn)動協(xié)調(diào)能力的有效方法［3-4］。故本實(shí)驗(yàn)通過翻正反射消失潛伏時(shí)間和恢復(fù)時(shí)間來驗(yàn)證枳椇飲對急性酒精中毒中樞抑制的解酒療效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，枳椇飲高劑量藥物干預(yù)組顯著提高了翻正反射消失潛伏時(shí)間；與模型組比較，陽性組、枳椇飲低、高劑量組翻正反射的恢復(fù)時(shí)間顯著縮短，表明枳椇飲能有效改善急性酒精中毒小鼠的中樞抑制狀態(tài)。

本實(shí)驗(yàn)在給予小鼠酒精后，隨著時(shí)間的推移，乙醇在腦內(nèi)劑量的逐漸蓄積，小鼠先后經(jīng)歷興奮期、共濟(jì)失調(diào)期和昏睡期，故實(shí)驗(yàn)小鼠由興奮變?yōu)榘察o，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，灌酒后5 min，與模型組比較，枳椇飲高劑量組自主活動顯著減少，表明枳椇飲能減少小劑量乙醇中毒的神經(jīng)興奮狀態(tài)；150 min時(shí)，與模型組比較，陽性組、枳椇飲低、中、高劑量組自主活動顯著增加，表明枳椇飲能改善急性酒精中毒小鼠昏睡期的中樞抑制狀態(tài)。

枳椇子作為本方的主要藥物，具有清熱利尿、解酒毒之功效，主治酒醉、煩熱、口渴、嘔吐、二便不利等癥。早在《千金要方》和《本草綱目》中就均有記載，枳椇子和葛根是最為經(jīng)典的解酒藥物［5-6］，葛根和枳椇子具有的解酒護(hù)肝作用也在現(xiàn)代研究中得到了證實(shí)［7-8］。

現(xiàn)代研究表明，過多的乙醇可導(dǎo)致乙醇脫氫酶活性下降，而枳椇子可逆轉(zhuǎn)這種過程，提高該酶的活性，讓中間產(chǎn)物乙醛的產(chǎn)生與積累達(dá)到一種平衡［9］。任發(fā)政等［10］通過動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，長期攝入酒精的小鼠可引起肝臟超氧化物歧化酶（MDA）和谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶活性降低，從而導(dǎo)致丙二醛含量升高和谷胱甘肽含量下降，而枳椇子對上述變化具有拮抗作用。時(shí)濤等［11］研究發(fā)現(xiàn)枳椇子乙酸乙酯能夠提高急性酒精中毒小鼠中血液谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性，降低小鼠肝臟丙二醛（MDA）含量，升高小鼠肝臟乙醇脫氫酶（ADH）活性和超氧化物歧化酶（SOD）活性，升高肝臟谷胱甘肽（GSH）含量，因此枳椇子具有顯著的解酒效果。嵇揚(yáng)等通過研究提出枳棋子能顯著縮短急性酒精中毒小鼠的醒酒時(shí)間，降低血液中乙醇濃度，有治療急性酒精中毒的作用［12］；藥理研究發(fā)現(xiàn)葛根可以解酒毒，通過抑制酒精自主攝入、增加乙醇耐受 、降低血液乙醇濃度。有利于乙醇在體內(nèi)的分解代謝，從而可以解酒毒。影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮與抑制過程是葛根具有解酒作用的重要原因之一［13］?；⒄戎刑崛〉幕钚猿煞?虎杖苷能減少肝損害，具有保護(hù)肝細(xì)胞，降低脂肪肝，改善胰島素抵抗的作用［14］，這對急性酒精中毒時(shí)發(fā)生的肝臟功能損害起到了保護(hù)肝臟的作用。枸杞對酒精性肝損傷大鼠具有保護(hù)作用，能有效地阻止酒精所致肝損傷脂質(zhì)過氧化物的終產(chǎn)物MDA的升高，具有抗脂質(zhì)過氧化及保護(hù)肝細(xì)胞的作用［15］。鹿仙草也具有解酒毒的作用。通過提高ADH和ALDH的活性，加快了乙醇在體內(nèi)的代謝，增強(qiáng)SOD和GSH-Px的活性，清除自由基，保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能［16］。玉米肽可以促進(jìn)乙醇代謝 ，減低血液乙醇水平的作用。

本方中枳椇子清熱利尿、解酒毒，葛根既解酒毒，又善醒脾生津，共為君藥；虎杖、鹿仙草、肉豆蔻、余甘子、玉米肽解酒毒；柚子皮和烏梅消食、醒酒、化痰、健脾、生津止渴、增食欲，助君藥共奏解酒毒之功效，為臣藥；菊花清熱解毒，平肝明目，沙棘、桑葚、枸杞滋養(yǎng)肝腎，護(hù)肝共為佐藥。合而用之，共奏解酒毒、清熱護(hù)肝、健脾生津、利濕之效，則酒毒諸癥自消。