右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000

急性酒精中毒，是指在短時(shí)間內(nèi)大量飲酒后，乙醇的吸收大于代謝，吸收的乙醇通過血腦屏障致使中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生先興奮隨后抑制，甚至危及生命的狀態(tài)[1-2]。急性酒精中毒的發(fā)生率在大幅增加，不但嚴(yán)重?fù)p壞大眾健康，亦非常容易產(chǎn)生許多社會(huì)問題[3]。因此，尋找安全、有效的中藥解酒制品已日益受到關(guān)注。枳椇子，又可稱為雞距子、萬壽果、酸棗、結(jié)肉籽，是鼠李科植物枳椇的成熟種子。其主要成分為黃酮類、蒽醌類、三萜皂苷類、苯丙素類、二蒽酮類、萘酚類、生物堿類等成分。有抗菌、保肝、解酒、抗腫瘤、抗炎、抗氧化、瀉下之功效。其中黃酮類化合物，主要是黃酮類碳苷化合物可能是枳椇子的重要藥效物質(zhì)[4-5]。 其解酒功能在我國(guó)古代就已發(fā)現(xiàn)，藥王孫思邈曾高度評(píng)價(jià)枳椇子的解酒功能為“園中生枳椇，家中無醉人”。

現(xiàn)代研究表明，枳椇子可能是因?yàn)槟芮宄踝杂苫涂怪|(zhì)過氧化，具備護(hù)肝、解酒之功效[6]。但對(duì)探究枳椇子水提液對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的影響來促進(jìn)解酒的研究較少。因此，本實(shí)驗(yàn)通過探究枳椇子水提液對(duì)急性酒精中毒小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響及枳椇子的解酒原理以期能對(duì)其臨床應(yīng)用有一定指導(dǎo)意義。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量范圍20～28 g，右江民族醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心供應(yīng)，許可證號(hào)：SCXK桂2017-0003，小鼠質(zhì)量合格證號(hào)：0007556。

1.2 試劑 一氧化氮(NO)試劑盒(批號(hào)：A012)、 乙醇脫氫酶(ADH)試劑盒(批號(hào)： A083-1)、乙醇試劑盒(批號(hào)：E036)均為南京建成生物工程研究所，解酒靈(批號(hào)：20170101，江西光達(dá)可信醫(yī)藥生物公司)、無水乙醇(批號(hào)：20170918，天津市大茂化學(xué)試劑廠)、羥甲基纖維素鈉(批號(hào)：20110219，成都市科龍化工試劑廠)

1.3 儀器 日立7600-020E型全自動(dòng)生化分析儀、722N型分光光度計(jì)，低速臺(tái)式離心機(jī)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

2 方法

2.1 枳椇子水提液的制備 選枳椇子干品50 g置于500 mL蒸餾水中達(dá)8 h，小火煎煮至沸騰后再煎煮1.5 h，第2次添300 mL蒸餾水，小火煎煮至沸騰后再煎煮1 h，聚集兩次煎液于同一器皿，然后過濾，濃縮至2 g/mL，置于冰箱冷藏封口備用，等待用時(shí)加蒸餾水配置為濃度2000 g/L、1000 g/L、500 g/L，小鼠給藥體積為0.1 mL/10 g[7]。

2.2 碳末懸液的制備 稱5 g活性碳末與1 g羥甲基纖維素鈉，置其于100 mL水中，轉(zhuǎn)動(dòng)玻璃棒使它們均勻混合后配成碳末懸液后放置于冰箱冷藏，等待需要用時(shí)將溫度恢復(fù)至室內(nèi)溫度[8]。

2.3 動(dòng)物分組和給藥方法 取小鼠60只，將其自由組合成6組，即正常對(duì)照組、模型組、解酒靈組、枳椇子水提液高、中、低劑量組。正常對(duì)照組與模型組每天灌與其他組等量體積的蒸餾水，解酒靈組每日依據(jù)1 g/ kg的藥量喂養(yǎng)，枳椇子水提液高劑量組、枳椇子水提液中劑量組、枳椇子水提液低劑量組每天分別按照2000 g/ L、1000 g/ L、500 g/ L的給藥量灌喂，所有小鼠皆按照0.1 mL/10 g的藥量給藥，其給藥方法為灌胃給藥，頻次為1天1次，持續(xù)7 d。

2.4 小鼠急性酒精中毒模型的建立 最后一次灌藥前12 h小鼠停止進(jìn)食但不停止進(jìn)水，除了正常對(duì)照組的小鼠外，其它組的小鼠在灌喂相應(yīng)藥液完畢之后均灌胃50%酒精，30 min后再以5%碳末懸液0.25 mL/10 g灌胃[8]。

2.5 血生化指標(biāo)測(cè)定 上述操作完成時(shí)間達(dá)15 min時(shí)，摘小鼠眼球采血并離心獲得其上層血清，并根據(jù)說明書上方法來測(cè)定其血清NO、血乙醇、乙醇脫氫酶濃度。

2.6 小鼠胃內(nèi)容物殘留率和炭末推進(jìn)比的測(cè)量與計(jì)算 采血完畢立即剖腹將胃及小腸取出，先稱胃稱質(zhì)量(胃總質(zhì)量)，用手術(shù)剪沿胃大彎部將胃剪開并排出胃內(nèi)容物，然后沖洗胃中的殘留物將殘留物洗凈并用濾紙吸干多余水分，稱量并記錄胃凈質(zhì)量。計(jì)算胃內(nèi)容物殘留率(%)= (胃總質(zhì)量—胃凈質(zhì)量)/半固體米糊質(zhì)量×100% 。根據(jù)胃內(nèi)容物殘留率的數(shù)值大小指標(biāo)評(píng)判胃排空的速度。用直尺量取胃的幽門部到回盲部的長(zhǎng)度當(dāng)做“小腸總長(zhǎng)”，將取出的小鼠小腸自然擺成直線平鋪于桌面上并進(jìn)行測(cè)量，用直尺量取胃幽門到炭末前沿的長(zhǎng)度當(dāng)做“炭末推進(jìn)長(zhǎng)度”，并根據(jù)以下式子求炭末推進(jìn)比：炭末推進(jìn)比(%)=炭末推進(jìn)長(zhǎng)度(cm)/小腸總長(zhǎng)(cm)×100% 。 根據(jù)炭末推進(jìn)比的數(shù)值大小作為標(biāo)準(zhǔn)評(píng)判小腸的推進(jìn)速度[8]。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0處理，以(x±s)形式表示，計(jì)量資料組間比較利用 One-Way ANOVA，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 枳椇子水提液對(duì)急性酒精中毒小鼠血清血乙醇、乙醇脫氫酶的影響 由表1可知，與正常對(duì)照組相比，模型組的血乙醇值明顯上升(P<0.01)，乙醇脫氫酶值明顯下降(P<0.01)說明了急性酒精中毒小鼠模型創(chuàng)造成功；跟模型組比較，枳椇子水提液高劑量組的血乙醇較低(P<0.05)，乙醇脫氫酶較高(P<0.05)，枳椇子水提液中劑量組、枳椇子水提液低劑量組、解酒靈組的血乙醇濃度呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，乙醇脫氫酶水平呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，證明枳椇子水提液能抑制乙醇吸收，降低血液中乙醇的水平，增加血液中乙醇脫氫酶水平，且枳椇子水提液高劑量組效果優(yōu)于枳椇子水提液低劑量組、中劑量及解酒靈組。

3.2 枳椇子水提液對(duì)急性酒精中毒小鼠血清 NO濃度的影響 由表1可知，與正常對(duì)照組相比，模型組的 NO值稍高但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與模型組相比，低劑量、中劑量、高劑量、解酒靈組的 NO值均升高(P<0.05)，說明枳椇子水提液、解酒靈跟 NO相關(guān)。

表1 枳椇子水提液對(duì)急性酒精中毒小鼠血乙醇、乙醇脫氫酶、一氧化氮的影響

3.3 枳椇子水提液對(duì)急性酒精中毒小鼠胃內(nèi)容物殘留率及炭墨推進(jìn)比的影響 由表2可知，與正常對(duì)照組相比，模型組的胃內(nèi)容物殘留率上升(P<0.01)，炭墨推進(jìn)比下降(P<0.05)，表明了急性酒精中毒后小鼠胃排空速度、小腸推進(jìn)均有減慢；與模型組相比，中劑量組、高劑量組的胃內(nèi)容物殘留率均下降(P<0.01)，碳末推進(jìn)比均上升(P<0.01，P<0.05)，解酒靈組的胃內(nèi)容物殘留率呈下降趨勢(shì)，碳末推進(jìn)比呈升高趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明中、高劑量組具備加快急性酒精中毒小鼠胃排空及加快小腸推進(jìn)的功用。

表2 枳椇子水提液對(duì)急性酒精中毒小鼠胃內(nèi)容物殘留率、碳末推進(jìn)比的影響

4 討論

醉酒的發(fā)展主要取決于胃腸吸收和肝臟代謝速度，當(dāng)胃腸吸收大于肝臟代謝能力時(shí)，體內(nèi)乙醇會(huì)隨著血液循環(huán)進(jìn)入大腦，影響大腦皮質(zhì)，讓神經(jīng)存在短暫的興奮而后受到抑制[9]。酒精在胃腸道吸收后，在乙醇脫氫酶催化下轉(zhuǎn)化成乙醛，乙醛被乙醛脫氫酶氧化為乙酸后以乙酰輔酶 A的存在形式進(jìn)入到三羧酸循環(huán)，形成二氧化碳和水[10]，若乙醛不能快速形成二氧化碳和水排出體外，則會(huì)在體內(nèi)組織和臟器聚積。乙醇的首過代謝(FPM)，指?jìng)€(gè)體飲酒后，一部分乙醇在尚未進(jìn)入肝臟前在消化道內(nèi)產(chǎn)生被氧化分解的作用[11]，當(dāng)乙醇經(jīng)口進(jìn)入人體后，首先經(jīng)胃組織吸收，胃黏膜上含有乙醇脫氫酶(ADH)和乙醛脫氫酶主要氧化分解乙醇的酶類，可在乙醇進(jìn)入血液和肝臟前優(yōu)先將其進(jìn)行代謝分解，從而減少乙醇進(jìn)入血液的含量，避免大量乙醇涌入肝臟超過肝臟代謝能力引起乙醛等有害物質(zhì)蓄積，減輕肝臟負(fù)擔(dān)[9]。ADH是人體內(nèi)重要的代謝酶，有多數(shù)學(xué)者以為胃ADH在FPM中起重要作用。FPM可以通過降低機(jī)體對(duì)乙醇的生物利用度，從而減緩其在體內(nèi)代謝過程中給肝臟、腦等器官造成的損傷。

通過枳椇子水提液治療后高劑量組的血乙醇水平較低(P<0.05)，乙醇脫氫酶水平較高(P<0.05)，枳椇子水提液中劑量組、枳椇子水提液低劑量組、解酒靈組的血乙醇濃度呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，乙醇脫氫酶水平呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，高劑量組效果優(yōu)于低、中劑量及解酒靈組。提示枳椇子可能通過提高血液中乙醇脫氫酶水平，此實(shí)驗(yàn)結(jié)果與宋莎莎等報(bào)道的結(jié)果一致[6]。增強(qiáng)乙醇在胃腸道的 FPM，抑制乙醇吸收，達(dá)到降低血中乙醇的濃度的目的，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與王潔等報(bào)道的結(jié)果一致[1]。而解酒靈的解酒原理是使乙醇的吸收過程被消化道所阻斷，增強(qiáng)它的 FPM作用，同時(shí)降低它在血液中的含量，以減弱它對(duì)機(jī)體的神經(jīng)、消化等系統(tǒng)的損傷[12]。

NO能促進(jìn)小腸血管平滑肌舒張，生理狀況下，70%～80%小腸黏膜血流量由小腸供血，小腸黏膜血流量能增強(qiáng)小腸運(yùn)動(dòng)， NO值增加使血流量增加從而提高小腸的新陳代謝和物質(zhì)交換，及時(shí)為小腸提供收縮運(yùn)動(dòng)中所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量物質(zhì)，并且還能為小腸清除代謝產(chǎn)物，進(jìn)而增強(qiáng)小腸運(yùn)動(dòng)功能[13]。通過治療后低劑量組、高劑量組、解酒靈組的 NO水平都上升(P<0.05)， 提示枳椇子、解酒靈可通過提高 NO水平來舒張小腸血管平滑肌，增加小腸黏膜血流量，提高小腸的新陳代謝和物質(zhì)交換，從而增強(qiáng)小腸運(yùn)動(dòng)功能，使進(jìn)入血液循環(huán)的乙醇減少。

胃排空速度快慢與胃運(yùn)動(dòng)的強(qiáng)弱有關(guān)，而又可通過計(jì)算胃內(nèi)容物殘留率來評(píng)判胃運(yùn)動(dòng)的強(qiáng)弱，胃內(nèi)容物殘留率可以作為評(píng)價(jià)胃排空速度快慢的指標(biāo)，其數(shù)值小則表明胃排空速度快。食物在小腸推進(jìn)的快慢與小腸運(yùn)動(dòng)的強(qiáng)弱有關(guān)，可以通過測(cè)量炭墨推進(jìn)比間接反映小腸運(yùn)動(dòng)的速度，炭墨推進(jìn)比越高，小腸運(yùn)動(dòng)越強(qiáng)。與正常對(duì)照組相比，模型組的胃內(nèi)容物殘留率上升(P<0.01)，炭墨推進(jìn)比下降(P<0.05)，說明急性酒精中毒后小鼠胃排空速度、小腸推進(jìn)均減慢，通過枳椇子水提液治療后中劑量組、高劑量組的胃內(nèi)容物殘留率皆降低(P<0.01)，碳末推進(jìn)比均升高(P<0.01，P<0.05)，提示枳椇子有拮抗乙醇抑制胃腸運(yùn)動(dòng)的作用，又可加快腸運(yùn)動(dòng)和胃運(yùn)動(dòng)來促進(jìn)乙醇的胃腸排空，使進(jìn)入血液循環(huán)的乙醇減少致使起到解酒的功效。有研究報(bào)道[4，14]，枳椇皂苷能促進(jìn)腸管蠕動(dòng)、有利尿作用，蒽醌類衍生物中的大黃素有瀉下作用，是否與此有關(guān)需進(jìn)一步探究。

綜上所述，枳椇子水提液有促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)及解酒作用，其解酒機(jī)制可能與乙醇在胃腸道的首過代謝、促進(jìn)腸胃運(yùn)動(dòng)及NO水平有關(guān)。