李雪艷，張濤，楊紅梅，楚敏，高雁，曾軍，霍向東，張濤，林青，歐提庫(kù)爾，李玉國(guó)，婁愷，史應(yīng)武

(1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，烏魯木齊 830052；2.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所/新疆特殊環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830091)

0 引 言

【研究目的】棉花是新疆主要經(jīng)濟(jì)作物，隨著棉花種植區(qū)的連年輪作，黃萎病日益嚴(yán)重，對(duì)棉花的產(chǎn)量和質(zhì)量損害巨大。大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)是棉花黃萎病的主要致病菌，該真菌類型多、變異快、菌系與寄主關(guān)系復(fù)雜[1,2]。防治這種土傳病害通常使用化學(xué)殺菌劑、高抗育種、生物防治等方法，化學(xué)殺菌劑只能治標(biāo)不治本，對(duì)土壤中的致病孢子作用小，而且污染環(huán)境；高抗育種年限長(zhǎng)且適應(yīng)新疆棉田的高抗棉株品種少、安全的防控土傳疾病，而且不會(huì)影響其他農(nóng)業(yè)系統(tǒng)的有益微生物[3,4]，符合綠色可持續(xù)發(fā)展的理念。研究發(fā)現(xiàn)，真菌[5]、細(xì)菌[6,7]、放線菌[8]等部分微生物可降低棉花黃萎病發(fā)病率，生防機(jī)理主要有營(yíng)養(yǎng)與生態(tài)位的競(jìng)爭(zhēng)，拮抗物質(zhì)，誘導(dǎo)植物抗病性等[9]，抗菌物質(zhì)中各種酶類起到關(guān)鍵作用。真菌細(xì)胞壁的主要成分有幾丁質(zhì)、葡聚糖、纖維素、蛋白等，研究4株拮抗菌產(chǎn)幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶可一定程度解釋真菌細(xì)胞腫脹和細(xì)胞壁完整性缺失，導(dǎo)致細(xì)胞的裂解和死亡的原因[10]，為進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用該4株拮抗菌株提供依據(jù)，為4株拮抗細(xì)菌的防治機(jī)理研究奠定基礎(chǔ)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】國(guó)內(nèi)外目前已有關(guān)于微生物胞外酶防治病害的報(bào)道，蘇明慧等[11]發(fā)現(xiàn)從芽孢桿菌FM4B分離的幾丁質(zhì)酶可抑制西瓜枯萎病菌，酶液濃度越高抑制效果越好；田亞琴等[12]發(fā)現(xiàn)幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶與芒果炭疽菌抑制效果相關(guān)；Li等[13]發(fā)現(xiàn)幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶能水解植物病原菌細(xì)胞壁從而抑制病原真菌；文鳳云等[14]發(fā)現(xiàn)葡聚糖酶是多粘類芽孢桿菌CP7拮抗真菌活性組分或其中之一，并克隆葡聚糖酶基因構(gòu)建高效表達(dá)菌。劉艷[5]報(bào)道哈茨木霉4種離體蛋白酶對(duì)尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌、核盤菌、鏈格孢菌和楊樹爛皮病菌有不同程度的抑制作用?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前棉花黃萎病防治效果不理想。已通過電鏡掃描驗(yàn)證4株拮抗細(xì)菌均可破壞大麗輪枝菌細(xì)胞形態(tài)，但其拮抗機(jī)理尚不明確。研究棉花黃萎病拮抗細(xì)菌胞外酶檢測(cè)及其酶活測(cè)定?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過檢測(cè)培養(yǎng)基，透明圈法測(cè)定胞外酶的種類，經(jīng)酶類發(fā)酵培養(yǎng)基富集，DNS法測(cè)定纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶活，福林-酚法測(cè)定蛋白酶活。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 菌種來源

BHZ-29、SHZ-24菌株由實(shí)驗(yàn)室分別從博樂、石河子棉株體內(nèi)篩選；SHT-15、SMT-24均從石河子棉株種植根際土壤中分離所得。

1.1.2 種子液培養(yǎng)基

NB培養(yǎng)基。

1.1.3 鑒別培養(yǎng)基

葡聚糖鑒別培養(yǎng)基：參考文獻(xiàn)[15]；纖維素酶檢測(cè)培養(yǎng)基：CMC-Na 1 g，(NH4)2SO40.4 g，KH2PO40.1 g，MgSO40.05 g，GaCl20.002 g，蛋白胨0.1 g，酵母膏0.1 g，瓊脂2 g，蒸餾水100 mL，pH中性，0.1%剛果紅備用；蛋白酶檢測(cè)培養(yǎng)基：參考文獻(xiàn)[10]海水更改為蒸餾水；膠體幾丁質(zhì)酶檢測(cè)培養(yǎng)基：參考文獻(xiàn)[16]。

1.1.4 發(fā)酵培養(yǎng)基

纖維素酶發(fā)酵培養(yǎng)基：不加瓊脂的纖維素檢測(cè)培養(yǎng)基，pH中性；葡聚糖酶發(fā)酵培養(yǎng)基：無瓊脂及染料的葡聚糖檢測(cè)培養(yǎng)基，酵母膏2 g，pH中性；膠體幾丁質(zhì)酶發(fā)酵培養(yǎng)基：膠體幾丁質(zhì)0.2 g，酵母膏0.6 g，K2HPO40.1 g，KH2PO40.15 g，GaCl2·2H2O 0.1 g，MgSO40.02 g，蒸餾水100 mL，pH中性；蛋白酶發(fā)酵培養(yǎng)基：可溶性淀粉1 g，蛋白胨0.5 g，Na2HPO4·12H2O 0.4 g，KH2PO40.03 g ，GaCl20.1 g，蒸餾水100 mL，pH中性。

1.1.5 主要試劑

膠體幾丁質(zhì)參考[17,18]自制，3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑參考[17]配制，0.1 mol/L pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖液、0.02 mol/L pH值為7.5的磷酸緩沖液均參考文獻(xiàn)[18]配制，其余均為分析純。

1.2 方 法

1.2.1 拮抗菌種子液的制備

將NA上劃線分離的拮抗菌單菌落接種到NB液體培養(yǎng)基，30℃、200 r/min振蕩發(fā)酵1 d。

1.2.2 粗酶液的制備

將4種拮抗菌的種子液按照分別按照4%的量接種到葡聚糖酶、纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、蛋白酶發(fā)酵培養(yǎng)基中，500 mL三角瓶裝液量為50 mL，葡聚糖酶、纖維素酶發(fā)酵培養(yǎng)基30℃、200 r/min振蕩培養(yǎng)12、36、60、84和108 h，幾丁質(zhì)酶、蛋白酶同條件下發(fā)酵培養(yǎng)12、36、60、84、108和132 h。10 000 r/min離心15 min，取上清液備用。

1.2.3 拮抗菌產(chǎn)幾丁質(zhì)酶、蛋白酶、葡聚糖酶、纖維素酶平板檢測(cè)

分別在葡聚糖酶、幾丁質(zhì)酶、纖維素酶、蛋白酶檢測(cè)培養(yǎng)基上打5孔(直徑6 mm)，四周呈正方形對(duì)稱打4孔為處理組，每孔加拮抗菌種子液100 μL，培養(yǎng)基中心孔為對(duì)照組，加100 μL無菌NB培養(yǎng)基，放置30℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，將葡聚糖檢測(cè)培養(yǎng)基與纖維素檢測(cè)培養(yǎng)基用0.1%的剛果紅溶液10～15 mL染色20 min，傾倒染液后加入1 mol/L的NaCl至滿平板，靜置20 min，反復(fù)NaCl洗3次，測(cè)量記錄透明圈外徑大小。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

稱取適量無水葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖、L-酪氨酸放置于105℃烘箱內(nèi)干燥至恒重，分別準(zhǔn)確稱取 1.000 g，配制成1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，1 mg/mL N-乙酰氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，0.1 mg/mL的L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液。

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立參考文獻(xiàn)[19]稍作修改，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液加入量改為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，DNS溶液加入量更改為3.0 mL，蒸餾水定容至10 mL。N-乙酰氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立同上，將葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液更改為N-乙酰氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，加入量為0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55 mL，補(bǔ)充蒸餾水至1.5 mL，DNS加入量1.5 mL，最終定容體積為7.5 mL。L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線建立參考文獻(xiàn)[20]。

1.2.5 拮抗菌幾丁質(zhì)酶、蛋白酶、葡聚糖酶、纖維素酶活測(cè)定

0.5%CMC-Na 、1%葡聚糖、0.5%膠體幾丁質(zhì)用0.1 mol/L pH為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖液配制,0.5%的酪素用0.02 mol/L pH為7.5的磷酸緩沖液配制。采用DNS法測(cè)定葡聚糖、纖維素、幾丁質(zhì)酶活性，在540 nm波長(zhǎng)處記錄樣品OD值；采用福林-酚法測(cè)定蛋白酶活性，在680 nm波長(zhǎng)處記錄OD值，均以滅活粗酶液為對(duì)照組。分別將樣品細(xì)菌計(jì)數(shù)，稀釋105、106、107梯度涂布，每個(gè)梯度3個(gè)平行試驗(yàn)。

1.2.5.1 纖維素酶活性測(cè)定

1 mL 0.5%CMC-Na與1 mL纖維素粗酶液混合50℃水浴30 min，加3 mL DNS，100℃煮沸5 min，冷卻補(bǔ)充體積至10 mL。

1.2.5.2 葡聚糖酶活性測(cè)定

1 mL 1%葡聚糖與1 mL葡聚糖粗酶液，混合50℃水浴30 min，加3 mL DNS，100℃煮沸5 min，冷卻補(bǔ)充體積至10 mL。

1.2.5.3 幾丁質(zhì)酶活測(cè)定

參考文獻(xiàn)[17]稍作修改，1 mL 0.5%膠體幾丁質(zhì)與1 mL幾丁質(zhì)粗酶液50℃水浴30 min，10 000 r/min離心15 min，取離心上清液1.5 mL與1.5 mL DNS溶液沸水浴5 min，冷卻后定容7.5 mL。

1.2.5.4 蛋白酶活性測(cè)定

參考文獻(xiàn)[20]稍作修改，1 mL蛋白質(zhì)粗酶液與1 mL 0.5%的酪素混合，37℃水浴20 min，加1 mL三氯乙酸終止反應(yīng)，10 000 r/min離心15 min后取上清液0.5 mL補(bǔ)充蒸餾水0.5 mL，加0.55 mol/L的碳酸鈉溶液5 mL，最后加福林酚溶液1 mL，37℃水浴顯色20 min。

1.2.6 酶活定義

底物在一定反應(yīng)條件下(葡聚糖、幾丁質(zhì)、纖維素50℃下水浴30 min，酪蛋白37℃水浴20 min)與粗酶液反應(yīng)30 min生成1 μg葡萄糖/酪氨酸為一個(gè)酶活單位。

2 結(jié)果與分析

2.1 平板透明圈法測(cè)定SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24幾種胞外酶

研究表明，BHZ-29、SHT-15、SMT-24菌株均產(chǎn)葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶，不產(chǎn)幾丁質(zhì)酶；SHZ-24產(chǎn)幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶、蛋白酶，不產(chǎn)纖維素酶。檢測(cè)平板上蛋白酶、幾丁質(zhì)酶、纖維素酶解圈清晰透明，邊緣界限明顯，葡聚糖酶解透明圈菌株SHZ-24、SHT-15清晰，BHZ-29、SMT-24邊緣模糊，界限不清。圖1

研究表明，SHZ-24菌株幾丁質(zhì)酶解圈與其他處理組間差異顯著，酶解外徑為(14.85±0.15) mm。蛋白酶透明圈外徑大小均與對(duì)照組差異極顯著，SHZ-24菌株蛋白酶解圈最大，達(dá)(28.85±0.37) mm；葡聚糖酶解圈外徑大小組間差異均顯著，SMT-24菌株葡聚糖酶解圈最大，達(dá)(36.50±0.36) mm。BHZ-29、SMT-24、SHT-15菌株之間纖維素酶透明圈外徑大小對(duì)照組差異顯著，最大為(17.50±0.42) mm。表1

注：1～4分別代表SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24，CK為空白對(duì)照

Note： 1-4 respectively represent SMT-24, BHZ-29, SHT-15, shz-24,CK as blank control

圖1 平板透明圈法初測(cè)結(jié)果

Fig.1InitialtestresultsofPlatecultureandclearzonesmethods

表1 酶解透明圈外徑及方差
Table 1 Analysis of size and variance of enzymatic transparent circles

酶解圈外徑 Enzyme solution outside diameter (mm)幾丁質(zhì)酶Chitinase蛋白酶Protease葡聚糖酶Glucanase纖維素酶CellulaseSMT-246.00±0b27.78±0.71b36.50±0.36a16.33±0.51aBHZ-296.00±0b27.10±0.34b32.09±0.13b17.50±0.42aSHT-156.00±0b25.45±0.34c29.53±0.33c16.68±0.30aSHZ-2414.85±0.15a28.85±0.37a24.03±0.27d6.00±0b對(duì)照 Control6.00±0b6.00±0d6.00±0e6.00±0b

注：不同的字母代表同一種酶不同菌種間的差異顯著(P<0.05)

Note： Different letters represent a significant difference between different strains of the same enzyme (P<0.05)

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線、N-乙酰氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線、L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)應(yīng)線性方程分別為y1=13.289x1-0.115 6、y2=11.111x2-0.130 3、y3=0.070 6x3-0.002，相關(guān)性系數(shù)分別為0.998 6、0.998 9、0.999，線性關(guān)系良好。

2.3 SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24拮抗菌株產(chǎn)幾丁質(zhì)酶活性測(cè)定

研究表明，SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株數(shù)量在0～132 h內(nèi)出現(xiàn)先快速增加后減小，最后趨于穩(wěn)定。SMT-24、BHZ-29、SHT-15菌株幾丁質(zhì)酶活均低于3.00 IU表明該三株菌產(chǎn)幾丁質(zhì)酶低或不產(chǎn)幾丁質(zhì)酶，酶活0～132 h內(nèi)無變化，酶活不受生物量的影響。SHZ-24酶活0～36 h幾丁質(zhì)酶活呈現(xiàn)指數(shù)型增長(zhǎng)，36～108 h增長(zhǎng)緩慢，108 h達(dá)到最大值(12.37±0.15) IU，108～132 h呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，細(xì)菌對(duì)數(shù)期與酶活呈正相關(guān)。圖2

注：A～D分別是菌株SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24幾丁質(zhì)酶活變化

Note： A-D are chitinase activity changes of strains SMT-24, BHZ-29, SHT-15 and SHZ-24, respectively

圖2 SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24拮抗菌株幾丁質(zhì)酶活變化
Fig.2 Results of chitinase activity change of SMT-24, BHZ-29, SHT-15 and SHZ-24 antagonistic strains

2.4 SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24拮抗菌株蛋白酶活測(cè)定

研究表明，SMT-24、BHZ-29、ShT-15、SHZ-24菌株細(xì)菌數(shù)量在0～36 h逐漸增加，36 h后細(xì)菌數(shù)量先下降最終維持穩(wěn)定。SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24蛋白酶活在0～12 h迅速增加，隨后緩慢增加，SMT-24、BHZ-29、SHZ-24菌株在84 h蛋白酶活達(dá)到最大值分別為(21.21±0.54) IU、(8.65±0.35) IU、(24.22±0.45) IU，SHT-15菌株在108 h蛋白酶活達(dá)到最大值(17.78±0.21) IU，84 h后SMT-24、BHZ-29、SHZ-24蛋白酶活緩慢下降，SHT-15酶活達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。蛋白酶活受對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的細(xì)菌的影響最大，呈正相關(guān)。圖3

注：A～D分別是菌株SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24蛋白酶活變化

Note： A-D are protease activity changes of strains SMT-24, BHZ-29, SHT-15 and SHZ-24, respectively

圖3 SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24拮抗菌株蛋白質(zhì)酶活變化
Fig.3 Results of protease activity changes of SMT-24, BHZ-29, SHT-15 and SHZ-24 antagonistic strains

2.5 SMT-24、BHZ-29、SMT-15、SHZ-24拮抗菌株葡聚糖酶活測(cè)定

研究表明，SMT-24、BHZ-29菌株細(xì)菌數(shù)量出現(xiàn)先迅速上升后下降，最終維持細(xì)菌數(shù)穩(wěn)定，SHT-15、SHZ-24菌株細(xì)菌數(shù)量先上升后維持穩(wěn)定。SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株葡聚糖酶活整體呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢(shì)，SMT-24、SHT-15、SHZ-24菌株葡聚糖酶活在上升階段增長(zhǎng)較快，BHZ-29菌株酶活在上升階段0～12 h增長(zhǎng)快速隨后緩慢增加，SMT-24、BHZ-29菌株葡聚糖酶在84 h達(dá)到最大值，分別為(12.29±0.23) IU、(9.16±0.46) IU，SHT-15菌株葡聚糖酶活在60 h達(dá)到最大值(12.07±0.59) IU，SHZ-24菌株在36 h葡聚糖酶活達(dá)到最大值(8.12±0.25) IU。SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株在0～12 h菌株生物量與酶活呈正相關(guān)發(fā)展趨勢(shì)。圖4

注：A～D分別是菌株SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24葡聚糖酶活變化

Note： A-D are glucanase activity changes of strains SMT-24, BHZ-29, SHT-15 and SHZ-24, respectively

圖4 SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株葡聚糖酶活變化
Fig.4 Results of glucanease activity changes of SMT-24, BHZ-29, SHT-15 and SHZ-24 antagonistic strains

2.6 SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株纖維素酶活性測(cè)定

研究表明，BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株在纖維酶發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)60 h達(dá)到最大，生長(zhǎng)期較長(zhǎng)。SMT-24菌株細(xì)菌數(shù)量60 h后下降，SMT-24、SHZ-24菌株數(shù)量60 h后均維持穩(wěn)定。SMT-24菌株生長(zhǎng)緩慢，0～36 h增長(zhǎng)幅度較小,30～108 h先下降后達(dá)到穩(wěn)定，穩(wěn)定后的細(xì)菌數(shù)量低于接種量。SMT-24、BHZ-29、SHT-15菌株纖維素酶活在0～84 h為上升階段，84 h達(dá)到最大值，分別為(6.43±0.24) IU、(5.80±0.12) IU、(4.81±0.04) IU，84～108 h纖維素酶活下降，SHZ-24菌株纖維素酶活低于3.00 IU，且0～108 h酶活性無變化，SHZ-24菌株不產(chǎn)纖維素酶或者產(chǎn)纖維素酶較低。SMT-24、BHZ-29、SHT-15菌株纖維素酶活受細(xì)菌對(duì)數(shù)期影響較大，呈正相關(guān)。SHZ-24菌株纖維素酶活性不受生物量影響。圖5

注：A～D分別是菌株SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24纖維素酶活與生物量變化

Note： A-D are activity cellulase changes of strains SMT-24, BHZ-29, SHT-15 and SHZ-24, respectively

圖5 SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株纖維素酶活變化
Fig.5 Results of cellulase activity changes of SMT-24, BHZ-29, SHT-15 and SHZ-24 antagonistic strains

2.7 SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株酶活大小比較

研究表明，SHZ-24菌株幾丁質(zhì)酶活最大，SMT-24、BHZ-29、SHT-15酶活曲線重合，表明該三株菌幾丁質(zhì)酶活大小相同。SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株蛋白酶活大小為：SHZ-24> SMT-24> SHT-15> BHZ-29。葡聚糖酶活整體SMT-24、SHT-15菌株較大，BHZ-29菌株次之，SHZ-24菌株葡聚糖酶活最小。纖維素酶活大小比較為SMT-24> BHZ-29> SHT-15> SHZ-24菌株。圖6

注：A～D分別代表幾丁質(zhì)酶、蛋白酶、葡聚糖酶、纖維素酶

Note： A-D represent chitinase, protease, glucanase and cellulase, respectively

圖6 SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株酶活大小比較
Fig.6 Comparing the Enzyme Activity of SMT-24, BHZ-29, SHT-15 and SHZ-24

3 討 論

根據(jù)測(cè)定與DNS法酶活測(cè)定結(jié)果，蛋白酶、纖維素酶活、葡聚糖酶活與平板的透明圈外徑大小不一致，表明透明圈外徑大小與液體樣品的酶活之間的正相關(guān)關(guān)系并不是絕對(duì)的，僅以透明圈徑大小作為菌株產(chǎn)酶能力的唯一定量指標(biāo)并不可靠，這在蔣明星、包衎等[21,22]的研究中也出現(xiàn)類似情況。可能原因是酶活受培養(yǎng)基狀態(tài)的影響，細(xì)菌在固體平板生長(zhǎng)分泌的酶活與在發(fā)酵液中生長(zhǎng)產(chǎn)酶活性存在差異，另外蛋白酶固體平板中營(yíng)養(yǎng)成分與液體發(fā)酵培養(yǎng)基的成分不同也是造成酶活差異的原因之一。細(xì)菌在衰退期時(shí)隨著發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng)酶活有不同程度的降低，這可能是隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，代謝物積累，細(xì)胞凋亡，發(fā)酵液pH降低，從而降低酶活。4株拮抗菌產(chǎn)酶類豐富，蛋白酶在飼料、皮革、食品方面應(yīng)用廣泛[23]，4株拮抗菌均可作為產(chǎn)蛋白酶來源菌株及其他產(chǎn)酶來源菌株。

4 結(jié) 論

SMT-24、BHZ-29、SHT-15、SHZ-24菌株均分泌幾丁質(zhì)酶、蛋白酶、葡聚糖酶、纖維素酶；在發(fā)酵期間酶活總體呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢(shì)，酶活性受細(xì)菌對(duì)數(shù)期影響最大，酶活性與拮抗細(xì)菌對(duì)數(shù)期呈正相關(guān)關(guān)系(酶活低于3.00 IU除外)；4株拮抗菌酶活比較中，SHZ-24菌株產(chǎn)幾丁質(zhì)酶活最高，酶活最高為(12.37±0.15) IU，SHZ-24菌株產(chǎn)蛋白酶活最高，最高值達(dá)(24.22±0.45) IU，SMT-24、SHT-15菌株產(chǎn)葡聚糖酶活較高，最高酶活分別(12.29±0.23) IU、(12.07±0.59) IU，SMT-24菌株產(chǎn)纖維素酶活最高，酶活最高達(dá)(6.43±0.24) IU。