陳亞濱 石美霞 楊 馳

(韓山師范學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，廣東 潮州 521041)

車前草，又名車前、車輪草等。常產(chǎn)于中國(guó)多省地，生于草地、溝邊、河岸濕地、田邊、路旁或村邊空曠處，海拔3～3200米。朝鮮、俄羅斯(遠(yuǎn)東)、日本、尼泊爾、馬來(lái)西亞、印度尼西亞也有分布。車前草為傳統(tǒng)藥草，味甘，性寒。具有利尿、清熱、明目、祛痰等藥理作用的功效。車前草中主要有效成分是熊果酸、車前普、桃葉珊瑚普等。

熊果酸，又稱烏蘇酸，具特殊的氣味，是存在于天然植物中的一種五環(huán)三萜類化合物。研究表明，熊果酸具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。它不僅對(duì)多種致癌、促癌物有抵抗作用，而且對(duì)多種惡性腫瘤細(xì)胞有抑制生長(zhǎng)作用。同時(shí)它還具有抗突變、抗氧化和誘導(dǎo)癌細(xì)胞分化及增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能等方面的作用。

因此，為了更好地研究車前草中根莖葉熊果酸的含量以及各部位抗腫瘤活性的能力，將采用醇凝提析法進(jìn)行研究。醇凝提析法，利用的是某物質(zhì)能溶于乙醇而不溶于水的性質(zhì)，由于乙醇能與任意比例水互溶，因此當(dāng)向某物質(zhì)的乙醇溶液加入大量水時(shí)，由于乙醇都溶于水中了而使某物質(zhì)從水-乙醇溶液中大量析出，析出物可從水-乙醇溶液中分離出來(lái)。

1 材料與儀器

1.1 材料試劑

車前草，采摘于潮州市湘橋區(qū)的鄉(xiāng)村小路旁。

無(wú)水乙醇、蒸餾水。

1.2 儀器設(shè)備

紫外可見分光光度計(jì)、超聲波提取器Waters-515型雙泵高效液相色譜儀。

2 實(shí)驗(yàn)方法①

2.1 實(shí)驗(yàn)步驟

2.1.1 車前草樣品的準(zhǔn)備

將采摘的車前草洗凈曬干，將根莖葉部分分別剪碎，磨成粉末，配置成溶液，分別命名為車前草根標(biāo)液、車前草莖標(biāo)液、車前草葉標(biāo)液。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精密稱取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg，定容至100ml容量瓶中，即得0.100mg/ml熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.1.3 以蒸餾水為參比液，分別測(cè)定熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液、車前草根標(biāo)液、車前草莖標(biāo)液、車前草葉標(biāo)液在波長(zhǎng)500～600nm范圍內(nèi)的吸光度值，記錄數(shù)據(jù)，做出曲線。

表1 熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液吸光度

圖1 標(biāo)樣熊果酸

波長(zhǎng)/nm500510520530540542544548550560D葉0.0140.0180.0220.0230.0240.0240.0250.0270.0230.023D莖0.0230.0270.030.0320.0330.0340.0360.0370.0350.032D根0.0730.0760.080.0810.0820.0850.0860.0880.0840.083D葉570580590600D莖0.0230.0220.0220.021D根0.030.0260.0250.024D葉0.0810.0760.0730.07

圖2 根莖葉吸光度

通過對(duì)比分析可知，車前草葉的熊果酸含量最多，莖含量最少。

3 實(shí)驗(yàn)方法②

高效液相色譜法：

3.1 色譜條件

色譜柱為C，q ODS柱(46imn×150min)，柱溫40。流動(dòng)相為甲醇—0.4%。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取熊果酸對(duì)照品2.85mg，定容至25ml量瓶中，搖勻。配成濃度為0.1206mg/ml的對(duì)照品溶液。

分別進(jìn)樣上述濃度為0.1206mg/ml的熊果酸對(duì)照品溶液4mg、8mg、12mg、16mg、20mg，記錄峰面積。以熊果酸進(jìn)樣質(zhì)量的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)。峰面積的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.得回歸方程：

Y=1.20×105X+1.44×104，r=0.9999結(jié)果表明熊果酸在4.4～21mg之間時(shí)，線性關(guān)系良好。

圖3 對(duì)照品溶液的HPLC譜圖

3.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取車前草樣品溶液，每隔2h進(jìn)樣測(cè)定1次。重復(fù)測(cè)定5次。測(cè)定持續(xù)13h記錄熊果酸的峰面積，測(cè)定含量結(jié)果樣品溶液在13h內(nèi)測(cè)定，穩(wěn)定性良好。

3.4 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取車前草樣品溶液進(jìn)樣分析，lOL進(jìn)樣，重復(fù)5次，測(cè)得熊果酸峰面積RSD為1.22%(n=5)。

3.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品5份，吸取lOL進(jìn)樣分析，結(jié)果熊果酸平均含量為93.56%，RSD為1.08%(n=5)。

兩種實(shí)驗(yàn)方法均表明，車前草各部分熊果酸的不同含量中，葉的熊果酸含量最多，莖含量最少。

4 結(jié)論

車前草根莖葉中均含有熊果酸，且葉的熊果酸含量最多，根部其次，莖含量最少。因此，我們就可以推知，在藥用方面，車前草的葉是最有價(jià)值的。值得我們?nèi)パ芯块_發(fā)的。