李 亮 吳文慧

(1.宜春市食品稽查支隊(duì)，江西 宜春 336000；2.江西省食品藥品安全監(jiān)控中心，江西 南昌 330029)

脂質(zhì)體自20世紀(jì)70年代開始作為藥物載體應(yīng)用以來，由于具有制備簡單，對(duì)人體無害，無免疫原性反應(yīng)，易實(shí)現(xiàn)靶向性，可提高和延長藥物療效，緩和毒性，避免耐藥性和改變給藥途徑等優(yōu)點(diǎn)備受重視。脂質(zhì)體在儲(chǔ)存過程中，由于藥物滲漏、粒子的聚集以及磷脂在液態(tài)下的氧化水解等原因易被破壞使得脂質(zhì)體的應(yīng)用范圍極大程度的受到其穩(wěn)定性的限制。本研究以粒徑、Zeta電位、電導(dǎo)率、pH值等為主要指標(biāo)研究液態(tài)薏苡仁油脂質(zhì)體在儲(chǔ)藏過程中理化性質(zhì)和穩(wěn)定性變化[1][2]。

1 材料與設(shè)備

紫外一可見分光光度計(jì)(UV一1700)：島津UV一1700；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(RE-52AA)：上海亞榮生化儀器廠；激光動(dòng)態(tài)散射儀：英國Malvern公司；氣相色譜儀；Agilent6890型；數(shù)控超聲波清洗器(S KQ5200DB)：昆山市超聲儀器有限公司；精密pH計(jì)(pHS-3C)：上海雷磁；電子天平：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；離心機(jī)TGL—16C：上海飛鴿。

大豆卵磷脂：上海源聚生物科技有限公司；膽固醇BR級(jí)：上海政翔化學(xué)試劑研究所；薏苡仁油：廣州合誠實(shí)三生物有限公司；PBS(pH值分別為 6.8和7.4，按《中華人民共和國藥典》2015版標(biāo)準(zhǔn) 自制)；重蒸餾水；其余試劑：國產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 離心實(shí)驗(yàn)

用蒸餾水將薏苡仁油脂質(zhì)體稀釋，把不同稀釋度的薏苡仁油脂質(zhì)體以4500r/min離心不同時(shí)間，觀察是否分層，并觀察離心后的分層情況。

表1 不同稀釋倍數(shù)薏苡仁油脂質(zhì)體離心穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)

(1)分層的薏苡仁油脂質(zhì)體都分為上、中、下三層：

濾紙擴(kuò)散面積：上﹤中﹤下

視野下脂質(zhì)體粒子數(shù)目：上>中>下

濁度：上>中>下

粒徑：上>中>下(差距不大)

(2)將已經(jīng)分層的各層物質(zhì)再混合在一起，依然混合得很均勻，且在顯微鏡下觀察和分層前沒有區(qū)別，粒徑也沒有很大變化。離心實(shí)驗(yàn)說明脂質(zhì)體液被稀釋的倍數(shù)越高，粘度越小，越易分層(離心提高重力加速度，脂質(zhì)體粒子與水相比重差加大，促進(jìn)分層)。說明液態(tài)脂質(zhì)體在未加入增稠劑的情況下不穩(wěn)定，易分層[5]。

2.2 不同儲(chǔ)藏溫度條件下的穩(wěn)定性考察

將新制備的脂質(zhì)體置于4℃、35℃、45℃的恒溫環(huán)境下20天，每4天定時(shí)測(cè)定黏度值、pH值、電導(dǎo)率結(jié)果如下。

表2 4℃儲(chǔ)藏穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

表3 35℃儲(chǔ)藏穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

表3 45℃儲(chǔ)藏穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

圖1 不同儲(chǔ)藏溫度下脂質(zhì)體PH值隨時(shí)間變化規(guī)律

圖2 不同儲(chǔ)藏溫度下脂質(zhì)體電導(dǎo)值隨時(shí)間變化規(guī)律

圖3 不同儲(chǔ)藏溫度下脂質(zhì)體黏度隨時(shí)間變化規(guī)律

2.3 4℃下脂質(zhì)體粒度與Zeta電位隨時(shí)間的變化規(guī)律

zeta電位是一個(gè)表征分散體系穩(wěn)定性的重要指標(biāo)。由于帶電微粒吸引分散系中帶相反電荷的粒子，離顆粒表面近的離子被強(qiáng)烈束縛著，而那些距離較遠(yuǎn)的離子形成一個(gè)松散的電子云，電子云的內(nèi)外電位差就叫作Zeta電位。測(cè)定懸浮顆粒的Zeta電位求得其絕對(duì)值，以其大小來表征懸浮穩(wěn)定性。當(dāng)懸浮微粒表面的電荷密度較高(大于30mV)時(shí)，即有絕對(duì)值較高的Zeta電位，微粒表面的高電荷密度使微粒間產(chǎn)生較大的靜電排斥力，使得懸浮液保持較高的穩(wěn)定性。而當(dāng)Zeta電位的絕對(duì)值小于25mV時(shí)，微粒之間的靜電斥力 液體系的不穩(wěn)定，電位值的高低與懸浮液的濃度沒有關(guān)系[5]。

選取4℃儲(chǔ)藏的脂質(zhì)體，考察其粒度與Zeta電位隨時(shí)間的變化規(guī)律。每10天為一個(gè)測(cè)定點(diǎn)，結(jié)果如下：

圖4 脂質(zhì)體儲(chǔ)藏的第1天的粒度與Zeta電位

圖5 脂質(zhì)體儲(chǔ)藏第10天的粒度與Zeta電位

圖6 第20天的粒度與Zeta電位

從上圖可知第1天測(cè)量的平均粒度303.8nm，Zeta電位為-28.57mV；第10天測(cè)量的平均粒度為296.6nm，Zeta電位為-22.2mV；第20天測(cè)量的粒度為222.5nm，Zeta電位為-19.34mV。 三次所測(cè)粒度的平均數(shù)值分別為：303.8nm，296.6nm，222.5nm及粒度的平均值依次減小，這說明隨著時(shí)間的推移，脂質(zhì)體中的較大顆?；螂s質(zhì)已凝聚或沉降，剩下的脂質(zhì)體顆粒粒度較小。本制劑所帶電荷為負(fù)電且其絕對(duì)值小于30mV說明，制備的脂質(zhì)體不夠穩(wěn)定所以才會(huì)凝聚導(dǎo)致粒度下降。三次所測(cè)的zeta平均電位分別為：-25.57mV，-22.2mV，-19.34mV，電位值逐漸減小，可能是由于磷脂水解產(chǎn)生大量的帶正電荷的離子的原因[5]。

本制劑所帶電荷為負(fù)電且其絕對(duì)值小于30mV說明，制備的脂質(zhì)體不夠穩(wěn)定所以才會(huì)凝聚導(dǎo)致粒度下降。三次所測(cè)的zeta平均電位分別為：-25.57mV，-22.2mV，-19.34mV，電位值逐漸減小，可能是由于磷脂水解產(chǎn)生大量的帶正電荷的離子的原因[5]。

2.4 液態(tài)薏苡仁油脂質(zhì)體中的油酸、亞油酸在儲(chǔ)藏過程中的變化

采用氣相柱為CP-Sil 88熔融石英毛細(xì)管柱(100m×0.25mm，Chrompack，Bridgewater，NJ)，H2為載氣，燃燒氣體為H2、N2和空氣。升溫程序?yàn)椋?5℃/4min—(13℃/min)—175℃/27min—(4℃/min)—215℃/35min，測(cè)定時(shí)間為86min；氣相的進(jìn)樣品條件：進(jìn)樣口溫度250℃，壓力24.52psi。氣相柱的柱壓為24.52psi，柱內(nèi)流速為1.8ml/min。檢測(cè)器的溫度：250℃。FID檢測(cè)器氫氣流速為30.0ml/min；空氣流速為300ml/min；氮?dú)饬魉贋?0.0mL/min[2]。

考察乙醇注入—超聲法制備的液態(tài)薏苡仁油脂質(zhì)體，在4℃的條件下儲(chǔ)藏過程中油酸與亞油酸含量變化如下：

圖7 新制備好的薏苡仁油脂質(zhì)體中的氣相譜圖

脂肪酸保留時(shí)間[min]類型峰寬[min]峰面積[pA*s]峰高[pA]相對(duì)含量%油酸35.134BV0.14281939.066174.257447.71642亞油酸39.687BB0.13561277.535125.721931.4375

圖8 放置10天后薏苡仁油脂質(zhì)體的氣相譜圖

脂肪酸保留時(shí)間[min]類型峰寬[min]峰面積[pA*s]峰高[pA]相對(duì)含量%油酸34.791BV0.1099329.18945.250633.41659亞油酸39.041BB0.1184220.526528.1449822.38606

圖9 放置20天后薏苡仁油脂質(zhì)體中譜圖

脂肪酸保留時(shí)間[min]類型峰寬[min]峰面積[pA*s]峰高[pA]相對(duì)含量%油酸34.898VB0.0857175.141631.0984532.60797亞油酸39.478BB0.0981118.162218.1107821.9995

油酸與亞油酸是薏苡仁油的主要功能性成分，對(duì)比新制備的薏苡仁油脂質(zhì)體和放置10天與20天之后的脂質(zhì)體中的的油酸和亞油酸含量發(fā)現(xiàn)，油酸和亞油酸含量比較穩(wěn)定，經(jīng)過二十天后減少得比較少?？梢娭|(zhì)體能夠比較好的保護(hù)其中的薏苡仁油不被氧化[5]。

3 結(jié)論與討論

從脂質(zhì)體離心實(shí)驗(yàn)可以看出液態(tài)脂質(zhì)體不穩(wěn)定，要穩(wěn)定保存液態(tài)脂質(zhì)體，必須加入增稠劑或盡可能的減小脂質(zhì)體的粒度。

實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)的三個(gè)溫度段中，脂質(zhì)體的pH值均下降了，是由于磷脂的水解產(chǎn)生了H+離子。從而使緩沖溶液的pH值下降了。從儲(chǔ)藏終點(diǎn)的pH值可以看出，磷脂穩(wěn)定的最適pH值為6.5。所以在脂質(zhì)體儲(chǔ)藏過程中可以調(diào)節(jié)好磷酸緩沖溶液的pH值使其為6.5，通過這一途徑可以在一定程度上抑制磷脂的水解，避免其產(chǎn)生過氧化物、丙二醛、脂肪酸及溶血卵磷脂等。實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)的三個(gè)溫度段中，電導(dǎo)值隨時(shí)間的推移都明顯增大，說明脂質(zhì)體在有水存在的情況下很不穩(wěn)定，磷脂水解產(chǎn)生大量的帶電離子。由此可見將液態(tài)脂質(zhì)體干燥的必要性質(zhì)。溫度越高，電導(dǎo)值增加得越多。對(duì)比其電導(dǎo)率增大的速率得出4℃時(shí)，為其儲(chǔ)藏較穩(wěn)定溫度。

實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)的三個(gè)溫度段中，4℃時(shí)的脂質(zhì)體粘度值隨時(shí)間的推移基本保持恒定，35℃、45℃時(shí)的脂質(zhì)體粘度值隨時(shí)間推移會(huì)略有下降。溫度越高，粘度值下降得越多。黏度數(shù)據(jù)同樣說明了在4℃時(shí)液態(tài)脂質(zhì)體相對(duì)較穩(wěn)定。這說明脂質(zhì)體雙分子層的穩(wěn)定性與貯藏溫度有密切的關(guān)系，溫度升高，脂質(zhì)體雙分子層中的?；鶑挠行蜃?yōu)闊o序排列，膜由凝膠態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橐壕B(tài)，流動(dòng)性增加，包封的薏苡仁油出現(xiàn)泄漏[3]。

由于脂質(zhì)體表面形成擴(kuò)散雙電層，在雙電層的滑動(dòng)面上產(chǎn)生電動(dòng)電位，稱為Zeta電位。荷電的脂質(zhì)體能夠減少脂質(zhì)體微粒間的聚集和融合，增加脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。制備的液態(tài)薏苡仁油脂質(zhì)體zeta電位值小于30mV不夠穩(wěn)定所以會(huì)凝聚導(dǎo)致粒度下降。三次所測(cè)的zeta平均電位分別為：-25.57mV，-22.2mV，-19.34mV，電位值逐漸減小，是由于磷脂水解產(chǎn)生大量的帶正電荷的離子的原因。