李會(huì)晨 李梓萱 洪洙
結(jié)直腸癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤,在我國(guó)其發(fā)病率和死亡率分別位于惡性腫瘤的第3位和第5位,每年新增25萬(wàn)多病人和約14萬(wàn)人死于該疾病[1-2],其中散發(fā)性結(jié)直腸癌(sporadic colorectal cancer,SCRC)約占85%,遺傳性非息肉結(jié)直腸癌 (hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)約為10%~15%[3]。SCRC主要受環(huán)境、飲食、生活習(xí)慣、慢性炎癥的影響從而引發(fā)“管理員基因”和“門(mén)衛(wèi)基因”的突變,使得抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞死亡和維持細(xì)胞穩(wěn)定性的機(jī)制被打亂,其中微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability, MSI)參與了SCRC的發(fā)生,其發(fā)生率為12%~15%[4]。目前的研究表明MSI狀態(tài)與SCRC的預(yù)后以及腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性相關(guān),本文將圍繞MSI在SCRC中的研究現(xiàn)狀及其展望進(jìn)行綜述。
微衛(wèi)星DNA,是由1~6個(gè)核苷酸組成的簡(jiǎn)單串聯(lián)重復(fù)的DNA序列,常見(jiàn)的有2、3、4核苷酸重復(fù)序列,尤其以二核苷酸的重復(fù)序列(CA/GT)n最為常見(jiàn)[5]。1981年Miesfeldd等[6]首次發(fā)現(xiàn)微衛(wèi)星DNA, 后發(fā)現(xiàn)其廣泛分布于真核生物的基因組中,約占真核基因組的5%。
MSI是指腫瘤細(xì)胞與正常的組織細(xì)胞相比,由于重復(fù)堿基的缺失或插入而導(dǎo)致的正常微衛(wèi)星長(zhǎng)度改變的現(xiàn)象[7]。該現(xiàn)象是錯(cuò)配修復(fù)基因MLH1、PMS2、MSH2、 MSH6、MLH3、MSH3等變異引起,進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞增生及分化異常,從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。2001年Fukushima等[8]研究發(fā)現(xiàn),MSI的發(fā)生顯著提高了基因的隨機(jī)突變率,尤其是導(dǎo)致了腫瘤相關(guān)基因的突變,是引起腫瘤發(fā)生的一個(gè)重要機(jī)制。2010年Iacopetta等[9]也發(fā)現(xiàn)MSI能夠?qū)е露喾N抑癌基因如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體2和編碼BAX蛋白的基因失活,同時(shí)活化一些癌基因如BRAF基因,從而促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生。
1993年,Thibodeau等[10]首先在HNPCC發(fā)現(xiàn)MSI現(xiàn)象,隨后在各種散發(fā)性腫瘤如胃癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、前列腺癌和胰腺癌中均發(fā)現(xiàn)存在MSI。研究表明,結(jié)直腸癌MSI總發(fā)生率在15%~20%,其中SCRC為12%~15%。1997年Kane等[11]通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)66例SCRC樣本的研究結(jié)果表明,hMLH1表達(dá)缺失與hMLH1基因啟動(dòng)子甲基化存在相關(guān)性。2005年董銳增[12]對(duì)70例散發(fā)性多原發(fā)大腸癌病人的124個(gè)存檔蠟塊和隨訪3年以上的35例散發(fā)性單原發(fā)大腸癌病人的腫瘤組織進(jìn)行MSI測(cè)定,發(fā)現(xiàn)散發(fā)性多原發(fā)大腸癌中25.8%的腫瘤表現(xiàn)高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(high-frequency microsatellite instability, MSI-H),單原發(fā)大腸癌為5.7%,其中同時(shí)多原發(fā)大腸癌MSI陽(yáng)性率為15.6%,異時(shí)多原發(fā)大腸癌為36.7%,MSI可以作為一個(gè)重要的獨(dú)立的危險(xiǎn)因素預(yù)測(cè)異時(shí)大腸癌的發(fā)生,亦可作為一個(gè)重要指標(biāo)判斷散發(fā)性多原發(fā)大腸癌病人的預(yù)后。2006年Sarli等[13]隨機(jī)選擇108例SCRC病人,對(duì)抑癌基因p27的表達(dá)和MSI狀態(tài)之間的相關(guān)性進(jìn)行研究,結(jié)果顯示59%MSI的SCRC中p27基因表達(dá)發(fā)生改變,而微衛(wèi)星穩(wěn)定的SCRC中改變率僅為24%,推測(cè)MSI可能參與了SCRC的發(fā)生。同年Dove-Edwin等[14]研究數(shù)據(jù)顯示HNPCC從小腺瘤到癌的轉(zhuǎn)變僅需3~5年,而大多數(shù)散發(fā)癌則需要20~40年。發(fā)病年齡上,通常散發(fā)性 MSI 結(jié)直腸癌比Lynch綜合征的病人發(fā)病年齡大[12]。2007年Sinicrope等[15]對(duì)329例結(jié)直腸癌病人的MSI展開(kāi)研究,發(fā)現(xiàn)MSI與SCRC的發(fā)生、發(fā)展相關(guān),而且MSI僅在腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn),未在與腫瘤相鄰的正常組織及周?chē)准?xì)胞中被發(fā)現(xiàn)[15]。
這些研究證實(shí)MSI與SCRC發(fā)生密切相關(guān), 也有文獻(xiàn)報(bào)道MSI-H的SCRC病人通常伴隨著B(niǎo)RAF-V600E突變。2004年Deng等[16]對(duì)26株結(jié)直腸癌細(xì)胞系、80例SCRC以及20例HNPCC樣本的BRAF基因突變和hMLH1基因甲基化進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)BRAF基因突變高頻出現(xiàn)在hMLH1甲基化的SCRC中(87%),而HNPCC中沒(méi)有檢測(cè)到BRAF基因突變,SCRC的MSI通常伴隨著B(niǎo)RAF基因突變。同年Domingo等[17]檢測(cè)206例MSI-H的SCRC樣本和111例HNPCC樣本的BRAF-V600E突變,結(jié)果顯示40% (82/206) MSI-H的 SCRC樣本中檢測(cè)到BRAF-V600E突變,而HNPCC中都沒(méi)有檢測(cè)到,MSI結(jié)合BRAF-V600E與SCRC發(fā)生密切相關(guān)。2010年Hall等[18]發(fā)現(xiàn)BRAF V600E突變僅見(jiàn)于MSI 高的SCRC中。2011年Fearon[19]也發(fā)現(xiàn)MSI-H的SCRC中,很大一部分是由 MLH1啟動(dòng)子 CpG 島超甲基化所引起,通常與 BRAF-V600E突變有關(guān)。2015年Karahan等[20]研究結(jié)果表明 IHC 標(biāo)記的相關(guān)蛋白與 MSI 腫瘤的病理特征相關(guān),如 MLH1、PMS2 表達(dá)缺失與病發(fā)于右半結(jié)腸、黏液樣分化差、密集的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)。錯(cuò)配修復(fù)(MMR)蛋白表達(dá)缺失可能預(yù)示腫瘤的低度惡性;MSH2 和 MSH6 的表達(dá)缺失率隨著 SCRC 腫瘤體積的增大而增加,其表達(dá)可能參與SCRC腫瘤的進(jìn)展過(guò)程;MLH1與MSH2基因的突變始終作用于SCRC 腫瘤的發(fā)展[21]。2016年汪加亮等[22]研究顯示結(jié)直腸癌高頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定與 BRAF 基因突變之間存在密切關(guān)系,并且微衛(wèi)星不穩(wěn)定及 kras基因等與疾病預(yù)后同樣具有密切關(guān)系。2015年Hurtado等[23]的研究發(fā)現(xiàn),MSI-H現(xiàn)象和BRAF突變常多見(jiàn)于右半結(jié)腸,推測(cè)右半結(jié)腸癌和左半結(jié)腸癌存在不同的分子學(xué)特征, MSI或 BRAF突變的結(jié)腸癌病人發(fā)生腫瘤擴(kuò)散的可能性較小,而存在kras突變者腫瘤擴(kuò)散可能性增加。
多項(xiàng)研究證實(shí)MSI狀態(tài)可預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌病人預(yù)后。2005年P(guān)opat等[24]對(duì)32項(xiàng)研究Meta分析,共計(jì)7 642例Ⅰ~ Ⅳ期的結(jié)直腸癌病人,其中1 277例為MSI-H的結(jié)直腸癌病人,分析結(jié)果顯示MSI-H的結(jié)直腸癌病人的預(yù)后顯著優(yōu)于微衛(wèi)星穩(wěn)定性(microsatellite stable, MSS)的結(jié)直腸癌病人:MSI-H的病人的總生存風(fēng)險(xiǎn)比為0.65(95%置信區(qū)間為0.59~0.71),MSI-H結(jié)腸癌病人的死亡率比非MSI-H腫瘤病人低35%左右。2012年Roth 等[25]對(duì)1 404例年齡在14~76歲 Ⅱ/Ⅲ期結(jié)直腸癌術(shù)后病人追蹤觀察,研究結(jié)果表明與MSS的結(jié)直腸癌相比,MSI-H的結(jié)直腸癌病人預(yù)后更好,無(wú)病生存期(disease-free survival,DFS)和總生存期更長(zhǎng)(overall survival,OS)。2016年Kim等[26]對(duì)2 940例經(jīng)過(guò)根治性手術(shù)的Ⅰ~Ⅲ期結(jié)直腸癌病人(其中MSI-H病人261例)臨床觀察發(fā)現(xiàn),與MSS和低度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(low frequency microsatellite instability, MSI-L)病人相比,MSI-H病人具有更好的DFS和OS。
化療是結(jié)直腸癌病人術(shù)后一個(gè)重要的輔助治療手段,多名學(xué)者就結(jié)直腸癌性和散發(fā)性MSI與化療之間相關(guān)性進(jìn)行研究。2010年Sargent等[27]對(duì)457例Ⅱ期、Ⅲ期結(jié)直腸癌病人采用5-Fu為基礎(chǔ)的化療方案治療,發(fā)現(xiàn)具有MMR缺陷的病人并沒(méi)有體現(xiàn)出更好的生存率,甚至MMR缺陷的Ⅱ期結(jié)直腸癌病人術(shù)后總體生存率明顯降低。2010年Vilar等[28]研究發(fā)現(xiàn)5-Fu用于 MSI高的Ⅱ期結(jié)直腸癌病人的輔助化療無(wú)益,提示可能與病人的錯(cuò)配修復(fù)缺陷相關(guān)。由于預(yù)后良好且5-Fu輔助化療療效欠佳。2009年Jover等[29]以505例Ⅱ和Ⅲ期術(shù)后結(jié)直腸病人為研究對(duì)象,5年隨訪發(fā)現(xiàn)76例MSI-H病人并未從5-Fu輔助化療方案中獲益。2010年Guastadisegni 等[30]MSI狀態(tài)對(duì)結(jié)直腸癌病人接受5-Fu化療的臨床意義進(jìn)行了Meta分析,納入31項(xiàng)研究共計(jì)12 782例病人,結(jié)果證實(shí)病人的MSI狀態(tài)均與其DFS和OS相關(guān)。MSS病人可以從5-Fu輔助化療中獲益,而MSI-H的病人的生存結(jié)局尚未顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
目前,臨床中的MSI檢測(cè)方法主要有聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法和免疫組織化學(xué)(IHC)法。
1.PCR法 臨床主要采用多重?zé)晒釶CR結(jié)合毛細(xì)管電泳進(jìn)行MSI檢測(cè)。MS位點(diǎn)經(jīng)過(guò)熒光標(biāo)記的PCR擴(kuò)增后經(jīng)毛細(xì)管電泳進(jìn)行基因組掃描,通過(guò)檢測(cè)片段長(zhǎng)度來(lái)判斷MSI狀態(tài)[35]。微衛(wèi)星標(biāo)志物位點(diǎn)一般有BAT-25、BAT-26、MONO-27、NR-21、NR-24單核苷酸位點(diǎn)和D2S123、D5S346、D17S250、PENTA-C、 PENTA-D多核苷酸位點(diǎn)[36]。將腫瘤組織與對(duì)應(yīng)的正常組織比較,如果有超過(guò)30% 的重復(fù)位點(diǎn)顯示 MSI,則該病人為MSI-H型結(jié)直腸癌病人;如果少于30% 的重復(fù)位點(diǎn)顯示MSI,則該病人為MSI-L型的結(jié)直腸癌病人;如沒(méi)有重復(fù)位點(diǎn)顯示MSI,則為MSS型的結(jié)直腸癌病人。如果檢測(cè)結(jié)果為MSI-H/L陽(yáng)性,應(yīng)繼續(xù)檢測(cè)BRAFV600E突變情況和MLH1啟動(dòng)子CpG島超甲基化情況,如BRAF V600E 突變檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,診斷為SCRC。如MLH1啟動(dòng)子CpG島超甲基化檢測(cè)結(jié)果為陰性,可結(jié)合生殖系DNA基因檢測(cè)證實(shí)為L(zhǎng)ynch綜合征相關(guān)的結(jié)直腸癌[37]。
2.IHC法 IHC檢測(cè)法是對(duì)MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表達(dá)情況來(lái)判斷MSI狀態(tài)的檢測(cè)方法。2011年Stevenson等[35]發(fā)現(xiàn)人類(lèi)的MMR系統(tǒng)一般優(yōu)先通過(guò)hMutSα和hMSH2、hMSH6β形成的異二聚體識(shí)別復(fù)制過(guò)程中產(chǎn)生的錯(cuò)誤,然后招募hMutLα啟動(dòng)DNA修復(fù)過(guò)程。如MSH2、MSH6 或PMS2 的檢測(cè)結(jié)果異常,則通過(guò)生殖系DNA基因檢測(cè)證實(shí)為L(zhǎng)ynch綜合征相關(guān)的結(jié)直腸癌;如MLH1的檢測(cè)結(jié)果異常,則繼續(xù)進(jìn)行BRAF-V600E突變和MLH1啟動(dòng)子 CpG 島超甲基化檢測(cè),以區(qū)分SCRC和Lynch綜合征相關(guān)的結(jié)直腸癌,若BRAF-V600E 突變或 MLH1 啟動(dòng)子CpG島超甲基化檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,則診斷為SCRC。如 BRAF-V600E 突變和 MLH1 啟動(dòng)子 CpG 島超甲基化檢測(cè)結(jié)果均為陰性,再通過(guò)生殖系 DNA 基因檢測(cè)證實(shí)為 Lynch 綜合征相關(guān)的結(jié)直腸癌。最常見(jiàn)IHC法檢測(cè)結(jié)果是MSH2 和 MSH6染色正常,而MLH1 和PMS2 同時(shí)缺失,表明病人可能是 Lynch 綜合征相關(guān)的結(jié)直腸癌或MMR蛋白缺失的SCRC,需進(jìn)一步檢測(cè) BRAF-V600E 突變和MLH1 啟動(dòng)子 CpG 島超甲基化來(lái)予以區(qū)分[38]。其他少見(jiàn)的MMR蛋白缺失,如 MSH2、MSH6同時(shí)缺失或MSH6、PMS2 的孤立缺失,極有可能是因基因生殖系突變導(dǎo)致的Lynch 綜合征,可對(duì)病人的血白細(xì)胞 DNA 或正常組織進(jìn)行生殖系突變分析來(lái)予以明確。
對(duì)MMR蛋白缺失的結(jié)直腸癌可統(tǒng)稱為MMR缺陷的結(jié)直腸癌,臨床意義上等同于MSI-H的結(jié)直腸癌,而MMR蛋白表達(dá)完整的結(jié)直腸癌則為MSS或MSI -L的結(jié)直腸癌[38]。MSI的PCR法和IHC法檢測(cè)均具有高敏感性和特異性。2009年P(guān)alomaki 等[39]經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)PCR 法和 IHC法檢測(cè)的一致性>92%。
SCRC的病因和發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,MMR基因變異導(dǎo)致的MSI是其中一個(gè)重要因素,多項(xiàng)研究證實(shí)MSI-H的結(jié)直腸癌的篩查在臨床上具有重要意義,不僅可預(yù)測(cè)病人的預(yù)后,而且可指導(dǎo)病人的化療治療。盡管如此,在化療用藥方面學(xué)術(shù)上仍存在爭(zhēng)議,這就需要未來(lái)更加精細(xì)、更多樣本的臨床試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。未來(lái)MSI 狀態(tài)可能是選擇個(gè)體化治療方案的關(guān)鍵指標(biāo)。伴隨著基因檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展,結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制將進(jìn)一步被揭開(kāi),這將為結(jié)直腸癌的早期診斷、早期預(yù)防以及靶向治療提供基礎(chǔ),MSI 狀態(tài)也有望成為多種癌癥病人的重要預(yù)后預(yù)測(cè)標(biāo)志物[40-42]。
1 Torre LA, Bray F, Siegel RL, et al. Global cancer statistics,2012.CA Cancer J Clin,2015,65:87-108.
2 陳萬(wàn)青,張思維,鄭榮壽,等.中國(guó)2012年惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析.中國(guó)腫瘤,2016,25:1-8.
3 Romanowicz-Makowska H, Smolarz B, Langner E, et al. Analysis of microsatellite instability and BRCA1 mutations in patients from hereditary nonpolyposis colorectal cancer(HNPCC)family. Pol J Pathol,2005,56:21-26.
4 Pancione M,Remo A,Colantuoni V.Genetic and epigenetic events generate multiple pathways in colorectal cancer progression.Pathol Res Int,2012,2012:509348. DOI:10.1155/2012/509348.
5 Knudsen N?,nielsen FC,vinther I,et al. Nuclear loca1ization of human DNA mismatch repair protein exonuclease 1(hExo1).Nucleic Acids Res,2007,35:2609.DOI:10.1093/nar/gkl1166.
6 Miesfeldd R, Krystal M, Arnheim N.A member for a new found between the human D and B globin genes. Nucleic Acids Res,1981,9:59.
7 Ionov Y, Peinado MA, Malkhosyan S, et al. Ubiquitous somatic mutations in simple repeated sequences reveal a new mechanism for colonic carcinogenesis. Nature,1993,363:558-561.
8 Fukushima T,Takenoshita S.Colorectal carcinogenesis. Fukushima J Med Sci,2001,47:1-11.DOI: 10.5387/fms.47.1.
9 Iacopetta B,Grieu F,Amanuel B.Microsatellite instability in colorectal cancer. Asia Pac J Clin Oncol,2010,6:260-269.DOI: 10.1111/j.1743-7563.2010.01335.x.
10Thibodeau SN,Bren G,Sehaid D.Microsatellite instability in cancer of the Proximal colon.Seience,1993,260:816-819.
11Kane MF, Loda M, Gaida GM, et al. Methylation of the hMLH1 promoter correlates with lack of expression of hMLH1 in sporadic colon tumors and mismatch repair-defective human tumor cell lines. Cancer Res,1997,57:808-811.
12董銳增. 散發(fā)性多原發(fā)大腸癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定研究. 腫瘤學(xué)雜志, 2005,11:363-369.
13Sarli L, Bottarelli L,Azzoni C, et al. Loss of p27 expression and microsatellite instability in sporadic colorectal cancer. Surg Oncol,2006,15:97-106. DOI: 10.1016/j.suronc.2006.09.002.
14Dove-Edwin I, de Jong AE, Adams J, et al. Prospective results of surveillance colonoscopy in dominant familial colorectal cancer with and without Lynch syndrome. Gastroenterology, 2006, 130: 1995-2000.DOI: 10.1053/j.gastro.2006.03.018.
15Sinicrope FA, Rego RL, Garrity-Park MM, et al. Alterations in cell proliferation and apoptosis in colon cancer with microsatellite instability. Int J Cancer,2007,120:1232-1238. DOI: 10.1002/ijc.22429.
16Deng G, Bell I, Crawley S, et al. BRAF mutation is frequently present in sporadic colorectal cancer with methylated hMLH1, but not in hereditary nonpolyposis colorectal cancer. Clin Cancer Res,2004,10:191-195.
17Domingo E, Laiho P, Ollikainen M, et al. BRAF screening as a low-cost effective strategy for simplifying HNPCC genetic testing. J Med Genet, 2004, 41: 664-668. DOI: 10.1136/jmg.2004.020651.
18Hall G, Clarkson A, Shi A, et al. Immunohistochemistry for PMS2 and MSH6 alone can replace a four antibody panel for mismatch repair deficiency screening in colorectal adenocarcinoma. Pathology, 2010, 42: 409-413.DOI:10.3109/00313025.2010.493871.
19Fearon ER. Molecular genetics of colorectal cancer. Annu Rev Pathol,2011,6:479-507.DOI:10.1146/annurev-pathol-011110-130235.
20Karahan B,Argon A,Yildorom M,et al. Relationship between MLH-1,MSH-2,PMS-2,MSH-6 expression and clinicopathological features in colorectalcancer. Int J Clin Exp Pathol,2015,8:4044-4053.
21于鵬飛,費(fèi)翔,魏學(xué)明,等.錯(cuò)配修復(fù)蛋白 hMLH1、hMSH2 和 hMSH6在散發(fā)性結(jié)直腸癌中的表達(dá)及意義. 中華普通外科學(xué)文獻(xiàn),2015,9:193-197.
22汪加亮,程勇.微衛(wèi)星不穩(wěn)定與結(jié)直腸癌臨床研究進(jìn)展.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2016,8:1195-1198.
23Hurtado C,Wielandt AM,Zarate AJ, et al. Molecular analysis of sporadic colon cancer. Rev Med Chil,2015,143:310-319. DOI: 10.4067/S0034-98872015000300005.
24Popat S,Hubner R,Houlston RS. Systematic review of microsatellite instability and colorectal cancer prognosis.J Clin Oncol,2005,23:609-618.DOI:10.1200/JCO.2005.01.086.
25Roth AD, Delorenzi M,Tejpar S,et al. Integrated analysis of molecular and clinical prognostic factors in stage Ⅱ/Ⅲ colon cancer. J Natl Cancer Inst, 2012, 104: 1635-1646. DOI: 10.1093/jnci/djs427.
26Kim CG, Ahn JB, Jung M, et al. Effects of microsatelliteinstability on recurrence patterns and outcomes in colorectal cancers. Br J Cancer,2016,115:25-33.DOI:10.1038/bjc.2016.161.
27Sargent DJ, MarsoniS, MongesG, et al. Defective mismatch repair as a predictive marker for lack of efficacy of fluorouracil-based adjuvant therapy in colon cancer. J Clin Oncol, 2010,28:3219-3226.DOI:10.1200/JCO.2009.27.1825.
28Vilar E, Gruber SB. Microsatellite instability in colorectal cancer — the stable evidence. Nat Rev Clin Oncol, 2010,7: 153-162.DOI:10.1038/nrclinonc.2009.237.
29Jover R, Zapater P, Castells A, et al. The efficacy of adjuvant chemotherapy with 5-fluorouracil in colorectal cancer depends on the mismatch repair status. Eur J Cancer, 2009, 45:365-373.DOI: 10.1016/j.ejca.2008.07.016.
30Guastadisegni C, Colafranceschi M, Ottini L, et al. Microsatellite instability as a marker of prognosis and response to therapy: a meta-analysis of colorectal cancer survival data. Eur J Cancer,2010,46:2788-2798.DOI:10.1016/j.ejca.2010.05.009.
32Hutchins G,Southward K,Handley K, et al. Value of mismatch repair, KRAS, and BRAF mutations in predicting recurrence and benefits from chemotherapy in colorectal cancer. J Clin Oncol, 2011,29:1261-1270.DOI:10.1200/JCO.2010.30.1366.
33Kim ST, Lee J, Park SH, et al. Clinical impact of microsatellite instability in colon cancer following adjuvant FOLFOX therapy. Cancer Chemother Pharmacol,2010,66: 659-667. DOI: 10.1007/s00280-009-1206-3.
34Zaanan A, Cuilliere-Dartigues P, Guilloux A, et al. Impact of p53 expression and microsatellite instability on stage Ⅲ colon cancer disease-free survival in patients treated by 5-fluorouracil and leucovorin with or without oxaliplatin.Ann Oncol, 2010, 21: 772-780.DOI:10.1093/annonc/mdp383.
35Stevenson JB, Hymas WC, Hillyard DR. A novel capillary electrophoresis-based multiplex PCR assay for detection of respiratory pathogens. Ann Clin Lab Sci,2011,41:33-38.
36Hegde M, Ferber M, Mao R, et al. ACMG technical standards and guidelines for genetic testing for inherited colorectal cancer (Lynch syndrome, familial adenomatous polyposis, and MYH-associated polyposis). Genet Med, 2014, 16:101-116. DOI: 10.1038/gim.2013.166.
37中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)(CSCO)結(jié)直腸癌診療指南工作組.中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)(CSCO)結(jié)直腸癌診療指南(2017 版)[EB/OL]. [2017-10-13].
38Samowitz WS. Evaluation of colorectal cancers for Lynch syndrome: practical molecular diagnostics for surgical pathologists. Mod Pathol,2015, 28: 109-113. DOI: 10.1038/modpathol.2014.127.
39Palomaki GE,McClain MR,Melillo S,et al. EGAPP supplementary evidence review: DNA testing strategies aimed at reducing morbidity and mortality from Lynch syndrome.Genet Med,2009,11:42-65.DOI:10.1097/GIM.0b013e31818fa2db.
40Cho J, Lee J, Bang H, et al. Programmed cell death-ligand 1 expression predicts survival in patients with gastric carcinoma with microsatellite instability.Oncotarget,2017,8:13320-13328.DOI:10.18632/oncotarget.14519.
41Howitt BE, Strickland KC, Sholl LM, et al. Clear cell ovarian cancers with microsatellite instability: a unique subset of ovarian cancers with increased tumor-infiltrating lymphocytes and PD-1/PD-L1 expression. Oncoimmunol, 2017, 6: e1277308. DOI:10.1080/2162402X.2016.1277308.
42Naboush A, Roman CA, Shapira I. Immune checkpoint inhibitors in malignancies with mismatch repair deficiency: a review of the state of the current knowledge. J Investig Med, 2017, 65: 754-758.DOI:10.1136/jim-2016-000342.