摘 要： 目的：觀察高強(qiáng)度力量訓(xùn)練（HST）或中等強(qiáng)度力量訓(xùn)練（MST）對淋巴細(xì)胞凋亡的影響并探討其可能機(jī)制。方法：20名青年男性分別進(jìn)行一次急性HST和MST，分別于訓(xùn)練前、訓(xùn)練后即刻、訓(xùn)練后3 h以及訓(xùn)練后24 h取靜脈血測定淋巴細(xì)胞凋亡率、線粒體膜電位（MMP）、CD95受體、Bcl-2蛋白表達(dá)以及血清腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）和皮質(zhì)醇含量。將新鮮淋巴細(xì)胞與HST前的血清、HST后3 h的血清、米非司酮（MIF，糖皮質(zhì)激素受體阻斷劑）預(yù)處理的HST后3 h血清以及單獨(dú)加入介質(zhì)（分別為L-乳酸、rIL-6、rCRP和皮質(zhì)醇）的培養(yǎng)基共培養(yǎng)24 h，用流式細(xì)胞儀檢測淋巴細(xì)胞凋亡率。結(jié)果：HST后3 h 淋巴細(xì)胞凋亡率、CD95受體、血清IL-6、CRP和皮質(zhì)醇升高（P<0.05），MMP和Bcl-2蛋白表達(dá)降低（P<0.05），24 h時除Bcl-2蛋白仍低于訓(xùn)練前（P<0.05）外，上述其他各指標(biāo)均恢復(fù)至訓(xùn)練前水平（P>0.05）。HST后3 h血清皮質(zhì)醇含量與淋巴細(xì)胞凋亡率顯著正相關(guān)（r=0.69，P<0.05）。MST后所有指標(biāo)均無顯著性變化（P>0.05）。HST后3 h血清與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后細(xì)胞凋亡率明顯高于訓(xùn)練前血清（P<0.05）。將淋巴細(xì)胞與單一血清介質(zhì)進(jìn)行共培養(yǎng)，其中L-乳酸、rIL-6和rCRP對淋巴細(xì)胞凋亡率均無顯著性影響（P>0.05），皮質(zhì)醇則明顯提高淋巴細(xì)胞凋亡率（P<0.05），在訓(xùn)練后3 h血清中加入MIF則顯著降低淋巴細(xì)胞凋亡率（P<0.05）。結(jié)論：力量訓(xùn)練誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡存在運(yùn)動強(qiáng)度依賴性，皮質(zhì)醇經(jīng)由糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與了高強(qiáng)度力量訓(xùn)練誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的過程。

關(guān)鍵詞： 力量訓(xùn)練;淋巴細(xì)胞;凋亡;機(jī)制

中圖分類號：G804.2?? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? 文章編號：1006-2076（2018）06-0091-08

Abstract： Objective： To observe effects of high-intensity strength training （HST） and moderate-intensity strength training （MST） on lymphocyte apoptosis in jnvenile males and investigate the possible mechanism. Methods： 20 jnvenile males performed a bout of acute HST and MST， apoptotic rate of lymphocytes， mitochondrial membrane potential （MMP）， CD95 receptor， Bcl-2 protein as well as serum tumor necrosis factor-α （TNF-α）， interleukin-6 （IL-6）， C-reaction protein （CRP） [JP+1]and cortisol content were measured in venous blood before training， immediate after training， 3 h?and 24 h after training respectively. Freshly isolated lymphocytes and serum of pre-HST， serum of 3 h after HST， mifepristone （MIF， glucocorticoid receptor blocking pharmacon） preconditioning of 3 h after HST， medium of selected serum parameters （L-lactic acid， rIL-6， rCRP and cortisol） incubated for 24 h and apoptotic rate of lymphocytes was determined by flow cytometer. Results：Apoptotic rate of lymphocytes， CD95 receptor， serum IL-6， CRP and cortisol increased （P<0.05）， MMP and Bcl-2 protein expression decreased （P<0.05） 3 h after HST， all indexes above except lowered Bcl-2 protein recovered to pre-training level （P>0.05） 24 h after HST. A significant positive correlation was observed between the increase of apoptosis and cortisol levels （r=0.69， P<0.05） 3 h after HST. There was no significant change of all indicators after MST （P>0.05）. Incubation of in serum 3 h after HST indicated an increase apoptotic rate of lymphocytes than serum of pre-training （P<0.05）. Selective incubation of lymphocytes in concentrations of selected serum parameters corresponding to levels found post in HST serum demonstrated that L-lactic acid， rIL-6 and rCRP had no effects on apoptotic rate of lymphocytes （P>0.05）， while cortisol raised apoptosis （P<0.05）. This result was confirmed by attenutation of apoptosis after addition of MIF before incubation in serum 3 h after HST （P<0.05）. Conclusion：Strength exercise induced lymphocyte apoptosis in an intensity-dependent way. Cortisol signaling via glucocorticoid receptors might be an important mechanism for lymphocyte apoptosis after strength exercise.

Key words： strength training; lymphocyte; apoptosis; mechanism

力量訓(xùn)練是運(yùn)動員運(yùn)動訓(xùn)練的有機(jī)組成部分，也是提高專項(xiàng)運(yùn)動能力的重要手段[1]。此外，力量訓(xùn)練在大眾健身以及休閑體育中越來越受推崇[2-4]。為刺激機(jī)體產(chǎn)生生理適應(yīng)并提高專項(xiàng)運(yùn)動能力，在力量訓(xùn)練實(shí)踐中常采用一定比例的高強(qiáng)度大負(fù)荷訓(xùn)練內(nèi)容。與有氧運(yùn)動（或耐力訓(xùn)練）相比，力量訓(xùn)練對氧的需求量不高，對心肺刺激較小，其主要靶器官是骨骼肌，運(yùn)動強(qiáng)度由肌肉承載負(fù)重以及最大重復(fù)次數(shù)決定[5]。力量訓(xùn)練常伴隨局部糖原耗竭和乳酸堆積（甚至酸中毒），這是決定運(yùn)動能力的主要生理學(xué)限制因素。高強(qiáng)度力量訓(xùn)練時肌肉承受高張力，加之離心收縮的影響，工作肌的完整性受損并最終導(dǎo)致肌肉損傷以及輕度炎癥反應(yīng)[6]。此外，力量訓(xùn)練還能夠激活下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸，促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)釋放皮質(zhì)醇激素，從而介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)[7]。因此，高強(qiáng)度力量訓(xùn)練可引發(fā)全身物質(zhì)與能量代謝、炎癥反應(yīng)以及內(nèi)分泌功能的變化。上述因素均可作用于循環(huán)中的淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)其活化甚至凋亡[8]。盡管高強(qiáng)度力量訓(xùn)練廣泛應(yīng)用，然而其對于免疫功能的作用（激活或損害）知之甚少。Yarrow等[9]利用離心收縮誘導(dǎo)肌肉損傷探討神經(jīng)內(nèi)分泌功能的反應(yīng)與適應(yīng)，但這一模型與力量訓(xùn)練在實(shí)踐中的應(yīng)用仍存在較大差異。近年來研究者針對不同強(qiáng)度和持續(xù)時間耐力訓(xùn)練（馬拉松跑、劇烈跑臺運(yùn)動或蹬車運(yùn)動等）對淋巴細(xì)胞活化和凋亡的影響進(jìn)行了諸多報道并發(fā)現(xiàn)[10-12]，淋巴細(xì)胞凋亡存在運(yùn)動強(qiáng)度依賴性，高強(qiáng)度劇烈運(yùn)動誘導(dǎo)其凋亡，而中等強(qiáng)度運(yùn)動則并無此效應(yīng)。但不同運(yùn)動方式（如力量訓(xùn)練、高強(qiáng)度間歇訓(xùn)練）等對于淋巴細(xì)胞凋亡的作用和機(jī)制目前尚缺乏研究。

業(yè)已證實(shí)，多種介質(zhì)參與了運(yùn)動誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的病理生理過程[13]。研究表明，細(xì)胞內(nèi)外pH值的變化可調(diào)控細(xì)胞凋亡。劇烈運(yùn)動時乳酸大量產(chǎn)生，血液pH下降，繼而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡甚至壞死。Samuvel等[14]的研究表明，在巨噬細(xì)胞中，乳酸可作為信號分子導(dǎo)致炎癥因子表達(dá)上調(diào)。而劇烈運(yùn)動亦可誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)，同時伴急性期蛋白和細(xì)胞因子含量升高。多項(xiàng)研究證實(shí)，劇烈運(yùn)動上調(diào)腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）和C-反應(yīng)蛋白（C-reaction protein，CRP）水平，上述介質(zhì)可造成多種類型細(xì)胞發(fā)生凋亡[15]。此外，糖皮質(zhì)激素（glucocorticoids，GC）如皮質(zhì)醇（cortisol）或皮質(zhì)酮（corticosterone）可誘發(fā)淋巴細(xì)胞凋亡[12]。小鼠胸腺細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中給予與劇烈運(yùn)動時相同濃度的皮質(zhì)酮同樣可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[16]，提示GC信號途徑在運(yùn)動誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中起重要作用。此外，運(yùn)動前給予小鼠GC受體拮抗劑——米非司酮（mifepristone，MIF）預(yù)處理可抑制胸腺細(xì)胞DNA碎片化[17]。

本研究的目的旨在觀察高強(qiáng)度力量訓(xùn)練（high-intensity strength training，HST）或中等強(qiáng)度力量訓(xùn)練（moderate-intensity strength training，MST）對淋巴細(xì)胞凋亡的影響并探討其可能機(jī)制。由于力量訓(xùn)練可誘導(dǎo)物質(zhì)代謝、炎癥因子和激素的變化，因此我們將淋巴細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，觀察與HST實(shí)驗(yàn)時相同濃度的乳酸、IL-6、CRP和皮質(zhì)醇是否可誘導(dǎo)其凋亡。我們假設(shè)，力量訓(xùn)練誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡存在運(yùn)動強(qiáng)度依賴性，其機(jī)制可能與血清中多種介質(zhì)的變化有關(guān)。

1 對象與方法

1.1 研究對象

20名青年男性，年齡（25.6±2.7）歲，身高（1.78±0.02）m，體重（77.2±8.9）kg，身體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）為（24.3±2.8）kg/m2。告知其實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)意義以及潛在風(fēng)險后，表示自愿參加本試驗(yàn)并簽訂知情同意書。受試者身體健康、無心血管疾病、代謝性疾病、急慢性感染、煙酒嗜好以及服用藥物，未經(jīng)過專業(yè)訓(xùn)練，包括力量訓(xùn)練或耐力訓(xùn)練，即每周規(guī)律運(yùn)動時間低于3 h/周。囑受試者實(shí)驗(yàn)前48 h清淡飲食，禁止劇烈運(yùn)動、飲用咖啡、吸煙以及飲酒。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計

受試者共進(jìn)行4次實(shí)驗(yàn)室測試，每次間隔7天。第1次：熟悉實(shí)驗(yàn)流程與器械使用方法，測定身體形態(tài)學(xué)參數(shù)（身高、體重、BMI）;第2次：利用訓(xùn)練器械測定最大重復(fù)次數(shù)（repetition maximum，RM）;第3次：受試者進(jìn)行一次HST并取靜脈血;第4次：進(jìn)行一次MST并取靜脈血。分別于訓(xùn)練前、訓(xùn)練后即刻、訓(xùn)練后3 h以及訓(xùn)練后24 h取靜脈血5 mL，一部分全血用于細(xì)胞計數(shù)和淋巴細(xì)胞分離，另一部分全血離心（4℃，3 000 r/min）后取血清于-20℃冰箱凍存待測炎癥因子和激素水平。

1.3 RM測試

利用8種不同的訓(xùn)練器械測試肌肉的最大力量，即1 RM，測試動作與動員主要肌群分別為：1）臥推（bench press）——胸大肌;2）背闊肌下拉（latissimus pull-downs）——背闊肌;3）坐姿拉力器劃船（seated rows）——斜方肌和背闊肌;4）肩部推舉（shoulder press）——三角肌;5）腿屈伸（leg press）——股四頭肌;6）肩部下拉（shoulder pull-downs）——肱三頭肌;7）前臂彎舉（biceps curls）——肱二頭肌;8）腿彎舉（leg curls）——腘繩肌。先進(jìn)行充分的準(zhǔn)備活動（慢跑和拉伸），然后通過增減配重找出只能重復(fù)10次（10 RM）對應(yīng)的負(fù)荷重量，此重量除以0.75，即為1 RM[18]。測試1 RM的目的在于進(jìn)行力量訓(xùn)練時控制每名受試者的負(fù)荷保持在同一相對運(yùn)動強(qiáng)度上。

1.4 力量訓(xùn)練方案

力量訓(xùn)練于清晨8[KG-*3]∶[KG-*3]00開始。一般性準(zhǔn)備活動（慢跑和拉伸）后進(jìn)行專項(xiàng)準(zhǔn)備活動，即以30%1 RM強(qiáng)度練習(xí)1.3中的8個動作，每個動作重復(fù)15次，共1組。休息10 min后進(jìn)行一次HST，強(qiáng)度為75%1 RM，完成上述8個動作。間隔7天后，受試者于同一時間、相同動作模式完成一次MST，強(qiáng)度為60%1 RM。為保證兩次測試只存在運(yùn)動強(qiáng)度差異，MST時每組完成8次，HST時每組完成10次（HST完成次數(shù)是MST的75%/60%=1.25倍），共3組，每個動作完成后間歇2 min，組間（8個動作為1組）間歇3 min，持續(xù)時間約90 min。訓(xùn)練前、每組訓(xùn)練后測定心率（heart rate，HR）和乳酸（lactic acid，La），儀器分別為Polar S810型遙測心率表（芬蘭）和YSI-1500型血乳酸分析儀（美國）。

1.5 白細(xì)胞計數(shù)

取EDTA抗凝血300 μL，利用五分類血細(xì)胞分析儀（LH750，美國貝克曼庫爾特公司）測定白細(xì)胞計數(shù)、淋巴細(xì)胞計數(shù)和粒細(xì)胞計數(shù)。

1.6 淋巴細(xì)胞分離

利用密度梯度離心法分離淋巴細(xì)胞。取抗凝血2 mL，用Hanks液等倍稀釋后加入等體積淋巴細(xì)胞分離液，2 000 r/min離心30 min，棄上清并收集淋巴細(xì)胞層。

1.7 細(xì)胞表面凋亡、壞死標(biāo)志物，細(xì)胞活化以及線粒體膜電位檢測

用Annexin-V FITC和碘化丙啶（propidium iodide，PI）標(biāo)記淋巴細(xì)胞分別測定凋亡和壞死。線粒體膜電位（mitochondrial membrane potential，MMP）用DiOC6熒光染色法測定，即取105細(xì)胞以40 nm DiOC6染色30 min。為進(jìn)一步檢測淋巴細(xì)胞表型和功能，用CD95受體（Fas受體）、CD95配體（Fas配體）和CD69（細(xì)胞激活表面標(biāo)志物）抗體標(biāo)記細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀（Beckman，德國）檢測分析。

1.8 Bcl-2蛋白檢測

利用Western immunoblotting法檢測Bcl-2蛋白含量。裂解液裂解淋巴細(xì)胞后測定總蛋白含量，取20 μg蛋白樣品經(jīng)15% SDS-PAGE分離轉(zhuǎn)移于PVDF膜。一抗孵育過夜，二抗孵育1 h，ECL顯影。采用凝膠系統(tǒng)分析系統(tǒng)掃描各條帶灰度值，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）為內(nèi)參蛋白，計算各組條帶的相對表達(dá)量。

1.9 炎癥因子和激素水平測定

血清TNF-α、IL-6和CRP用高敏酶聯(lián)免疫吸附（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）法測定，儀器為BIO-RAD Model 680型酶標(biāo)儀（美國）;皮質(zhì)醇用電化學(xué)發(fā)光免疫法測定，儀器為FMQ-9013C型γ放免分析儀。

1.10 淋巴細(xì)胞培養(yǎng)

為檢測上述血清各參數(shù)對于淋巴細(xì)胞凋亡的影響，取健康、無運(yùn)動經(jīng)歷的青年男性受試者的全血5 mL并分離淋巴細(xì)胞。將淋巴細(xì)胞與受試者HST訓(xùn)練前的血清以及訓(xùn)練后3 h的血清共培養(yǎng)24 h，血清濃度均為50%。為檢驗(yàn)不同血清介質(zhì)對淋巴細(xì)胞凋亡的作用，將細(xì)胞在加入介質(zhì)的培養(yǎng)基（RPMI 1640）中培養(yǎng)24 h，介質(zhì)分別為L-乳酸（16 mmol/L）、重組IL-6（recombinant IL-6，rIL-6）（25 pg/mL）、rCRP（4 μg/mL）以及皮質(zhì)醇（30 μg/mL），相應(yīng)濃度為HST后3 h的最高值。為探討皮質(zhì)醇的作用，將淋巴細(xì)胞與加入MIF（GC受體阻斷劑）的HST血清共孵育。用流式細(xì)胞儀（Beckman，德國）檢測淋巴細(xì)胞凋亡率。

1.11 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析處理，結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。同一時間點(diǎn)不同強(qiáng)度訓(xùn)練（HST vs. MST）比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);同一強(qiáng)度訓(xùn)練不同時間點(diǎn)（訓(xùn)練前、訓(xùn)練后3 h和訓(xùn)練后24 h）比較使用重復(fù)測量方差分析，多重比較使用LSD檢驗(yàn);使用Pearson相關(guān)對變量之間的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析。P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 1 RM測試結(jié)果以及不同強(qiáng)度力量訓(xùn)練的生理反應(yīng)

1 RM測試結(jié)果與HST每組訓(xùn)練重復(fù)次數(shù)見表1。1 RM測試結(jié)果與肌肉體積密切相關(guān)，肱三頭?。绮肯吕┝α孔钚?，而股四頭?。ㄍ惹欤┝α孔畲?。HST時每組訓(xùn)練重復(fù)次數(shù)從8.2（肩部推舉，三角?。?5.2（腿屈伸，股四頭?。?。

HST和MST后HR和La均較訓(xùn)練前明顯升高（P<0.05），HST訓(xùn)練后HR和La均高于MST（P<0.05）（見表2）。

HST和MST后3 h白細(xì)胞和粒細(xì)胞計數(shù)顯著增多（P<0.05），HST白細(xì)胞計數(shù)和粒細(xì)胞高于MST（P<0.05），訓(xùn)練后24 h均恢復(fù)至訓(xùn)練前水平（P>0.05），因此白細(xì)胞增多主要是粒細(xì)胞增加造成的。HST后3 h淋巴細(xì)胞減少（P<0.05），訓(xùn)練后24 h恢復(fù)（P>0.05）;MST后淋巴細(xì)胞無顯著性變化（P>0.05）（見表3）。

2.2 淋巴細(xì)胞凋亡及相關(guān)標(biāo)志物的變化

HST后3 h 淋巴細(xì)胞凋亡率（Annexin-V陽性）顯著升高（P<0.05），24 h恢復(fù)至訓(xùn)練前水平（P>0.05）;HST后3 h MMP顯著降低，（P<0.05），24 h恢復(fù)（P>0.05）。MST后淋巴細(xì)胞凋亡率和MMP均無顯著性變化（P>0.05）。淋巴細(xì)胞壞死率（PI陽性）在HST和MST后均無顯著性變化（P>0.05）（見圖1～圖3）。

凋亡相關(guān)表面標(biāo)志物中，CD95陽性細(xì)胞（Fas受體）在HST后3 h顯著升高（P<0.05），而CD95配體（Fas配體）無顯著性變化（P>0.05）。MST后死亡受體（CD95和CD95配體）的表達(dá)均無顯著性變化（P>0.05）。淋巴細(xì)胞激活標(biāo)志物CD69在HST和MST后均無顯著性變化（P>0.05）（見圖4～圖6）。

HST后3 h淋巴細(xì)胞Bcl-2蛋白含量顯著降低（P<0.05）并一直持續(xù)至訓(xùn)練后24 h（P<0.05）。MST后Bcl-2蛋白含量無顯著性變化（P>0.05）（見圖7）。

2.3 炎癥因子和激素的變化

HST后3 h IL-6、CRP和皮質(zhì)醇顯著性增高（P<0.05），TNF-α無顯著性變化（P>0.05）;MST后各指標(biāo)均無顯著性變化（P>0.05）。HST后3 h血清皮質(zhì)醇含量與淋巴細(xì)胞凋亡率顯著正相關(guān)（r=0.69，P<0.05）（見表4）。

2.4 體外淋巴細(xì)胞與血清介質(zhì)共培養(yǎng)后淋巴細(xì)胞凋亡率的變化

HST后3 h血清與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后淋巴細(xì)胞凋亡率明顯高于訓(xùn)練前血清（P<0.05）。將淋巴細(xì)胞與單一血清介質(zhì)進(jìn)行共培養(yǎng)，其中L-乳酸、rIL-6和rCRP對淋巴細(xì)胞凋亡率均無顯著性影響（P>0.05），皮質(zhì)醇則明顯提高淋巴細(xì)胞凋亡率（P<0.05），在訓(xùn)練后3 h血清中加入MIF則顯著降低淋巴細(xì)胞凋亡率（P<0.05）（見圖8）。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，高強(qiáng)度力量訓(xùn)練后淋巴細(xì)胞凋亡明顯增加，同時伴MMP降低，Bcl-2表達(dá)下調(diào)，CD95（Fas受體）表達(dá)上調(diào)。盡管HST后乳酸明顯升高并出現(xiàn)輕度炎癥反應(yīng)，[JP+1]但血清皮質(zhì)醇可能是誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的主要介質(zhì)（因子）。這一推論在離體實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)，即淋巴細(xì)胞與皮質(zhì)醇共培養(yǎng)可造成細(xì)胞凋亡率增加，而HST后血清用GC受體拮抗劑MIF預(yù)處理后再與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)可減少細(xì)胞凋亡。此外，相關(guān)分析進(jìn)一步證實(shí)皮質(zhì)醇的效應(yīng)，即HST后3 h血清皮質(zhì)醇含量與淋巴細(xì)胞凋亡率顯著正相關(guān)（r=0.69）。

本研究證實(shí)了先前的假設(shè)，即中等強(qiáng)度力量訓(xùn)練并未誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡，而高強(qiáng)度力量訓(xùn)練后淋巴細(xì)胞凋亡率明顯增加，同時伴MMP降低以及CD95表達(dá)上調(diào)，提示力量訓(xùn)練誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡存在運(yùn)動強(qiáng)度依賴性，這與前人針對耐力訓(xùn)練的研究結(jié)果一致[19] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}225 。Mooren等[20] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}230 的研究同樣證實(shí)，馬拉松跑后CD69和CD95表達(dá)增加，提示劇烈運(yùn)動產(chǎn)生激活誘導(dǎo)性細(xì)胞死亡（activation-induced cell death）效應(yīng)。但由于CD69表達(dá)無顯著性變化，因此本研究并未觀察到淋巴細(xì)胞激活，可能與受試對象、運(yùn)動方式、運(yùn)動時間、運(yùn)動強(qiáng)度以及取血時機(jī)等因素有關(guān)。

Bcl-2作為抗凋亡蛋白分布于細(xì)胞內(nèi)膜，其主要作用在于通過抑制凋亡前體蛋白如細(xì)胞色素C等釋放入胞漿，繼而維持線粒體的完整性[21] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}231 。在本研究中，HST后3 h Bcl-2表達(dá)量顯著下降并持續(xù)至HST后24 h，而此時淋巴細(xì)胞凋亡率和MMP均恢復(fù)至安靜時水平，因此我們推測，Bcl-2下調(diào)在時序上應(yīng)早于MMP降低，即Bcl-2下調(diào)是MMP降低的原因。研究也證實(shí)，Bcl-2下調(diào)增加細(xì)胞凋亡敏感性，然而Bcl-2本身并不能誘導(dǎo)凋亡，需要其他因子參與。運(yùn)動對淋巴細(xì)胞Bcl-2表達(dá)量的調(diào)節(jié)在Ferrer等[21] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}231 的研究中亦得到證實(shí)，但具體機(jī)制尚未明確。已證實(shí)，運(yùn)動誘導(dǎo)自由基增多導(dǎo)致的氧化應(yīng)激狀態(tài)可下調(diào)Bcl-2表達(dá)[21] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}231 。由于高強(qiáng)度力量訓(xùn)練同樣可誘導(dǎo)自由基增加，因此氧化應(yīng)激可能是本研究中HST后3 h和24 h Bcl-2表達(dá)持續(xù)下降的主要原因。

為驗(yàn)證HST后的血清介質(zhì)是否可誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡，本研究進(jìn)一步進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HST后3 h血清與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后淋巴細(xì)胞凋亡率明顯高于訓(xùn)練前血清與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，提示血清中某些介質(zhì)可誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡。為探尋誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的確切血清介質(zhì)，將淋巴細(xì)胞與單一血清介質(zhì)（分別為L-乳酸、rIL-6、rCRP和皮質(zhì)醇）進(jìn)行共培養(yǎng)。由于乳酸可作為信號分子誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中炎癥因子表達(dá)上調(diào)，而且酸中毒也是淋巴細(xì)胞凋亡的誘因之一，因此本研究利用L-乳酸與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，結(jié)果卻未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡增加。這一結(jié)果在Mooren等[22] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}232 的研究中也得到了證實(shí)，即馬拉松跑后乳酸輕度增加而淋巴細(xì)胞凋亡率卻未明顯升高。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，體外炎癥因子rIL-6和rCRP對淋巴細(xì)胞凋亡率均無顯著性影響。在Neubauer等[23] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}233 和Reichhold等[24] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}234 的研究中，CRP和IL-6與淋巴細(xì)胞凋亡率并無顯著性關(guān)聯(lián)。僅有一項(xiàng)研究報道[23] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}233 ，鐵人三項(xiàng)運(yùn)動員運(yùn)動后即刻IL-6含量與壞死細(xì)胞數(shù)量顯著正相關(guān)。本研究中，PI標(biāo)記的淋巴細(xì)胞壞死率在不同強(qiáng)度力量訓(xùn)練后均無顯著性變化，由此推測，在Neubauer等[23] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}233 的實(shí)驗(yàn)中，由于運(yùn)動后IL-6升高了50倍（本研究約升高7倍），淋巴細(xì)胞不僅發(fā)生凋亡且部分細(xì)胞可能發(fā)生壞死。

Kraemer等[25] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}235 發(fā)現(xiàn)，高強(qiáng)度力量訓(xùn)練后皮質(zhì)醇含量顯著增加。研究認(rèn)為，皮質(zhì)醇增加通過影響淋巴細(xì)胞遷移方式或誘導(dǎo)其凋亡從而導(dǎo)致運(yùn)動后淋巴細(xì)胞數(shù)量減少（即淋巴細(xì)胞減少癥）[26] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}240 。本研究證實(shí)，皮質(zhì)醇在誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡中起主要作用。將HST后3 h濃度相當(dāng)?shù)钠べ|(zhì)醇單獨(dú)與健康淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后細(xì)胞凋亡率明顯增加，而在HST后3 h血清中加入MIF則顯著降低淋巴細(xì)胞凋亡，提示GC受體可能是細(xì)胞凋亡通路中的重要信號分子，皮質(zhì)醇誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡是通過GC受體介導(dǎo)和實(shí)現(xiàn)的。GC受體激活前與熱休克蛋白90（heat shock protein 90，HSP90）相連接，當(dāng)與其配體結(jié)合時，HSP90與GC受體分離，受體-激素復(fù)合物轉(zhuǎn)移進(jìn)入細(xì)胞核并反式激活包括凋亡基因在內(nèi)的多種基因，進(jìn)而促進(jìn)其表達(dá)（轉(zhuǎn)錄和翻譯）[27] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}239 。因此，GC誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并非直接通過經(jīng)典的外源性或內(nèi)源性凋亡途徑介導(dǎo)。然而，CD95表達(dá)上調(diào)同時細(xì)胞凋亡增加，提示外源性細(xì)胞凋亡途徑被激活。Schmidt等[28] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}236 證實(shí)在單核細(xì)胞中存在GC誘導(dǎo)的CD95依賴性凋亡途徑。然而運(yùn)動中上述信號途徑的相互作用尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，Bcl-2下調(diào)與皮質(zhì)醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡存在關(guān)聯(lián)。有研究證實(shí)[29-30] ADDINKYMRREF{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}237，{A1B87CEC-871D-4DCF-ADCA-37F27FFA21B1}238 ，Bcl-2過表達(dá)能夠抑制GC誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用，Bcl-2缺失小鼠出現(xiàn)暴發(fā)性淋巴細(xì)胞凋亡，用GC處理后則加速細(xì)胞死亡。結(jié)合本研究結(jié)果我們認(rèn)為，高強(qiáng)度運(yùn)動時，Bcl-2水平?jīng)Q定了GC誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的敏感性。

4 結(jié)論

力量訓(xùn)練誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡存在運(yùn)動強(qiáng)度依賴性，皮質(zhì)醇經(jīng)由糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與了高強(qiáng)度力量訓(xùn)練誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的病理生理過程。

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