李曉春+王莉芳+徐長(zhǎng)根

[摘要] 目的 考察紅毛七的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。 方法 將小鼠按體重隨機(jī)分為模型對(duì)照組（CMC-Na），陽(yáng)性對(duì)照組，紅毛七水提取物低、中、高劑量組（3、9、27 g/kg，以生藥計(jì)），每組各10只，灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7 d。采用二甲苯致小鼠耳腫脹法測(cè)定小鼠耳腫脹度；采用紙片致肉芽增生模型，測(cè)定小鼠肉芽腫抑制率，以考察紅毛七水提取物的抗炎作用；采用乙酸扭體法測(cè)定小鼠扭體反應(yīng)潛伏期及15 min內(nèi)扭體次數(shù)；采用熱板法測(cè)定小鼠給藥前及給藥30、60、90、120 min后痛閾值，以考察紅毛七水提取物的鎮(zhèn)痛作用。 結(jié)果 與模型對(duì)照組比較，紅毛七水提取物中、高劑量組可減輕小鼠耳腫脹度（P < 0.05或P < 0.01），高劑量組可以減輕肉芽組織干重（P < 0.05），紅毛七水提取物中、高劑量組可延長(zhǎng)小鼠扭體反應(yīng)潛伏期并減少扭體次數(shù)（P < 0.05或P < 0.01），提高給藥30、60 min后的痛閾值（P < 0.05或P < 0.01），且高劑量組可以提高給藥90、120 min后的痛閾值（P < 0.05或P < 0.01）。 結(jié)論 紅毛七水提取物有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

[關(guān)鍵詞] 紅毛七；水提取物；抗炎；鎮(zhèn)痛；動(dòng)物藥效學(xué)

[中圖分類號(hào)] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）09（a）-0026-04

[Abstract] Objective To investigate the anti-inflammatory and analgesic effects of Caulopyhllum robustum water extract. Methods The mice were randomly by weight divided into model group （CMC-Na）， positive control group， Caulopyhllum robustum water extract low-dose， medium-dose and high-dose groups （3， 9， 27 g/kg， calculated by crude drug）， each group had 10 mice. They were given relevant medicine intragastrically， once a day， for consecutive 7 d. The xylene-induced ear edema method was used to determine the degree of ear edema. Paper-induced granuloma model was used to determine the inhibition ratio of granulation tissue hyperplasia， the anti-inflammatory activity of Caulopyhllum robustum water extract was investigated. The pain incubation period and the number of writhing within 15 minutes were determined by acetic acid writhing method. Pain thresholds of mice were determined by hot-plate test before and after medication 30， 60， 90， 120 minutes， the analgesic effect of Caulopyhllum robustum water extract was investigated. Results Compared with model group， Caulopyhllum robustum water extract medium-dose and high-dose groups could restrain the degree of ear edema of mice （P < 0.05 or P < 0.01）； the high-dose group could decrease the dry weight of granulation tissue （P < 0.05）. Caulopyhllum robustum water extract medium-dose and high-dose groups could prolong the pain incubation period， decrease the number of writhing in mice within 15 minutes （P < 0.05 or P < 0.01）， and extended pain thresholds of mice 30， 60 minutes after medication （P < 0.05 or P < 0.01）， the high-dose group could also extend pain thresholds of mice 90， 120 minutes after medication （P < 0.05 or P < 0.01）. Conclusion Caulopyhllum robustum water extract possesses anti-inflammatory and analgesic effects.

[Key words] Caulopyhllum robustum； Water extract； Anti-inflammatory； Analgesic； Animal pharmacodynamicsendprint

紅毛七，“太白七藥”之一，為小檗科植物類葉牡丹（Caulophyllum robustum Maxim.）的根和根莖[1]，味苦，微甘，性平，具活血散瘀、祛風(fēng)除濕、行氣止痛等功效，民間常以其煎湯口服亦可浸酒或研末，用于月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)期少腹結(jié)痛、跌打損傷、關(guān)節(jié)炎、勞傷等的治療[2-3]。目前，關(guān)于紅毛七的研究多集中在化學(xué)成分分析方面[4-8]。據(jù)《陜西中草藥》記載，“紅毛七具活血散瘀，祛風(fēng)止痛等作用”?！蛾兏蕦幥嘀胁菟庍x》記載，“紅毛七可以治療關(guān)節(jié)炎、跌打損傷”。但迄今未見相關(guān)實(shí)驗(yàn)性報(bào)道?；诖?，本研究以二甲苯致小鼠耳腫脹、紙片致小鼠肉芽增生、乙酸扭體法和熱板法等經(jīng)典的藥理學(xué)方法，考察紅毛七的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，以期為紅毛七的進(jìn)一步開發(fā)和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，雌雄兼用，1.5月齡，體重18～22 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（陜）2012-003。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度22～26℃，相對(duì)濕度40%～70%。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥材、藥品、試劑

紅毛七，采自太白山，由陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院樊寶娟副主任藥師鑒定為紅毛七的干燥根和根莖。阿司匹林腸溶片，批號(hào)：BJ32774，拜耳醫(yī)藥保健有限公司；吲哚美辛腸溶片，批號(hào)：G160402，山西云鵬制藥有限公司；二甲苯，分析純，批號(hào)：20120208，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙酸，分析純，批號(hào)：20120831，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；水為純凈水；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na），化學(xué)純，批號(hào)：20120330，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

ZH-YLS智能熱板儀，安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司；BS2202S電子天平，塞多利斯儀器有限公司；DZ-18C真空干燥箱，天津泰斯特儀器有限公司；LABORTA4001旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀，德國(guó)Heidoph；YLS-25A電動(dòng)耳腫打耳器，濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司。

1.2 方法

1.2.1 紅毛七水提取物的制備

取紅毛七藥材100 g，加1000 mL冷水，大火煮沸后改為小火煎煮3 h，濾出藥汁，留渣重新加入1000 mL冷水，方法同上煎煮3 h，濾出藥汁，留渣再加入1000 mL冷水，方法同上煎煮2 h，合并三次煎液，過濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于60℃濃縮成浸膏，真空干燥箱中干燥，粉碎成粉末，得到17.4 g紅毛七水提取物，使用前用0.5%CMC-Na研勻，混懸均勻。

1.2.2 紅毛七抗炎作用的考察

1.2.2.1 分組 紅毛七水提取物的給藥劑量參考《陜西中草藥》每日用量15～25 g，取其高量25 g，按照體表面積折算為小鼠的等效劑量約為生藥3 g/kg[9]，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果，以該等效劑量（3 g/kg）為低劑量，低、中、高劑量組按照1∶3∶9的劑量比例設(shè)置。取健康昆明種小鼠50只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為5組，每組各10只。模型對(duì)照組灌胃給予0.5%CMC-Na；陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予陽(yáng)性藥；紅毛七水提取物低劑量組給予紅毛七水提取物0.52 g/kg，相當(dāng)于紅毛七生藥3 g/kg；紅毛七水提取物中劑量組給予紅毛七水提取物1.56 g/kg，相當(dāng)于紅毛七生藥9 g/kg；紅毛七水提取物高劑量組給予紅毛七水提取物4.68 g/kg，相當(dāng)于紅毛七生藥27 g/kg。各組給藥體積均為0.2 mL/10 g，每天給藥1次，連續(xù)7 d。

1.2.2.2 小鼠耳腫脹法[10] 動(dòng)物分組及給藥方法、劑量同“1.2.2.1”項(xiàng)下，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予陽(yáng)性藥阿司匹林（500 mg/kg）。末次給藥1 h后小鼠左耳廓兩面均勻涂抹致炎劑二甲苯20 μL/只，右耳不做任何處理為正常耳。1 h后小鼠脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下雙耳用7 mm直徑打孔器分別在雙耳同一部位打下圓形耳片并稱質(zhì)量，計(jì)算耳腫脹度和耳腫脹抑制率。耳腫脹度=左耳片質(zhì)量（mg）-右耳片質(zhì)量（mg）。耳腫脹抑制率（%）=（模型對(duì)照組耳腫脹度-給藥組耳腫脹度）/模型對(duì)照組耳腫脹度×100%。

1.2.2.3 小鼠肉芽增生法[11-13] 動(dòng)物分組及給藥方法、劑量同“1.2.2.1”項(xiàng)下，陽(yáng)性對(duì)照組給予吲哚美辛（20 mg/kg）。小鼠乙醚麻醉后，無菌條件下將一個(gè)經(jīng)高壓滅菌并稱重的濾紙片植入左側(cè)鼠蹊部，隨即縫合。于次日各組小鼠給予相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，脫頸椎處死小鼠，打開原切口取出紙片及周圍包裹的肉芽組織，剔除脂肪組織，60℃烘干24 h，稱其質(zhì)量，計(jì)算肉芽腫抑制率。肉芽腫抑制率=（模型對(duì)照組肉芽腫質(zhì)量-給藥組肉芽腫質(zhì)量）/模型對(duì)照組肉芽腫質(zhì)量×100%。

1.2.3 紅毛七鎮(zhèn)痛作用的考察

1.2.3.1 小鼠乙酸扭體法[10] 動(dòng)物分組及給藥方法、劑量同“1.2.2.1”項(xiàng)下，陽(yáng)性藥為吲哚美辛（20 mg/kg）。末次給藥1 h后，各組小鼠均ip 0.6%乙酸（臨用前配制，0.1 mL/10g）致痛。觀察各組小鼠開始出現(xiàn)扭體反應(yīng)（扭體表現(xiàn)為軀干伸張、腹部?jī)?nèi)凹、臀部抬高）的時(shí)間（即扭體潛伏期）及15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)，計(jì)算疼痛抑制率[14-16]。疼痛抑制率=（模型對(duì)照組扭體反應(yīng)次數(shù)-給藥組扭體反應(yīng)次數(shù)）/模型對(duì)照組扭體反應(yīng)次數(shù)×100%。

1.2.3.2 小鼠熱板法[10] 取健康昆明種雌性小鼠，置于（55±0.5）℃熱板測(cè)痛儀中，以舔后足作為疼痛反應(yīng)指標(biāo)，記錄小鼠從放入測(cè)痛儀至出現(xiàn)疼痛反應(yīng)所需時(shí)間（痛閾值），<5 s或>30 s或跳躍者棄去不用。將初篩合格的小鼠各測(cè)2次痛閾值，每次間隔10分鐘，取其平均值作為給藥前正常痛閾值。篩選合格的小鼠分組及給藥方法、劑量同“1.2.2.1”項(xiàng)下，陽(yáng)性藥為吲哚美辛（20 mg/kg）。分別于末次給藥后30、60、90、120 min測(cè)定小鼠痛閾值，若60 s內(nèi)無疼痛反應(yīng)，立即取出小鼠，痛閾值按60 s計(jì)[15-16]。endprint

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 紅毛七抗炎作用的考察結(jié)果

2.1.1 紅毛七水提取物對(duì)小鼠耳腫脹的影響

陽(yáng)性對(duì)照組和紅毛七水提取物中、高劑量組小鼠耳腫脹度均小于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01），紅毛七水提取物低劑量組小鼠耳腫脹度小于模型對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

2.1.2 紅毛七水提取物對(duì)小鼠肉芽增生的影響

陽(yáng)性對(duì)照組肉芽組織濕重和干重均低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。紅毛七水提取物高劑量組肉芽組織干重低于模型對(duì)照組（P < 0.05），其肉芽組織濕重與模型對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。紅毛七水提取物低、中劑量組可以減輕肉芽組織濕重和干重，但與模型對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

2.2 紅毛七鎮(zhèn)痛作用考察結(jié)果

2.2.1 紅毛七水提取物對(duì)乙酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

陽(yáng)性對(duì)照組和紅毛七水提取物中、高劑量組小鼠扭體反應(yīng)潛伏期較模型對(duì)照組延長(zhǎng)（P < 0.05或P < 0.01），紅毛七水提取物低劑量組小鼠扭體反應(yīng)潛伏期較模型組有所延長(zhǎng)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。陽(yáng)性對(duì)照組和紅毛七水提取物中、高劑量組小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)少于模型對(duì)照組（P < 0.01），紅毛七水提取物低劑量組小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)與模型對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表3。

2.2.2 紅毛七水提取物對(duì)熱板法小鼠痛閾值的影響

給藥前，各組小鼠的痛閾值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。陽(yáng)性對(duì)照組和紅毛七水提取物高劑量組在給藥30、60、90、120 min后，均能提高小鼠痛閾值，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）；紅毛七水提取物低劑量組小鼠痛閾值高于模型對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；紅毛七水提取物中劑量組小鼠在給藥30、60 min后，痛閾值較模型對(duì)照組提高（P < 0.05），但在給藥90、120 min后，痛閾值與模型對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表4。

3 討論

炎性反應(yīng)可概括為早、中、晚三期，即血管反應(yīng)、細(xì)胞反應(yīng)及組織增生三個(gè)階段。早期炎癥的主要表現(xiàn)是毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性亢進(jìn)、滲出和水腫，中期炎癥主要是白細(xì)胞向炎灶聚集，晚期炎癥則以炎灶屏障形成和組織增生為特點(diǎn)[17]。熱板法系利用一定強(qiáng)度的溫?zé)岽碳?dòng)物軀體某一部位以產(chǎn)生痛反應(yīng)，以刺激開始至出現(xiàn)反應(yīng)的潛伏期為測(cè)痛指標(biāo)，是一種高位中樞參與的反應(yīng)[18-23]。雄性小鼠可因陰囊下垂而受到刺激及損傷，所以選擇雌性小鼠。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)尤為注意控制室溫恒定，維持在（18±1）℃，可通過增加篩選次數(shù)挑選出對(duì)痛反應(yīng)時(shí)間波動(dòng)小的動(dòng)物。扭體法為篩選非麻醉性鎮(zhèn)痛藥物的常用方法，系應(yīng)用化學(xué)刺激物注入小鼠腹腔內(nèi)，引起深部、大面積且較持久的疼痛刺激，致使小鼠產(chǎn)生扭體反應(yīng)。本法是篩選弱鎮(zhèn)痛藥的敏感、簡(jiǎn)便方法。

紅毛七盛產(chǎn)于陜西，尤其在秦嶺南北坡廣泛分布，民間應(yīng)用歷史比較悠久。本研究通過建立二甲苯致小鼠耳腫脹模型考察紅毛七水提取物對(duì)炎性反應(yīng)早期炎性水腫的影響，建立紙片致小鼠肉芽增生模型考察紅毛七水提取物對(duì)炎性反應(yīng)晚期增生性病變的作用，結(jié)果表明，紅毛七水提取物能夠減輕小鼠的耳腫脹度，減少紙片所致肉芽增生，表現(xiàn)出一定的抗炎作用。同時(shí)，采用乙酸扭體法考察紅毛七水提取物的外周鎮(zhèn)痛作用，熱板法考察紅毛七水提取物的中樞鎮(zhèn)痛作用，結(jié)果表明，紅毛七水提取物能延長(zhǎng)痛反應(yīng)潛伏期，減少扭體次數(shù)，提高小鼠的痛閾值，表現(xiàn)出一定的鎮(zhèn)痛作用。有研究證實(shí)，紅毛七含有生物堿和三萜皂苷類成分[19]，它們是否為其發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，還有待進(jìn)一步研究證實(shí)。同時(shí)，對(duì)于紅毛七抗炎鎮(zhèn)痛作用的相關(guān)機(jī)制也將成為下一步研究的重點(diǎn)，相信這對(duì)進(jìn)一步了解紅毛七將會(huì)是有益的探索。

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（收稿日期：2017-05-20 本文編輯：程 銘）endprint