王玨 張畢奎 戴迎春

HPLC法測定古漢養(yǎng)生精片（口服液）中淫羊藿苷的含量

王玨 張畢奎 戴迎春

目的：建立高效液相色譜法測定古漢養(yǎng)生精片和古漢養(yǎng)生精口服液中淫羊藿苷含量方法。方法：采用Hypersil BDS C18柱（250mm×4.6mm，5μm），以甲醇-1.5%冰醋酸（58:42）為流動相，流速：1.0ml/min，檢測波長270nm。結(jié)果：淫羊藿苷在0.088～1.760μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.9991），平均回收率為98.0%，RSD為1.09%。結(jié)論：所建高效液相色譜法簡單,準(zhǔn)確，專屬性強，重現(xiàn)性好，可用于古漢養(yǎng)生精片（口服液）的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；古漢養(yǎng)生精片；古漢養(yǎng)生精口服液；淫羊藿苷；含量

現(xiàn)今社會生活節(jié)奏的日益加快，隨著年齡的增長，身體功能也開始衰退，人們開始選擇一些養(yǎng)生藥品來延緩這個過程。古漢養(yǎng)生精是依據(jù)馬王堆西漢古墓出土的古漢《養(yǎng)生方》精髓，由湖南中醫(yī)研究所開發(fā)的養(yǎng)生藥，并且是國家保密局、國家科委將其列為國家秘密技術(shù)項目及國家保密處方。

古漢養(yǎng)生精片中（口服液）由淫羊藿，人參，黃芪，金櫻子肉，枸杞子，菟絲子，白芍，甘草等藥物組成。其中淫羊藿中的淫羊藿苷能增加心腦血管血流量、促進造血功能、免疫功能及骨代謝，具有補腎壯陽、抗衰老、抗腫瘤等功效。本研究建立高效液相色譜法測定古漢養(yǎng)生精片和古漢養(yǎng)生精口服液中淫羊藿苷含量的方法。淫羊藿化學(xué)式見圖1。

圖1 淫羊藿苷化學(xué)式

1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent 1100，美國）、超聲儀（HS6150）、分析天平、Maxi Mix型漩渦振蕩儀。

2 試劑

古漢養(yǎng)生精片（批號9055），古漢養(yǎng)生精口服液（批號10001），均購買于養(yǎng)天和大藥房。淫羊藿對照品（中國藥品生物檢定所提供，批號110737-2004155），甲醇（色譜純），冰醋酸（分析純），蒸餾水（超純水）。

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil BDS C18柱（250mm× 4.6mm，5μm），流動相為甲醇-1.5%冰醋酸（58:42），流速1.0ml/min,柱溫30℃，檢測波長270nm，進樣量為20μl。1.5%冰醋酸制備：精密量取7.50ml冰醋酸，加蒸餾水至500ml，攪拌混勻，0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

3.2 對照品制備 精密稱取淫羊藿苷對照品8.80mg置于100ml量瓶中，加蒸餾水（用0.45μm微孔濾膜濾過）適量，超聲30min，放冷，加蒸餾水至刻度，即得質(zhì)量濃度為88.0μg/ml。

3.3 供試品溶液制備 古漢養(yǎng)生精片溶液配制：取本品10片，研細(xì)，精密稱量1.60g，置于100ml量瓶中，加入90ml蒸餾水，超聲處理30min，放冷，加蒸餾水至刻度，搖勻，過濾，即得片劑供試品溶液。古漢養(yǎng)生精口服液溶液配制：取本品一瓶（10ml），精密吸取本品0.100ml，置于5ml量瓶中，加入蒸餾水4ml，超聲處理30min，放冷，加蒸餾水至刻度，搖勻，過濾，即得口服液供試品溶液。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密吸取對照品溶液0.5ml,1ml, 2ml,3ml,4ml，5ml，10ml置于10ml容量瓶中，分別加入蒸餾水（已過濾）至刻度，搖勻，分別取上述溶液20μl進樣，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)（A），進行線性回歸。線性回歸方程為A=56.928C-85.809 R2= 0.9991。表明淫羊藿苷在進樣量在0.088～1.760μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。見表1、圖2～圖3。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

圖2 標(biāo)準(zhǔn)品圖

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

3.5 精密度試驗 精密吸取88.0μg/ml對照品100μl，加蒸餾水300μl，配成22.0μg/ml溶液，振蕩，搖勻，重復(fù)進樣5次，20μl進樣。RSD=1.35%，精密度良好。見表2。

表2 精密度實驗結(jié)果

3.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，在0h,3h，6h, 12h,24h分別進樣，記錄淫羊藿苷峰面積。見表3。結(jié)果RSD=1.29%，室溫下供試品24h內(nèi)較穩(wěn)定。

表3 穩(wěn)定性實驗結(jié)果

3.7 加樣回收實驗 取已知含量的樣品，制備成供試品溶液。精密量取供試品溶液100μl置1.5ml eppen?dorf離心管中（共9份并編號），分別加入低（8.8μg/ml）、中（26.4μg/ml）、高（44.0μg/ml）濃度的對照品溶液100μl，各3份，搖勻，20μl進樣。見表4。

表4 加樣回收實驗結(jié)果

3.8 樣品含量測定 古漢養(yǎng)生精片（批號10001）：取本品10片，研細(xì)，精密稱量1.60g，置于100ml量瓶中，加入90ml蒸餾水，超聲處理30min，放冷，加蒸餾水至刻度，搖勻，過濾。取濾液20μl進樣，記錄峰面積。將峰面積值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線A=56.928C-85.809，計算淫羊藿苷含量為0.53mg/g。見圖4。古漢養(yǎng)生精口服液（批號9055）：取本品一瓶（10ml），吸取本品0.100ml，置于5ml量瓶中，加入蒸餾水4ml，超聲處理30min，放冷，加入蒸餾水至刻度搖勻，過濾，取濾液20μl，進樣記錄峰面積。將峰面積值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線A=56.928C-85.809，計算淫羊藿苷含量為1.12mg/ml。見圖5。

圖4 古漢養(yǎng)生精片

圖5 古漢養(yǎng)生精口服液

4 討論

古漢養(yǎng)生精片（口服液）為中藥復(fù)方制劑，組分復(fù)

雜，其中淫羊藿具有益精氣、堅筋骨、補腰膝,強心力之功效。淫羊藿總黃酮的主要有效成分為淫羊藿苷,目前淫羊藿藥材以淫羊藿苷為指標(biāo)，本研究通過高相液相色譜法對其進行質(zhì)量評估。

樣品液色譜圖中淫羊藿苷峰與其他雜質(zhì)峰分離度＞1.5，理論塔板數(shù)＞1500符合高效液相分析測定要求，按照文獻中[1-4]乙腈-水為流動相，分離效果較好但保留時間較長需約16min出峰。按照文獻[5,6]等的色譜條件，流動相調(diào)整為甲醇-水分離效果不好。把流動相換成甲醇-1.5%冰醋酸（58∶42）各項條件都符合。該方法簡單,準(zhǔn)確，專屬性強，重現(xiàn)性好，可作為古漢養(yǎng)生精片（口服液）中的質(zhì)量控制方法。

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Determination the Content of Icariin in Guhanyangshengjing pills and oral ilquid by HPLC

Wang Jue1,Zhang Bikui2,Dai Yingc?hun3.1.Department of Pharmacy,Hunan Prevention and Treatment Institute of Occupational Diseases Hospital,Changsha,410000，China；2.Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South University,Changsha 410000，China；3 Department of Pharmacy, People’s Hospital of Hunan Province,Changsha 410000，China

Objective:To establish a method of determination the content of icariin in Guhanyangshengjing pills（oral ilquid）by HPLC.Methods:Hypersil BDS C18 column（250mm×4.6mm，5μm）was used,menthanol-glacial acetic acid（58:42）were used as mobile phase,the flow rate was 1.0ml/min.The detective wavelength was 270nm.Results:The linearity was good when the icariin range from 4.40—88.0μg／m（r=0.9991）.The average recovery of icariin was 98.0%.RSD was 1.09%.Conclusion:The method is simple,accurate,specific and can be applied to quality control of the Guhanyangshengjing pills（oral ilquid）.

HPLC;Guhanyangshengjing pills;Guhanyangshengjing oral;ilquid icariin;content

410000湖南 長沙，湖南省職業(yè)病防治醫(yī)院藥劑科（王玨）；410000湖南 長沙，中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院藥劑科（張畢奎）；410000湖南 長沙，湖南省人民醫(yī)院藥劑科（戴迎春）

王玨，E-mail:593706899@qq.com

A

1004-2725（2016）11-0812-04