李森輝 董鵬鵬 戴衛(wèi)波 梅全喜

【摘 要】 采用香草醛-冰醋酸-高氯酸顯色法考察廣西6個(gè)不同產(chǎn)地走馬胎總?cè)频暮?。結(jié)果表明，6個(gè)不同地區(qū)走馬胎中總?cè)坪繛?3.1～23.6mg/g，組間含量之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該法操作簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可為走馬胎質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。

【關(guān)鍵詞】 走馬胎；三萜；香草醛-冰醋酸-高氯酸顯色法

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2018）01-0033-04

Abstract：The content of total triterpenoid of Ardisia gigantifoli from six different origins in Guangxi province by Vanillin-glacial acetic acid-perchloric acid colorimetric method were determined.The results showed that the average contents of total triterpenoid of Ardisia gigantifoli from three different origins were between 23.1～23.6mg/g， and there were no significant difference among them.The method is simple， accurate and reproducible， which can provide reference for evaluating the quality of Ardisia gigantifoli in different origins.

Keywords：Ardisia gigantifolia stapf.；Triterpenoid；Vanillin-glacial Acetic Acid-perchloric Acid Colorimetric Method

走馬胎為紫金牛科植物大葉紫金牛Ardisia gigantifolia stapf.的干燥根，在《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》、《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》有收載，具有祛風(fēng)除濕、活血化瘀的功效，臨床用于跌打損傷、風(fēng)濕痹痛等治療[1]。研究表明，從走馬胎中分離得到的近20個(gè)三萜皂苷類成分[2-3]，結(jié)構(gòu)多以齊墩果烷型為主，并對(duì)Hela、NCI-H460、SF-268、MCF-7、HepG2、CNE、MCF-7等多種腫瘤均具有較強(qiáng)的抑制作用[4-8]，表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性。課題前期研究也表明，走馬胎醇提物能改善佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)腫脹和關(guān)節(jié)組織病理變化[9]，并能下調(diào)血清炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表達(dá)[10]，對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有一定治療作用。三萜類成分是走馬胎的藥效物質(zhì)群，有必要對(duì)該類成分含量進(jìn)行測定。筆者測定廣西6個(gè)地區(qū)走馬胎中總?cè)频暮浚⑦M(jìn)行方法學(xué)考察，為走馬胎質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 BS224S萬分之一電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；UV-2550紫外-可見分光光度計(jì)（日本島津公司）；JP-300A-8高速多功能粉碎機(jī)（永康市久品工貿(mào)有限公司）；DK-8D電熱恒溫三孔水槽（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）。

1.2 材料 走馬胎（采自廣西玉林、桂平、桂林、百色）經(jīng)過廣東藥科大學(xué)田素英教授鑒定為走馬胎Ardisia gigantifolia Stapf.的根，詳見表1。齊墩果酸對(duì)照品（批號(hào)：MUST-16042708，成都曼思特生物科技有限公司）；其他乙醇、冰醋酸、高氯酸、香草醛等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備 取各個(gè)產(chǎn)地走馬胎藥材粗粉1g，精密稱定，置于100mL具塞錐形瓶中，加70%乙醇按料液比1∶[KG-*3/5]20于85℃回流提取1h，放冷，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，過濾，濾液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，70%乙醇定容，搖勻即得。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取齊墩果酸對(duì)照品約2mg，精密稱定，加甲醇溶解并定容于10mL容量瓶，搖勻，即得濃度為200.0μg/mL的齊墩果酸對(duì)照品溶液。

2.3 檢測波長的確定 分別精密吸取供試品、對(duì)照品溶液0.2mL，置于10mL具塞試管中，70℃水浴揮干溶劑，依次加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混勻，密塞，于60℃水浴中加熱15min，取出，冰水浴2min，加入冰醋酸5mL，混勻，靜置1h，用紫外-可見分光光度計(jì)在800～200nm進(jìn)行全波段掃描，結(jié)果供試品及對(duì)照品均在540nm處有最大吸收，因此確定檢測波長為540nm。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密吸取齊墩果酸對(duì)照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5mL，按照“2.3”項(xiàng)下顯色后于紫外-可見分光光度計(jì)測定吸光度，其中0mL對(duì)照品作為空白對(duì)照。結(jié)果見表2。

以齊墩果酸對(duì)照品濃度（C，μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為：A=0.0654C-0.1114，R2=0.9995，樣品的濃度在3.333～16.667μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度考察 精密吸取齊墩果酸對(duì)照品溶液0.2mL，按照“2.3”項(xiàng)下方法顯色后于紫外-可見分光光度計(jì)測定吸光度，連續(xù)測定6次。結(jié)果齊墩果酸對(duì)照品吸光度的RSD為0.84%，說明儀器精密度良好。

2.5.2 穩(wěn)定性考察 取同一批走馬胎藥材粗粉約1g，精密稱定，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.3”項(xiàng)下方法顯色后于0～130min內(nèi)每隔10min測定吸光度。結(jié)果走馬胎供試品顯色后在60～120min內(nèi)吸光度的RSD為2.62%，說明供試品顯色后在60～120min內(nèi)保持穩(wěn)定，因此，測定吸光度的時(shí)間為顯色后的1h。結(jié)果見表3。

2.5.3 重復(fù)性考察 取同一批走馬胎藥材粗粉約1g，精密稱定，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行制備6份，按照“2.3”項(xiàng)下方法顯色1h后測定吸光度，計(jì)算總?cè)坪?。結(jié)果走馬胎總?cè)坪康腞SD為1.43%，說明此方法重復(fù)性良好。

2.5.4 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批已知總?cè)坪康淖唏R胎藥材粗粉約0.5g，精密稱定，加入和走馬胎藥材中總?cè)坪肯喈?dāng)?shù)凝R墩果酸對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行制備6份，按照“2.3”項(xiàng)下方法顯色1h后測定吸光度，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果齊墩果酸的平均加樣回收率為97.64%，加樣回收率的RSD為1.29%，說明此方法測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。結(jié)果見表4。

2.6 含量測定 取6份走馬胎藥材粗粉各約1g，精密稱定，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.3”項(xiàng)下方法顯色1h后測定吸光度，計(jì)算總?cè)坪?。表明總?cè)坪吭?.31%～2.36%，即含量在23.1～23.6mg/g，平均含量為23.33mg/g，組間含量差異很小。結(jié)果見表5。

3 討論

走馬胎在苗、瑤、黎族等少數(shù)民族均做藥用，在兩廣地區(qū)均有分布，目前廣西已有規(guī)范栽培，市售走馬胎多為廣西產(chǎn)。在兩廣省標(biāo)中均有收載，但所載用藥部位略有不同，廣西省標(biāo)1990年版用藥部位為走馬胎的根及根莖[11]，廣東省標(biāo)2004年版用藥部位為走馬胎根[1]，功效與用法用量基本相同，均載為祛風(fēng)濕、活性化瘀的功效。本草考證發(fā)現(xiàn)，《本草綱目拾遺》最早載走馬胎產(chǎn)于“粵東龍門縣南困山”，即今廣東惠州南昆山，書中未有藥用部位的明確描述，僅有外形描述為“形如柴根”，而在1970年版的《龍門民間草藥》中明確記載了走馬胎“用根沖酒服治療風(fēng)濕痹痛，舒筋活絡(luò)”，表明走馬胎的根入藥更符合傳統(tǒng)的用藥習(xí)慣[12]。而廣西載走馬胎根莖入藥，可能從走馬胎藥源匱乏，為充分利用該藥用資源而增加藥用部位。本課題為了切合傳統(tǒng)用藥習(xí)慣，對(duì)廣西桂林、玉林、桂平、百色4區(qū)采挖和購買了6批次走馬胎，并對(duì)走馬胎根中主要藥效成分總?cè)频暮窟M(jìn)行測定，考察其質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)以齊墩果酸為對(duì)照品，建立走馬胎藥材中總?cè)频暮繙y定方法，建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線在3.333～16.667μg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系（R2=0.9997），精密度、60～120min內(nèi)穩(wěn)定性、重復(fù)性的RSD分別為0.84%、2.62%、1.43%，平均加樣回收率為97.64%，加樣回收率的RSD為1.29%，均符合要求，可為走馬胎藥材的質(zhì)量控制提供參考。而測定廣西6個(gè)不同地區(qū)的走馬胎總?cè)坪吭?3.1～23.6mg/g，該6個(gè)產(chǎn)地的走馬胎總?cè)坪坎町愝^小，平均含量為23.33mg/g，質(zhì)量相當(dāng)。

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（收稿日期：2017-11-15 編輯：穆麗華）