劉毓剛，吳麗娟，石泉貴，黃志成，付學兵，張 帥，赤列曲宗，次吉，但剛，喬 曦

（1.成都軍區(qū)總醫(yī)院檢驗科，四川成都610083；2.成都軍區(qū)總醫(yī)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學科，四川成都610083；3.西藏軍區(qū)拉薩總醫(yī)院檢驗科，西藏拉薩850000；4.解放軍第75醫(yī)院檢驗科，西藏昌都854000；5.解放軍第519醫(yī)院體檢中心，6.涼山州第一人民醫(yī)院檢驗科，四川西昌615000；7.西藏林周縣人民醫(yī)院檢驗科，西藏林周851600）

西南地區(qū)各族人群血清同型半胱氨酸水平分析及參考范圍的建立

劉毓剛1，吳麗娟2，石泉貴3，黃志成4，付學兵5，張 帥6，赤列曲宗7，次吉7，但剛1，喬 曦1

（1.成都軍區(qū)總醫(yī)院檢驗科，四川成都610083；2.成都軍區(qū)總醫(yī)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學科，四川成都610083；3.西藏軍區(qū)拉薩總醫(yī)院檢驗科，西藏拉薩850000；4.解放軍第75醫(yī)院檢驗科，西藏昌都854000；5.解放軍第519醫(yī)院體檢中心，6.涼山州第一人民醫(yī)院檢驗科，四川西昌615000；7.西藏林周縣人民醫(yī)院檢驗科，西藏林周851600）

目的 分析西南地區(qū)各族人群血清同型半胱氨酸（HCY）水平，建立基于循環(huán)酶法的西南主要民族血清HCY參考區(qū)間，并初步探討海拔對血清HCY水平影響。方法 用循環(huán)酶法試劑檢測體檢健康的漢族人群4021名（包括平原漢族3581名、高原漢族440名）、藏族人群680名、彝族人群369名血清HCY水平，根據(jù)性別、年齡、種族、生活海拔進行分層分組統(tǒng)計分析。結(jié)果 藏族人群血清HCY水平均高于彝族及漢族同性別同年齡階段組（P＜0.01），而彝族人群均高于漢族同性別同年齡階段組（P＜0.01）；漢、彝族各年齡階段男性血清HCY水平均顯著高于女性（P＜0.05）；藏族人群性別間血清HCY水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；彝族、藏族所有年齡組間血清HCY水平差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而漢族男性和女性各年齡組間血清HCY水平不完全一致（P=0.001，0.005），兩兩分別比較發(fā)現(xiàn)，漢族男性和女性在>70歲組、61～70歲組與其他各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），而＜60歲各組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。民族年齡性別分層分析可將所有受試者分為漢族男性21～60歲、61～70歲、>70歲、女性21～60歲、61～70歲、>70歲、彝族男性、女性、藏族人群九個小組，血清HCY水平參考區(qū)間分別為6.87～22.18μmol/L、7.33～27.69μmol/L、9.81～31.03μmol/L、4.39～17.36μmol/L、5.68～20.90μmol/L、7.11～26.33μmol/L、8.65～27.11μmol/L、6.92～25.37μmol/L、10.26～36.66μmol/L。根據(jù)生活海拔分層分析，高原漢族組血清HCY水平顯著高于平原漢族組（P＜0.001）。結(jié)論 健康人群血清HCY水平與性別、年齡、種族、生活海拔密切相關(guān)，我們基于循環(huán)酶法根據(jù)不同因素分別建立的西南地區(qū)各組人群血清HCY參考區(qū)間，對本地區(qū)臨床實驗室有重要借鑒意義。

同型半胱氨酸； 參考區(qū)間； 循環(huán)酶法； 種族差異； 高海拔

同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）是一種人體內(nèi)的含硫氨基酸，其本身不參與蛋白質(zhì)的合成，而是蛋氨酸和半胱氨酸代謝的重要中間產(chǎn)物［1］。高同型半胱氨酸血癥是葉酸和維生素B12缺乏的一個敏感指標，也是心血管疾病獨立危險因素［2］，并與其預后密切相關(guān)［3］。然而，血清HCY水平受生理因素、生活方式、環(huán)境因素、遺傳因素及種族等多因素影響［4-5］，此外不同的檢測方法、試劑廠家和實驗室間的檢測結(jié)果也有一定差異［6］，因此，每個實驗室需要建立一個針對不同人群的參考區(qū)間。本研究采用北京九強循環(huán)酶法試劑對中國西南地區(qū)各少數(shù)民族健康人群血清HCY水平進行檢測，建立基于本方法的西南各族人群HCY參考范圍。

材料與方法

1 研究對象

1.1 漢族人群 ①平原漢族組：2015年5月至12月在成都軍區(qū)總醫(yī)院體檢健康的漢族人群3581名，其中男1628名，女1953名，平均年齡44.3± 20.2歲；②高原漢族組：同期在西藏軍區(qū)拉薩總醫(yī)院、解放軍第75醫(yī)院體檢健康的漢族人群440名，這些漢族人均在海拔超過3000米的高原地區(qū)生活超過3年，每年高原生活時間超過10月，其中男218名，女222名，平均年齡41.4±24.8歲。

1.2 藏族人群 同期在西藏軍區(qū)拉薩總醫(yī)院、解放軍第75醫(yī)院、林周縣人民醫(yī)院體檢健康的藏族人群680名，其中男376名，女304名，平均年齡42.3±19.0歲。

1.3 彝族人群 同期在解放軍519醫(yī)院、涼山州第一人民醫(yī)院體檢健康的彝族人群369名，其中男246名，女123名，平均年齡32.1±10.9歲。

所有檢測對象均排除內(nèi)分泌疾病、高血壓、心腦血管疾病、腎臟疾病、腫瘤等慢性疾病，一個月內(nèi)的感染、創(chuàng)傷等急性疾病以及孕婦和哺乳期婦女。

2 標本采集及處理

清晨在受試者清醒安靜狀態(tài)下坐姿采用BD公司惰性分離膠真空采血管抽取空腹外周靜脈血，2h內(nèi)2500g離心5min分離血清，-80℃保存，3天內(nèi)運送至成都軍區(qū)總醫(yī)院集中檢測。

3 試劑和儀器

HCY檢測試劑盒及校準品為北京九強生物技術(shù)股份有限公司“金斯爾”品牌產(chǎn)品；質(zhì)控血清為BIORAD公司產(chǎn)品；AU2700全自動生化分析儀購自Beckman Coulter公司。

4 實驗方法

HCY檢測按試劑說明書對全自動生化儀參數(shù)進行設置，根據(jù)標準品獲得標準曲線，計算各標本濃度值，每日進行室內(nèi)質(zhì)控檢測，保證檢測系統(tǒng)處于在控狀態(tài)。

5 統(tǒng)計學處理

所有統(tǒng)計學分析均利用SPSS 19.0軟件進行處理。各組HCY水平以Kolmogorov-Smirnov檢驗發(fā)現(xiàn)均為非正態(tài)分布，各組間比較數(shù)據(jù)以中位數(shù)（X25%～X75%）表示。多組間比較采用非參數(shù)Kruskal-Wallis H檢驗，組間兩兩比較采用非參數(shù)Dunn’s檢驗，兩獨立樣本比較采用Mann-Whitney U檢驗；平原和高原漢族組間性別差異采用χ2檢驗，年齡比較采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。依照CLSIC28-A3推薦方法［7］，Dixon法判別離群值進行剔除，并根據(jù)組間比較判斷是否需要按性別、年齡對參考區(qū)間進行分組，用X2.5%和X97.5%計算95%參考區(qū)間。

結(jié) 果

1 西南各民族不同年齡、性別分層血清HCY水平分析

分別將漢族、彝族、藏族按男、女性每10歲一個年齡段分組，各族不同性別各年齡組血清HCY水平見表1。

1.1 血清HCY水平的民族差異 藏族人群血清HCY水平高于彝族及漢族同性別、同年齡階段組（P＜0.01），而彝族人群高于漢族同性別、同年齡階段組（P＜0.01）。

1.2 血清HCY水平的性別差異 漢、彝族各年齡階段血清HCY水平在不同性別間的差異均有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），而藏族人群血清HCY水平性別間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

1.3 血清HCY水平的年齡差異 各民族不管男性還是女性，血清HCY水平總體隨年齡的增大而逐漸增高。經(jīng)Kruskal-Wallis H檢驗，彝族男性、女性，藏族男性、女性所有年齡組間血清HCY水平差異均無統(tǒng)計學意義（P：0.108，0.663，0.282，0.456），而漢族男性、女性各年齡組間血清HCY水平不完全一致（P：0.001，0.005），Dunn’s檢驗兩兩分別比較發(fā)現(xiàn)，漢族男性及女性在>70歲組、61-70歲組與其他各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而＜60歲各組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

表1 中國西南地區(qū)各民族不同年齡、性別分層血清HCY水平［μmol/L，中位數(shù)（X25%～X75%）］

2 西南各族人群血清HCY 95%參考范圍的確定

根據(jù)以上民族、性別、年齡分層分析結(jié)果，我們將血清HCY水平差異無統(tǒng)計學意義的組別進行合并，對漢族人群分為男性21～60歲、61～70歲、>70歲、女性21～60歲、61～70歲、>70歲六個組，彝族人群分為男性21～50歲、女性21～50歲兩個組，藏族不分性別21～60歲分層建立參考區(qū)間，見表2。

表2 西南地區(qū)各族人群血清HCY參考范圍

3 不同海拔生活的漢族人群血清HCY水平分析

血清HCY水平在高原漢族組高于平原漢族組，兩者間差異有統(tǒng)計學意義（Z=-4.129，P＜0.001），而兩組間性別及年齡差異無統(tǒng)計學差異（P=0.066，0.098），見表3。

表3 不同海拔生活的漢族人群血清HCY水平比較

討 論

HCY是一種導致血管內(nèi)皮損傷的內(nèi)源性物質(zhì)，它能通過氧自由基使血管內(nèi)皮受損，喪失抗血栓功能，促凝微環(huán)境的形成［1］，導致多種血管性疾病的發(fā)生。國外Meta分析結(jié)果顯示，每降低3毫摩爾/升或降25%Hcy水平會分別降低心臟病和中風的風險11%和19%［8］。目前導致高HCY血癥常見原因主要是相關(guān)酶缺陷或維生素缺乏引起的HCY代謝障礙，體內(nèi)HCY堆積。本研究希望通過北京九強循環(huán)酶法試劑盒檢測中國西南地區(qū)漢、藏、彝族健康人群血清HCY水平，并對年齡、性別進行分層分析，建立基于本方法的西南各族人群血清HCY參考范圍，并初步分析海拔對血清HCY水平的影響，為臨床心腦血管及其他相關(guān)疾病的風險預測、診斷及監(jiān)測提供參考。

到目前為止，國內(nèi)外對健康人群HCY水平研究較少，過往研究多是從流行病學方向分析健康人群HCY水平及其影響因素［9-10］，較少有從臨床檢驗診斷出發(fā)建立適合本地區(qū)本實驗室參考范圍的研究，尤其是對我國少數(shù)民族血清HCY水平研究尚未見報道。本研究顯示，漢族及彝族人群男性、女性血清HCY水平均表現(xiàn)為隨年齡增長而逐漸增高，大于50歲后這種趨勢尤為明顯，且男性高于女性，與過往研究結(jié)果一致［10-11］，這可能是因為老年人維生素消化吸收功能、HCY代謝酶活性及腎功能下降綜合作用引起的，且文獻報道雌激素能顯著降低血清HCY水平［12］。而藏族人群血清HCY水平與年齡及性別間差異不明顯可能是由于其HCY基礎(chǔ)水平較高，掩蓋了年齡性別間的差異。Moon等［13］報道了用雅培AxSym系統(tǒng)和西門子ADVIA系統(tǒng)兩種方法分別建立的韓國人群血清HCY參考范圍，發(fā)現(xiàn)HCY水平除與年齡、性別有關(guān)外，還與檢測方法密切相關(guān)。但其參考范圍與本研究結(jié)果相差較大，這可能是由于遺傳背景和檢測方法的差異造成的。郭天坤等［14］使用四川新成公司生產(chǎn)的循環(huán)酶法檢測四川人群HCY水平顯著低于本研究結(jié)果，提示同一方法不同廠家生產(chǎn)的試劑間一致性也較差。

另外，本研究顯示，藏族及彝族人群血清HCY水平顯著高于漢族人群，這可能是由于飲食習慣（條件）、生活環(huán)境及遺傳背景造成。葉酸及維生素B12是同型半胱氨酸代謝關(guān)鍵的輔酶。大量研究表明，飲食中缺乏葉酸和維生素B12是高同型半胱氨酸血癥的主要和直接原因之一［15］。藏族和彝族人群飲食中缺乏富含葉酸的水果和綠葉蔬菜可能是造成其血清HCY水平較高的原因。國外研究也顯示，經(jīng)濟狀況較差的地區(qū)的人群，由于營養(yǎng)搭配不合理，血清HCY水平較高［11］。下一步我們將檢測藏族和彝族健康人群血清葉酸和維生素B12水平，分析飲食對其HCY水平的影響。多個研究表明，遺傳背景與血清HCY水平密切相關(guān)，在同一年齡階段，韓國男性血清HCY水平高于白人男性而低于黑人男性［13］。參與HCY及葉酸代謝的多個基因SNP位點突變被國內(nèi)外多個研究證明可以引起高HCY血癥［16-17］。中國西南地區(qū)各族人群血清HCY水平的差異是否由這些SNP位點的分布頻率差異造成，我們將進一步進行研究。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，生活在越高海拔的民族血清HCY水平也越高，海拔對血清HCY水平可能存在直接的影響，高原地區(qū)漢族人血清HCY水平高于平原地區(qū)漢族人的結(jié)果更驗證了此推測，但是否將高原地區(qū)生活的漢族人群單獨建立血清HCY參考范圍，本研究團隊內(nèi)部還存在爭議。Kotwal等［18］研究也表明，生活在海拔3000米以上的士兵血清HCY顯著升高，并在高海拔地區(qū)高腦血栓風險中發(fā)揮著重要作用。我們推測海拔對HCY的影響可能是通過調(diào)節(jié)一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）水平實現(xiàn)的，過往研究表明血清HCY能上調(diào)NOS的表達［19］，而NOS已被證明是低氧環(huán)境適應的關(guān)鍵因子［20］。由于標本較難采集，本研究選取的對象未包括18歲以下少年兒童；少數(shù)民族納入者年齡范圍也較窄，未包括60歲以上的樣本，我們建立的少數(shù)民族參考范圍能否用于該民族60歲以上人群還有待驗證。

綜上所述，由于試劑、方法、年齡、性別、遺傳背景等的差異，目前很難對各實驗室間檢測的HCY水平進行直接比較，各實驗室應針對不同人群建立自己的參考范圍。無條件建立自己參考范圍的實驗室，可根據(jù)文獻選擇與本實驗室檢測系統(tǒng)一致、檢測人群一致的參考范圍，但也應嚴格按照CLSIC28-A3進行驗證。本研究作為HCY多中心臨床試驗的一部分，建立了基于西南各族人群的血清HCY參考區(qū)間，對本地區(qū)臨床實驗室參考區(qū)間的調(diào)用及建立具有借鑒意義，也為臨床HCY檢測標準化進程奠定了基礎(chǔ)。

［1］Clarke R，Halsey J，Bennett D，et al.Homocysteine and vascular disease：review of published results of the homocysteine-lowering trials.J Inherit Metab Dis，2011，34（1）：83-91.

［2］McNulty H，Pentieva K，Hoey L，et al.Homocysteine，B-vitamins and CVD.Proc Nutr Soc，2008，67（2）：232-237.

［3］高云，陰赪茜，孫濤，等.心血管因素及血清高半胱氨酸水平升高與腦梗死患者死亡風險的相關(guān)分析.臨床檢驗雜志，2014，32（6）：426-428.

［4］de Bree A，Verschuren W M，Blom H J，etal.Association between B vitamin intake and plasma homocysteine concentration in the general Dutch population aged 20-65 y.Am J Clin Nutr，2001，73（6）：1027-1033.

［5］Refsum H，Nurk E，Smith A D，et al.The Hordaland Homocysteine Study：A community-based study of homocysteine，its determinants，andassociationswithdisease.JNutr，2006，136（6S）：1731S-1740S.

［6］Refsum H，SmithAD，UelandPM，et al.Factsand recommendations about total homocysteine determinations：An expert opinion.Clin Chem，2004，50（1）：3-32.

［7］Clinical and Laboratory Standard Institute.Defining，Establishing，and Verifying Reference Intervals inthe Clinical Laboratory. Proposed Guideline-Third Edition.CLSI，Wayno PA USA：2008.

［8］Homocysteine Studies Collaboration.Homocysteine and riskof ischemic heart disease and stroke：A meta-analysis.JAMA，2002，288（16）：2015-2022.

［9］Hao L，Ma J，Zhu J，et al.High prevalence of hyperhomocysteinemia in Chinese adults is associated with low folate，vitamin B-12，and vitamin B-6 status.JNutr，2007，137（2）：407-413.

［10］黃海威，郭明輝，黃家星，等.1020名社區(qū)人群同型半胱氨酸水平的調(diào)查和相關(guān)分析.中華流行病學雜志，2006，27（8）：721-724.

［11］Kim H J，Kim M K，Kim J U，et al.Major determinants of serum homocysteine concentrations in a Korean population.J Korean Med Sci，2010，25（4）：509-516.

［12］Makedos A，Goulis D G，PapanikolaouA，et al.Serumhighsensitivity C-reactive protein and homocysteine changes during hormonal therapy inwomenwithpolycystic ovarysyndrome：aprospective，matched study.Angiology，2010，61（6）：595-601.

［13］Moon H W，Whang D H，Ko Y J，et al.Reference interval and determinants of theserumhomocysteinelevel inaKorean population.JClin Lab Anal，2011，25（5）：317-323.

［14］郭天坤，郭純良，甘露，等.同型半胱氨酸檢測參考值范圍的探討.檢驗醫(yī)學與臨床，2013，10（7）：872-873.

［15］Wald D S，Bishop L，Wald N J，et al.Randomized trial of folic acid supplementation and serum homocysteine levels.Arch Intern Med，2001，161（5）：695-700.

［16］Clifford A J，Chen K，McWadeL，et al.Gender andsingle nucleotide polymorphisms in MTHFR，BHMT，SPTLC1，CRBP2，CETP，andSCARB1aresignificantpredictorsofplasma homocysteine normalized by RBC folate in healthy adults.JNutr，2012，142（9）：1764-1771.

［17］宋文芳，任燦晴，沈秋紅，等.育齡婦女葉酸代謝通路關(guān)鍵酶基因多態(tài)性對血漿同型半胱氨酸水平的影響.中華預防醫(yī)學雜志，2014，48（10）：900-903.

［18］Kotwal J，Kotwal A，Bhalla S，et al.Effectiveness of homocysteine lowering vitamins in prevention of thrombotic tendency at high altitude area：A randomized field trial.Thromb Res，2015，136（4）：758-762.

［19］頊志兵，汪衛(wèi)東，張莉芬，等.銀杏葉膠囊對高同型半胱氨酸血癥血管內(nèi)皮細胞凋亡干預的實驗研究.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，35（9）：1099-1104.

［20］Wang P，Ha A Y，Kidd K K，etal.A variantof the endothelial nitric oxide synthase gene（NOS3）associated with AMS susceptibility is less common in the Quechua，a high altitude native population.High Alt Med Biol，2010，11（1）：27-30.

（張增武編輯）

Serum Homocysteine Level Analysis and the Reference Range Establishment Among Ethnic Groups in Southwest China

LIU Yu-gang，WU Li-juan，SHIQuan-gui，HUANG Zhi-cheng，F(xiàn)U Xue-bing，ZHANG Shuai，Chilie Quzong，Ciji，DAN Gang，QIAO Xi
（Departmant of Clinical Laboratory，Chengdu M ilitary General Hospital，PLA Chengdu 610083，China）

Objective To analyze the levels of serum homocysteine（HCY）in ethnic groups in southwest of China，establish the reference range，and preliminarily explore the effect of altitude on serum HCY level. M ethods A total of 4021 cases of healthy Han（including 3581 at flatland and 440 cases athigh altitude），369 cases of healthy Yi，680 cases of healthy Tibetan were included in the study.Serum HCY was detected by enzymatic cycling assay.The stratified analysis was conducted based on gender，age，race and the altitude of live.Kruskal-Wallis H test was used to compare between groups，Nemenyi test was used in two group comparison，and Mann-Whitney U test was used to compare between different sex and different altitude. Ninety five percent reference range was calculated by X2.5%and X97.5%.Results The serum HCY level in the Tibetan population was higher than that of Yi and Han population in the same age group（P＜0.01），whileYiwas higher than that of Han population in the same age group（P＜0.01）.The levels of serum HCY in male was significantly higher than the female in both Yi and Han population（P＜0.05）.There were no differences among gender in the Tibetan population（P>0.05）.The levels of serum HCY in Han increased gradually w ith age（P=0.001，0.005）.The stratified analysis of age and gender can be divided into 21-60 years，61-70 years，>70 years，female 21-60 years，61-70 years，>70 years in Hanmale，Yimale，female，Tibetan.The reference range of their serum HCY were 6.87-22.18μmol/L，7.33-27.69μmol/L，9.81-31.03μmol/L，4.39-17.36μmol/L，5.68-20.90μmol/L，7.11-26.33μmol/L，8.65-27.11μmol/L，6.92-25.37μmol/L，10.26-36.66μmol/L，respectively.In terms of analysis of the altitude of living，the serum HCY level at high altitude of Han was significantly higher than those living at flatland（P＜0.001）. Conclusion Serum HCY level in healthy people is closely related to gender，age，race and the altitude of live. We have established the reference range of serum HCY in different ethnic groupsw ith different factors based on enzymatic cycling assay，which provides important value for the clinical laboratory in the local region.

Homocysteine； Reference range； Enzymatic cycling assay； Ethic difference； High altitude；Ethic

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.08.004

2016-02-12；

2016-03-19

國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃（863計劃）子課題，課題編號2014AA022304

吳麗娟，主任醫(yī)師。E-mail：wulijuan1628@126.com