HPLC法測(cè)定熊膽汁中?；切苋パ跄懰岷康难芯?/h1>
2016-09-10 20:05:03李家泉鄭昆芳
云南中醫(yī)中藥雜志 2016年10期
李家泉 鄭昆芳
摘要：目的建立熊膽汁中?；切苋パ跄懰岷康腍PLC測(cè)定方法。方法用甲醇前處理熊膽汁；以十八烷基鍵合硅膠為填料；甲醇-磷酸二氫鈉溶液（0.03 mol/L）（68：32）為流動(dòng)相，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.4；柱溫40℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。結(jié)果?；切苋パ跄懰徇M(jìn)樣濃度在0.1045 mg/mL～1.045 mg/mL之間呈良好的線性關(guān)系，r=0.9999，回收率在98%～102%之間，回收率RSD<1.5%。結(jié)論方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，可為熊膽汁的檢測(cè)及監(jiān)控提供技術(shù)依據(jù)和支持。
關(guān)鍵詞：熊膽汁；HPLC法；?；切苋パ跄懰?；含量測(cè)定
中圖分類號(hào)：284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）10-0078-03
Study on Taurocholate Ursodeoxycholic Acid Content in Bear Bile by HPLC
LI Jia-quan， ZHENG Kun-fang
（Dali Ruipin Junge Pharmaceutical Co.， Ltd.， Dali 671099， Yunnan）
【Abstract】Objective： To establish a HPLC method to determine taurocholate ursodeoxycholic acid content in bear bile. Methods： Bear bile was pre-treated with methanol. Octadecyl bonded silica was taken as a filler， methanol-sodium dihydrogen phosphate solution （0.03 mol/L） （68：32） as mobile phase， and phosphoric acid was used to adjust to pH 4.4. The column temperature was 40℃， with 1.0 mL/min of flow rate， 210 nm of detection wavelength. Results： The sample concentration of taurocholate ursodeoxycholic acid showed a good linear relationship between 0.1045 mg/mL and 1.045 mg/mL， r=0.9999， with the recovery rate between 98% to 102% and recovery rate RSD <1.5%. Conclusion： The method is accurate， simple and rapid， and can provide a technical base and support for the detection and monitoring of bear bile.
【Key words】bear bile， HPLC method， taurocholate ursodeoxycholic acid， determination
熊科動(dòng)物黑熊經(jīng)膽囊手術(shù)引流而得熊膽汁經(jīng)干燥制成的熊膽粉，已收載于1989年試行、1996年轉(zhuǎn)為國(guó)家正式實(shí)行的藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]，并收載于2015年版《中國(guó)藥典》附錄，作為天然熊膽的替代品入藥。?；切苋パ跄懰幔═CDCA）是熊膽粉主要有效和特有成分，故熊膽粉藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定TUDCA的含量不得低于23%。但熊膽粉藥品標(biāo)準(zhǔn)中未對(duì)其原料熊膽汁中TUDCA含量的測(cè)定方法作出規(guī)定。而熊膽汁和熊膽粉中TUDCA含量的測(cè)定方法有一定的差異。熊膽汁原料關(guān)乎到所制成熊膽粉的質(zhì)量，對(duì)熊膽汁質(zhì)量的分析和控制是十分重要的，而其TUDCA含量的測(cè)定方法沒(méi)有報(bào)道。本文建立熊膽汁中?；切苋パ跄懰岷康腍PLC測(cè)定方法。方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，為熊膽汁的檢測(cè)及監(jiān)控提供技術(shù)依據(jù)和支持。
1儀器與試藥
LC98Ⅰ型、LC99Ⅱ型高效液相色譜儀（北京溫分分析技術(shù)有限公司）、7725Ⅰ型手動(dòng)進(jìn)樣閥、雙通道色譜軟件工作站（浙大智達(dá)）、UV98I可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器、C18 5μShodex ID4.6×250mm色譜柱（原裝進(jìn)口）、BCD-176SQMK型美的電冰箱（合肥美的電冰箱有限公司）、SK3300H型超聲儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）、微孔濾膜（上海津騰）、色譜甲醇（fisher）、?；切苋パ跄懰徕c（中國(guó)食品藥品檢定研究院，110816-201208，含量91.7%，?；切苋パ跄懰釗Q算因子為0.9578）、分析純磷酸二氫鈉（國(guó)藥）、分析純甲醇（國(guó)藥）、熊膽汁（云南大理瑞品金閣藥業(yè)有限公司）。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件 以十八烷基鍵合硅膠為填料；甲醇-磷酸二氫鈉溶液（0.03 mol/L）（68：32）為流動(dòng)相，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.4，柱溫40℃，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量5 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。理論板數(shù)按?；切苋パ跄懰岱逵?jì)算不低于2500。在上述條件下，TUDCA與樣品中其它成分均能完全分離，分離度大于1.5。對(duì)照品與樣品圖譜見(jiàn)圖1A、B。
圖1對(duì)照品（A）和樣品（B）色譜圖
2.2樣品制備 取新鮮熊膽汁，過(guò)120目標(biāo)準(zhǔn)篩，精密量取續(xù)濾液0.5 mL置50 mL量瓶中。第一份加甲醇稀釋至刻度，搖勻；第二份加乙醇，稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜法過(guò)濾后，進(jìn)樣5μL測(cè)定，圖譜見(jiàn)圖2—A、B。
圖2乙醇為稀釋劑對(duì)照品（A）和甲醇為稀釋劑對(duì)照品（B）色譜圖
通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，利用乙醇作為稀釋劑存在拖尾，n<2000；而甲醇作為稀釋劑，峰型尖銳，無(wú)拖尾及前沿現(xiàn)象，n>4500，故選擇甲醇作為稀釋劑。
2.3對(duì)照品溶液制備取?；切苋パ跄懰徕c對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇使溶解并定量稀釋制成每1 mL含1 mg的溶液，即得。
2.4供試品制備取熊膽汁不少于25 mL，過(guò)120目標(biāo)準(zhǔn)篩，精密量取續(xù)濾液1 mL置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.5線性關(guān)系考察精密稱取?；切苋パ跄懰徕c對(duì)照品28.5 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻。再分別精密吸取上述對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0 mL置5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻得系列濃度對(duì)照品溶液。取系列濃度對(duì)照品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，按上述方法測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程為：
A=281822.207.C-1614.773r=0.9999
結(jié)果表明：TUDCA進(jìn)樣濃度在0.1045 mg/mL～1.045 mg/mL之間呈良好的線性關(guān)系。
2.6準(zhǔn)確度考察取新鮮熊膽汁，照供試品制備方法制備并測(cè)定樣品中?；切苋パ跄懰岬暮浚鳛橐阎獫舛鹊墓┰嚻?。精密量取已知濃度的供試品溶液0.5 mL置50 mL量瓶中，分別制作3組，每組3份，第1組每份精密加入對(duì)照品溶液（精密稱取牛磺熊去氧膽酸鈉對(duì)照品284.6 mg，置250 mL量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻。）10.00 mL；第2組每份精密加對(duì)照品溶液15.00 mL；第3組每份精密加入對(duì)照品溶液20.00 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，取5 μL注入液相色譜儀測(cè)定，測(cè)得供試品中TUDCA的含量為45.22 mg/mL?；厥章式Y(jié)果見(jiàn)下表。
2.7.1重復(fù)性取新鮮熊膽汁照供試品制備方法制備6份，進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果TUDCA的含量分別為45.88、46.01、45.82、45.20、45.94、45.92 mg/mL。平均值為45.8 mg/mL，測(cè)定值的RSD為0.59%。結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。
2.7.2中間精密度取同一均質(zhì)熊膽汁，由兩個(gè)分析員分別測(cè)定，每人測(cè)定6份，TUDCA的含量結(jié)果如下。
2.8專屬性考察按照供試品制備方法對(duì)空白溶液（甲醇）進(jìn)行處理作為空白組，照上述方法分別測(cè)定對(duì)照品組、熊膽汁供試品組與空白溶液組，檢測(cè)結(jié)果顯示，在該方法下，在供試品主峰保留時(shí)間±1.0 min內(nèi)無(wú)干擾峰。結(jié)果表明，該方法專屬性良好。圖譜見(jiàn)圖3—A、B、C。
2.9耐用性實(shí)驗(yàn)
2.9.1流動(dòng)相比例變化±5%照供試品制備方法制備供試品，流動(dòng)相比例按甲醇：磷酸二氫鈉溶液（0.03mol/L）比例變化為：63：37、68：32、73：27分別進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示在不同比例下，主峰保留時(shí)間分別為13.9～14.0、8.2～8.3、5.9～6.0 min之間。n均大于4000，R均大于1.5。同一供試品TUDCA的含量測(cè)定結(jié)果分別為43.4、43.0、43.6 mg/mL，三者RSD為0.69%。結(jié)果表明，該方法流動(dòng)相比例耐用性良好。
2.9.2流動(dòng)相pH值變化±0.2照供試品制備方法制備供試品，流動(dòng)相用磷酸調(diào)節(jié)PH值分別為4.2、4.4、4.6進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示在不同PH值下，主峰保留時(shí)間分別為9.2～9.3、9.5～9.7、9.3～9.5 min之間。n均大于4000，R均大于1.5。同一供試品TUDCA的含量測(cè)定結(jié)果分別為39.3、39.1、40.0 mg/mL，三者RSD為1.20%。結(jié)果表明，該方法流動(dòng)相PH值耐用性良好。
2.9.3柱溫變化±5℃照供試品制備方法制備供試品，在柱溫35℃、40℃、45℃下分別測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果顯示在不同柱溫下，主峰保留時(shí)間分別為10.2～10.3、9.7～9.9、8.4～8.6 min之間。n均大于4000，R均大于1.5。同一供試品TUDCA的含量測(cè)定結(jié)果分別為45.4、45.6、46.1 mg/mL，三者RSD為0.79%。結(jié)果表明，該方法柱溫耐用性良好。
2.9.4流速相對(duì)值變化±20%照供試品制備方法制備供試品，，在流速為0.8 mL/min、1.0 mL/min 與1.2 mL/min下分別測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果顯示在不同流速下，主峰保留時(shí)間分別為11.2～11.4、9.9～10.1、7.8～7.9 min之間。n均大于4000，R均大于1.5。同一供試品TUDCA的含量測(cè)定結(jié)果分別為44.4、45.0、43.8 mg/mL，三者RSD為1.35%。結(jié)果表明，該方法流速耐用性良好。
2.10樣品檢測(cè)根據(jù)上述方法，對(duì)連續(xù)10天內(nèi)產(chǎn)出的10批次熊膽汁TUDCA的含量進(jìn)行了檢測(cè)，其結(jié)果如下。
3討論
3.1樣品處理方式的選擇本項(xiàng)研究中，熊膽汁樣品分別用甲醇和乙醇進(jìn)行處理。經(jīng)對(duì)比實(shí)驗(yàn)，得到用甲醇處理優(yōu)于乙醇處理的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。熊膽汁樣品處理沒(méi)有明確的方法，有的文獻(xiàn)認(rèn)為需用某些蛋白沉淀劑處理。本項(xiàng)研究用甲醇處理并獲得較好的結(jié)果，操作方便快速，簡(jiǎn)化了樣品前處理過(guò)程，降低了檢測(cè)成本，又提高了檢測(cè)效率。
3.2流動(dòng)相組分比例的選擇流動(dòng)相采用甲醇-磷酸二氫鈉溶液（0.03 mol/L）的比例為68：32，試驗(yàn)結(jié)果TUDCA與樣品中其它成分均能完全分離，分離度大于1.5，主峰保留時(shí)間適中，表明流動(dòng)相的這一組分比例可用于熊膽汁樣品中TUDCA的含量測(cè)定。這一組分比例與熊膽粉檢測(cè)流動(dòng)相組分的比例是有一定差異的，比例差異的原因可能與熊膽汁未經(jīng)過(guò)熱處理而熊膽粉受過(guò)熱烘干有關(guān)。
參考文獻(xiàn)：
[1]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)，熊膽粉，第十一冊(cè)，1996，WS3-09（B-09）-96（Z）.
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李家泉 鄭昆芳
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關(guān)鍵詞：熊膽汁；HPLC法；?；切苋パ跄懰?；含量測(cè)定
中圖分類號(hào)：284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）10-0078-03
Study on Taurocholate Ursodeoxycholic Acid Content in Bear Bile by HPLC
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（Dali Ruipin Junge Pharmaceutical Co.， Ltd.， Dali 671099， Yunnan）
【Abstract】Objective： To establish a HPLC method to determine taurocholate ursodeoxycholic acid content in bear bile. Methods： Bear bile was pre-treated with methanol. Octadecyl bonded silica was taken as a filler， methanol-sodium dihydrogen phosphate solution （0.03 mol/L） （68：32） as mobile phase， and phosphoric acid was used to adjust to pH 4.4. The column temperature was 40℃， with 1.0 mL/min of flow rate， 210 nm of detection wavelength. Results： The sample concentration of taurocholate ursodeoxycholic acid showed a good linear relationship between 0.1045 mg/mL and 1.045 mg/mL， r=0.9999， with the recovery rate between 98% to 102% and recovery rate RSD <1.5%. Conclusion： The method is accurate， simple and rapid， and can provide a technical base and support for the detection and monitoring of bear bile.
【Key words】bear bile， HPLC method， taurocholate ursodeoxycholic acid， determination
熊科動(dòng)物黑熊經(jīng)膽囊手術(shù)引流而得熊膽汁經(jīng)干燥制成的熊膽粉，已收載于1989年試行、1996年轉(zhuǎn)為國(guó)家正式實(shí)行的藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]，并收載于2015年版《中國(guó)藥典》附錄，作為天然熊膽的替代品入藥。?；切苋パ跄懰幔═CDCA）是熊膽粉主要有效和特有成分，故熊膽粉藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定TUDCA的含量不得低于23%。但熊膽粉藥品標(biāo)準(zhǔn)中未對(duì)其原料熊膽汁中TUDCA含量的測(cè)定方法作出規(guī)定。而熊膽汁和熊膽粉中TUDCA含量的測(cè)定方法有一定的差異。熊膽汁原料關(guān)乎到所制成熊膽粉的質(zhì)量，對(duì)熊膽汁質(zhì)量的分析和控制是十分重要的，而其TUDCA含量的測(cè)定方法沒(méi)有報(bào)道。本文建立熊膽汁中?；切苋パ跄懰岷康腍PLC測(cè)定方法。方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，為熊膽汁的檢測(cè)及監(jiān)控提供技術(shù)依據(jù)和支持。
1儀器與試藥
LC98Ⅰ型、LC99Ⅱ型高效液相色譜儀（北京溫分分析技術(shù)有限公司）、7725Ⅰ型手動(dòng)進(jìn)樣閥、雙通道色譜軟件工作站（浙大智達(dá)）、UV98I可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器、C18 5μShodex ID4.6×250mm色譜柱（原裝進(jìn)口）、BCD-176SQMK型美的電冰箱（合肥美的電冰箱有限公司）、SK3300H型超聲儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）、微孔濾膜（上海津騰）、色譜甲醇（fisher）、?；切苋パ跄懰徕c（中國(guó)食品藥品檢定研究院，110816-201208，含量91.7%，?；切苋パ跄懰釗Q算因子為0.9578）、分析純磷酸二氫鈉（國(guó)藥）、分析純甲醇（國(guó)藥）、熊膽汁（云南大理瑞品金閣藥業(yè)有限公司）。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件 以十八烷基鍵合硅膠為填料；甲醇-磷酸二氫鈉溶液（0.03 mol/L）（68：32）為流動(dòng)相，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.4，柱溫40℃，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量5 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。理論板數(shù)按?；切苋パ跄懰岱逵?jì)算不低于2500。在上述條件下，TUDCA與樣品中其它成分均能完全分離，分離度大于1.5。對(duì)照品與樣品圖譜見(jiàn)圖1A、B。
圖1對(duì)照品（A）和樣品（B）色譜圖
2.2樣品制備 取新鮮熊膽汁，過(guò)120目標(biāo)準(zhǔn)篩，精密量取續(xù)濾液0.5 mL置50 mL量瓶中。第一份加甲醇稀釋至刻度，搖勻；第二份加乙醇，稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜法過(guò)濾后，進(jìn)樣5μL測(cè)定，圖譜見(jiàn)圖2—A、B。
圖2乙醇為稀釋劑對(duì)照品（A）和甲醇為稀釋劑對(duì)照品（B）色譜圖
通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，利用乙醇作為稀釋劑存在拖尾，n<2000；而甲醇作為稀釋劑，峰型尖銳，無(wú)拖尾及前沿現(xiàn)象，n>4500，故選擇甲醇作為稀釋劑。
2.3對(duì)照品溶液制備取?；切苋パ跄懰徕c對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇使溶解并定量稀釋制成每1 mL含1 mg的溶液，即得。
2.4供試品制備取熊膽汁不少于25 mL，過(guò)120目標(biāo)準(zhǔn)篩，精密量取續(xù)濾液1 mL置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.5線性關(guān)系考察精密稱取?；切苋パ跄懰徕c對(duì)照品28.5 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻。再分別精密吸取上述對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0 mL置5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻得系列濃度對(duì)照品溶液。取系列濃度對(duì)照品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，按上述方法測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程為：
A=281822.207.C-1614.773r=0.9999
結(jié)果表明：TUDCA進(jìn)樣濃度在0.1045 mg/mL～1.045 mg/mL之間呈良好的線性關(guān)系。
2.6準(zhǔn)確度考察取新鮮熊膽汁，照供試品制備方法制備并測(cè)定樣品中?；切苋パ跄懰岬暮浚鳛橐阎獫舛鹊墓┰嚻?。精密量取已知濃度的供試品溶液0.5 mL置50 mL量瓶中，分別制作3組，每組3份，第1組每份精密加入對(duì)照品溶液（精密稱取牛磺熊去氧膽酸鈉對(duì)照品284.6 mg，置250 mL量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻。）10.00 mL；第2組每份精密加對(duì)照品溶液15.00 mL；第3組每份精密加入對(duì)照品溶液20.00 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，取5 μL注入液相色譜儀測(cè)定，測(cè)得供試品中TUDCA的含量為45.22 mg/mL?；厥章式Y(jié)果見(jiàn)下表。
2.7.1重復(fù)性取新鮮熊膽汁照供試品制備方法制備6份，進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果TUDCA的含量分別為45.88、46.01、45.82、45.20、45.94、45.92 mg/mL。平均值為45.8 mg/mL，測(cè)定值的RSD為0.59%。結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。
2.7.2中間精密度取同一均質(zhì)熊膽汁，由兩個(gè)分析員分別測(cè)定，每人測(cè)定6份，TUDCA的含量結(jié)果如下。
2.8專屬性考察按照供試品制備方法對(duì)空白溶液（甲醇）進(jìn)行處理作為空白組，照上述方法分別測(cè)定對(duì)照品組、熊膽汁供試品組與空白溶液組，檢測(cè)結(jié)果顯示，在該方法下，在供試品主峰保留時(shí)間±1.0 min內(nèi)無(wú)干擾峰。結(jié)果表明，該方法專屬性良好。圖譜見(jiàn)圖3—A、B、C。
2.9耐用性實(shí)驗(yàn)
2.9.1流動(dòng)相比例變化±5%照供試品制備方法制備供試品，流動(dòng)相比例按甲醇：磷酸二氫鈉溶液（0.03mol/L）比例變化為：63：37、68：32、73：27分別進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示在不同比例下，主峰保留時(shí)間分別為13.9～14.0、8.2～8.3、5.9～6.0 min之間。n均大于4000，R均大于1.5。同一供試品TUDCA的含量測(cè)定結(jié)果分別為43.4、43.0、43.6 mg/mL，三者RSD為0.69%。結(jié)果表明，該方法流動(dòng)相比例耐用性良好。
2.9.2流動(dòng)相pH值變化±0.2照供試品制備方法制備供試品，流動(dòng)相用磷酸調(diào)節(jié)PH值分別為4.2、4.4、4.6進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示在不同PH值下，主峰保留時(shí)間分別為9.2～9.3、9.5～9.7、9.3～9.5 min之間。n均大于4000，R均大于1.5。同一供試品TUDCA的含量測(cè)定結(jié)果分別為39.3、39.1、40.0 mg/mL，三者RSD為1.20%。結(jié)果表明，該方法流動(dòng)相PH值耐用性良好。
2.9.3柱溫變化±5℃照供試品制備方法制備供試品，在柱溫35℃、40℃、45℃下分別測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果顯示在不同柱溫下，主峰保留時(shí)間分別為10.2～10.3、9.7～9.9、8.4～8.6 min之間。n均大于4000，R均大于1.5。同一供試品TUDCA的含量測(cè)定結(jié)果分別為45.4、45.6、46.1 mg/mL，三者RSD為0.79%。結(jié)果表明，該方法柱溫耐用性良好。
2.9.4流速相對(duì)值變化±20%照供試品制備方法制備供試品，，在流速為0.8 mL/min、1.0 mL/min 與1.2 mL/min下分別測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果顯示在不同流速下，主峰保留時(shí)間分別為11.2～11.4、9.9～10.1、7.8～7.9 min之間。n均大于4000，R均大于1.5。同一供試品TUDCA的含量測(cè)定結(jié)果分別為44.4、45.0、43.8 mg/mL，三者RSD為1.35%。結(jié)果表明，該方法流速耐用性良好。
2.10樣品檢測(cè)根據(jù)上述方法，對(duì)連續(xù)10天內(nèi)產(chǎn)出的10批次熊膽汁TUDCA的含量進(jìn)行了檢測(cè)，其結(jié)果如下。
3討論
3.1樣品處理方式的選擇本項(xiàng)研究中，熊膽汁樣品分別用甲醇和乙醇進(jìn)行處理。經(jīng)對(duì)比實(shí)驗(yàn)，得到用甲醇處理優(yōu)于乙醇處理的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。熊膽汁樣品處理沒(méi)有明確的方法，有的文獻(xiàn)認(rèn)為需用某些蛋白沉淀劑處理。本項(xiàng)研究用甲醇處理并獲得較好的結(jié)果，操作方便快速，簡(jiǎn)化了樣品前處理過(guò)程，降低了檢測(cè)成本，又提高了檢測(cè)效率。
3.2流動(dòng)相組分比例的選擇流動(dòng)相采用甲醇-磷酸二氫鈉溶液（0.03 mol/L）的比例為68：32，試驗(yàn)結(jié)果TUDCA與樣品中其它成分均能完全分離，分離度大于1.5，主峰保留時(shí)間適中，表明流動(dòng)相的這一組分比例可用于熊膽汁樣品中TUDCA的含量測(cè)定。這一組分比例與熊膽粉檢測(cè)流動(dòng)相組分的比例是有一定差異的，比例差異的原因可能與熊膽汁未經(jīng)過(guò)熱處理而熊膽粉受過(guò)熱烘干有關(guān)。
參考文獻(xiàn)：
[1]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)，熊膽粉，第十一冊(cè)，1996，WS3-09（B-09）-96（Z）.
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