馬　易，李雨欣，孫　哲

(中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院，遼寧 沈陽 110001)

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化療聯(lián)合DC-CIK治療晚期胃癌療效及對免疫功能的影響

馬易，李雨欣，孫哲

(中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院，遼寧 沈陽 110001)

[摘要]目的觀察化療聯(lián)合DC-CIK治療晚期胃癌的療效及對免疫功能的影響。方法將180例診斷為晚期胃癌的患者隨機分為觀察組90例與對照組90例。2組均給予奧沙利鉑+5-氟尿嘧啶化療，觀察組在化療基礎上給予DC-CIK免疫細胞治療，統(tǒng)計2組治療后的臨床療效、不良反應發(fā)生情況，檢測治療前后免疫功能及血清細胞因子IL-12、IFN-γ水平。結果治療后觀察組疾病控制率明顯高于對照組(P<0.05)，骨髓抑制發(fā)生率明顯低于對照組(P<0.05)，2組發(fā)熱、高熱伴寒戰(zhàn)、皮疹發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學意義。治療后觀察組外周血CD3+、CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA及IL-12、IFN-γ水平均明顯高于治療前及對照組(P均<0.05)，CD4+、CD4+/CD8+均明顯低于治療前及對照組(P均<0.05)；而對照組外周血CD3+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA及IL-12、IFN-γ水平均明顯低于治療前(P均<0.05)，CD4+、CD4+/CD8+均明顯高于治療前(P均<0.05)。結論化療聯(lián)合DC-CIK能改善晚期胃癌患者的免疫功能，提高疾病控制率，且不良反應較少。

[關鍵詞]晚期胃癌；化療；DC-CIK；細胞因子；免疫功能

我國胃癌發(fā)病率很高，85%的患者診斷明確時已經(jīng)處于晚期，傳統(tǒng)方案如手術、化療、放療等雖有一定臨床療效，但術后發(fā)生轉移率高達60%，5年生存率僅為25%[1]。目前胃癌大多傾向于聯(lián)合治療。近年來出現(xiàn)了安全、可靠、有效、不良反應少的免疫細胞晚期胃癌治療法，且推廣較快，其中體外培養(yǎng)的樹突狀細胞(dendritic cell，DC)聯(lián)合細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-induced killers，CIK)免疫療法最為常見，且取得了較好的臨床療效[2]。但是關于DC-CIK聯(lián)合傳統(tǒng)化療對于晚期胃癌患者免疫功能及外周血細胞因子的影響研究較少，為此筆者進行了相關研究，現(xiàn)將結果報道如下。

1臨床資料

1.1一般資料收集本院普通外科2012年3月—2014年12月(隨訪時間為1年)根據(jù)醫(yī)學影像學(CT或MRI)檢查與患者臨床表現(xiàn)診斷為晚期胃癌的患者180例，年齡33～76歲，患者預計生存期均超過6 個月，Karnofsky評分在70分以上。排除有嚴重肝腎等重要器官功能障礙者；血清學生化指標、凝血、血常規(guī)嚴重異常者；胸腔、腹腔大量積液者；神經(jīng)、大血管浸潤者。研究得到醫(yī)院倫理委員會批準，均取得患者本人或其法定代理人知情同意，并簽署知情同意書。將患者隨機分為觀察組與對照組，每組90例，2組性別、年齡、病理分型、轉移部位、胃癌部位比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)，有可比性。見表1。

表1　2組一般資料比較　例(%)

1.2治療方法對照組給予奧沙利鉑120 mg/(m2·d) 第1天靜滴，5-氟尿嘧啶(5-Fu)500 mg/(m2·d)第1—5天靜滴，治療過程中根據(jù)患者的耐受情況調(diào)整治療劑量，21 d為1個周期，連續(xù)治療2個周期。觀察組在化療前2 d采血進行DC-CIK細胞培養(yǎng),第3天開始給予與對照組相同的化療，細胞培養(yǎng)成熟后靜脈回輸給患者，每次回輸細胞數(shù)量為(4～5)×109個，第1，2次回輸時間分別為化療結束后1 周的上午、下午，第3，4次回輸時間分別為化療結束后2 周的上午、下午，21 d為1個周期，連續(xù)治療2個周期。治療期間給予充足的營養(yǎng)支持。

1.3觀察指標

1.3.1治療后的臨床療效及不良反應發(fā)生情況參考文獻[3]，并根據(jù)影像學檢查及患者臨床表現(xiàn)判定腫瘤的體積及其是否出現(xiàn)浸潤來判定近期臨床療效，可以分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、病變穩(wěn)定(SD)、病變進展(PD)，CR+PR為客觀有效率(ORR)，CR+PR+SD為疾病控制率(DCR)。監(jiān)測治療過程中不良反應發(fā)生情況。

1.3.2治療前后免疫功能指標水平①CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+檢測：治療前后分別抽取患者靜脈血，用淋巴細胞分離液密度梯度離心法分離外周血中有核細胞，有核細胞染色標記30 min，溶血10 min，以3 000 r/min離心10 min，棄去上清液，PBS液沖洗2次，隨后上機檢測，并采用Cellquest軟件進行樣本檢測。②IgG、IgM、IgA檢測：治療前后分別抽取患者靜脈血5 mL，注入玻璃試管中，靜置10 min，以3 000 r/min離心10 min，分離血清在-70 ℃超低溫冰箱內(nèi)保存待測，用免疫散射比濁法按照試劑盒說明進行檢測。

1.3.3細胞因子IL-12、IFN-γ水平治療前后分別抽取患者靜脈血3 mL，注入玻璃試管內(nèi)，常溫下靜置10 min，以3 000 r/min離心10 min，分離血清立即放于-70 ℃的超低溫冰箱內(nèi)保存，采用微粒子酶免疫分析法依照試劑盒說明檢測。

2結果

2.12組治療后近期臨床療效比較觀察組DCR明顯高于對照組(P<0.05)，2組CR、PR、SD、PD及ORR比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。見表2。

表2　2組近期臨床療效比較　例(%)

2.22組不良反應發(fā)生情況2組治療中均未發(fā)現(xiàn)嚴重不良反應；對照組發(fā)生發(fā)熱50例(63.41%)，高熱伴寒戰(zhàn)17例(18.89%)，皮疹6例(6.67%)，骨髓抑制14例(15.56%)；觀察組發(fā)生發(fā)熱52例(57.78%)，高熱伴寒戰(zhàn)16例(17.78%)，皮疹8例(8.89%)，骨髓抑制6例(6.67%)。2組發(fā)熱、高熱伴寒戰(zhàn)、皮疹發(fā)生率比較差異均無統(tǒng)計學意義(2=0.056，P>0.05)，觀察組骨髓抑制發(fā)生率明顯低于對照組(2=5.178，P<0.05)。

2.32組治療前后細胞免疫及體液免疫相關指標水平比較治療后觀察組外周血CD3+、CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA均明顯高于治療前及對照組(P均<0.05)，CD4+、CD4+/CD8+均明顯低于治療前及對照組(P均<0.05)；而對照組外周血CD3+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA水平均明顯低于治療前(P均<0.05)，CD4+、CD4+/CD8+均明顯高于治療前(P均<0.05)。見表3及表4。

2.42組治療前后血清細胞因子水平比較治療后觀察組外周血IL-12、IFN-γ水平均明顯高于治療前(P均<0.05)及對照組，對照組外周血IL-12、IFN-γ水平均明顯低于治療前(P均<0.05)。見表5。

表3　2組治療前后細胞免疫功能比較±s)

注：①與治療前比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

表4　2組治療前后體液免疫功能比較±s，g/L)

注：①與治療前比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

表5　2組治療前后外周血IL-12、IFN-γ水平比較

注：①與治療前比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

3討論

化療是治療晚期胃癌最常用的方法，但存在著毒副反應大、患者不易耐受、停止治療率較高等弊端，影響臨床療效；且化療在抑制腫瘤細胞增殖的情況下會抑制機體的免疫功能，降低機體自身對腫瘤細胞的殺傷力，同時普通化療只能殺滅一定數(shù)量的腫瘤細胞，但是機體針對于微小病灶的殺滅功能卻依賴于激動自身免疫系統(tǒng)來完成。T淋巴細胞參與機體的細胞免疫應答反應，T細胞亞群主要包括CD3+、CD4+、CD8+等。IgG、IgM、IgA是機體內(nèi)重要的免疫球蛋白，參與體液免疫應答[4]。研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤患者免疫功能嚴重受到抑制，白細胞、免疫球蛋白及T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+數(shù)量均明顯減少，炎性細胞因子IL-12、IFN-γ水平降低[5]。故尋求既能殺滅腫瘤細胞，又能改善機體免疫功能的治法方法成為研究的熱點。

近年細胞免疫療法受到重視，該方法是通過從體外補充具有誘導功能的生物活性因子來激活體內(nèi)本來固有的免疫應答或直接補充具有改善機體免疫功能的細胞來使機體具有免疫殺傷力[6]。其中DC-CIK免疫治療既能直接殺傷腫瘤細胞又能調(diào)節(jié)機體免疫功能，因此受到廣大醫(yī)務工作者的重視[7-8]。DC細胞主要通過以下途徑起作用[9-10]：①誘導機體產(chǎn)生大量的T淋巴細胞；②使效應T細胞趨向于腫瘤細胞；③誘導機體產(chǎn)生IL-12、IFN-γ等細胞因子；④抑制腫瘤細胞血管的生成；⑤激活自然殺傷細胞(NK)和自然殺傷T細胞(NKT)。CIK細胞抗腫瘤主要通過以下3條途徑來完成：①在DC細胞誘導與趨化下，CIK細胞抗腫瘤的靶向性及其抗腫瘤活力均明顯增強；②增加了自身IL-12、IFN-γ等細胞因子的分泌量；③DC細胞增強了CIK細胞的免疫原性；④激活機體B淋巴細胞產(chǎn)生非特異性體液免疫。

本研究結果顯示，治療后觀察組疾病控制率明顯高于對照組，骨髓抑制發(fā)生率明顯低于對照組，2組發(fā)熱、高熱伴寒戰(zhàn)、皮疹發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學意義。治療后觀察組外周血CD3+、CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA及IL-12、IFN-γ水平均明顯高于治療前及對照組，CD4+、CD4+/CD8+均明顯低于治療前及對照組；而對照組外周血CD3+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA及IL-12、IFN-γ水平均明顯低于治療前，CD4+、CD4+/CD8+均明顯高于治療前。提示DC、CIK細胞具有一定的免疫功能調(diào)節(jié)作用，與蔡俊霞等[1]報道一致。

綜上所述，DC-CIK聯(lián)合傳統(tǒng)化療治療晚期胃癌是一種安全可靠的治療方案，能改善晚期胃癌患者的免疫功能，提高疾病控制率，且不良反應少，為廣大中晚期胃癌患者提供了福音。但本研究未對患者的遠期臨床療效進行統(tǒng)計分析，需進一步隨訪研究。且治療過程中需注意以下幾點：①需要嚴格把握治療適用人群。本研究入選者均為增強CT/MRI平掃結果顯示腫瘤無侵蝕縱隔重要血管及其神經(jīng)，因侵蝕較嚴重時，化療造成腫瘤組織壞死易出現(xiàn)大出血。②治療過程中應讓患者保持充足的營養(yǎng)供給，提高機體免疫力[11]。③治療前后可以皮下注射IL-2，因化療聯(lián)合IL-2在小鼠模型實驗中能很好地抑制腫瘤細胞生長[12]。

[參考文獻]

[1]蔡俊霞,吳錦昌,王彬,等. DC-CIK聯(lián)合化療治療晚期胃癌的近期臨床療效觀察[J]. 南京醫(yī)科大學學報:自然科學版,2014,34(1):36-40

[2]仁愛軍. 術后化療聯(lián)合DC-CIK生物治療胃癌的療效觀察[J]. 河北醫(yī)學,2014,20(6):972-975

[3]馬全斌,李貴新,王文浩,等.自體DC-CIK細胞共培養(yǎng)治療晚期胃癌臨床療效評價[J]. 青島醫(yī)藥衛(wèi)生,2015,47(2):98-100

[4]李曉輝,李軍民,馮秋霞,等.圍手術期腸內(nèi)營養(yǎng)支持對食管癌患者術后免疫功能的影響[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新,2011,8(8):57-59

[5]Jemal A,Bray F,Center MM,et al. Global cancer statistics[J]. CA Cancer J Clin,2011,62(2):69-90

[6]何立香,蔣思卿,彭大為. DC-CIK治療惡性腫瘤研究進展[J]. 醫(yī)學綜述,2013,19(1):59-62

[7]文洽先,朱婭,許彬,等. DC-CIK聯(lián)合化療在晚期胰腺癌治療中的應用[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志,2013,22(36):4065-4066

[8]汪治宇,劉榮鳳,王聰敏. CIK細胞治療中晚期食管癌的療效觀察及護理[J]. 藥物與臨床,2012,9(18):38-40

[9]Linn YC,Lau SK,Liu BH,et al. Characterization of recognition and functional heterogeneity exhibited by cytokin-induced killer cell subsets against acute myeloid leukaemia target cell[J]. Immunology,2009,126(3):423-435

[10] Sabado RL,Bhardwaj N. Directing dendritic cell immunotherapy towards successful cancer treatment[J]. Immunotherapy,2010,2(1):37-56

[11] 謝天鵬,趙雍凡,劉華英,等. 早期腸內(nèi)營養(yǎng)對食管癌術后全身炎性反應及細胞免疫功能的影響[J]. 2005,26(1):18-20

[12] Fagnoni FF,Zerbini A,Pelosi G,et al. Combination of radiofrequency ablation and immunotherapy[J]. Front Biosci,2008,13(2):369-381

[作者簡介]馬易，女，主要從事胃癌的相關治療。 [通信作者]孫哲，E-mail:750036087@qq.com

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.21.007

[中圖分類號]R735.2

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)21-2303-03

[收稿日期]2016-01-15

Study on clinical efficacy of chemotherapy combined with DC-CIK on the patients with advanced gastric cancer and its influence on immune function

MA Yi, LI Yuxin, SUN Zhe

(The First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning, China)

Abstract:Objective It is to observe the clinical efficacy of chemotherapy combined with DC-CIK on the patients with advanced gastric cancer and its influence on the immune function. Methods 180 patients with advanced gastric cancer were randomly divided into observation group (90 cases) and control group (90 cases). Two groups of patients were treated with chemotherapy (oxaliplatin + 5-fluorouracil), and plus DC-CIK treatment of self-immune cells on the basic of chemotherapy in observation group. The clinical efficacy, adverse reactions, immune function were observed before and after treatment in two groups. Results After treatment, the disease control rate of the observation group was significantly higher than that of the control group (P<0.05), and the incidence of bone marrow suppression was significantly lower than that of the control group (P<0.05), there was no significant difference in the incidence of fever, chills combined fever, rash in the two groups (P>0.05). After treatment, the levels of IL-12, IFN-γ in the peripheral blood were higher in the observation group (P<0.05) but lower in the control group than before treatment (P<0.05); the levels of CD3+, CD8+, CD56+/CD3+, CD16+/CD3+, IgG, IgM, IgA in peripheral blood were increased (P<0.05) but CD4+ and CD4+/CD8+ lower than before treatment in the observation group (P<0.05), however, the levels of CD3+, CD8+, CD56+/CD3+, CD16+/CD3+, IgG, IgM, IgA, IL-12, IFN-γ in peripheral blood were lower but CD4+ and CD4+/CD8+ were higher than before treatment in the control group (all P<0.05). Conclusion Chemotherapy combined with DC-CIK can improve the immune function, and increase the disease control rate, and with little adverse reactions.

Key words:advanced gastric cancer; chemotherapy; DC-CIK; cytokine; immune function