張文靜

(武漢市蔡甸區(qū)中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，湖北武漢 430100)

·論著·

基于血清學(xué)的梅毒假陽性的相關(guān)因素檢驗研究

張文靜

(武漢市蔡甸區(qū)中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，湖北武漢 430100)

摘要:目的了解產(chǎn)生梅毒血清學(xué)假陽性的生物學(xué)因素，從而提高對梅毒血清學(xué)生物假陽性的認(rèn)識。方法選擇該院各科室2013年5月至2014年10月收治的住院患者13 000例作為研究對象，研究對象均常規(guī)抽取新鮮空腹血樣2 mL，離心獲得血清標(biāo)本后，行梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)，并在行快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR)，RPR定性試驗陽性者加檢RPR血清滴度，檢測結(jié)果應(yīng)用SPSS22.0軟件進(jìn)行Logistic單因素、多因素回歸分析。結(jié)果13 000例血清標(biāo)本中，RPR(+)、TPPA(+)者99例，RPR(-)、TPPA(+)者100例，RPR(+)、TPPA(-)者252例，假陽性率為1.94%(252/13 000)。單因素統(tǒng)計分析顯示：風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病、年齡60歲以上老年患者、惡性腫瘤可能是梅毒血清學(xué)假陽性反應(yīng)的影響因素，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病、感染性疾病和惡性腫瘤疾病可能是梅毒血清學(xué)假陽性反應(yīng)的獨立危險因素(P<0.05)。結(jié)論RPR試驗檢測血清標(biāo)本會出現(xiàn)生物假陽性的結(jié)果，必須用TPPA試驗進(jìn)行確認(rèn)。

關(guān)鍵詞:梅毒；RPR；TPPA；生物學(xué)假陽性；相關(guān)因素

梅毒屬于性傳播類疾病，由蒼白螺旋體感染引起發(fā)病，患者需經(jīng)歷一個慢性的病程，并最終走向死亡[1-2]。近年來，梅毒的發(fā)病率呈上升趨勢，我國已經(jīng)將其列為乙類傳染病防治管理病種，是我國重點防治的傳染病之一，各省市均嚴(yán)密監(jiān)測該病發(fā)病率，因而準(zhǔn)確診斷梅毒對于防治該病具有重要意義[3-6]。在血站檢查血液及醫(yī)療單位大面積篩查工作中，多采用血清學(xué)試驗檢測梅毒病原體，但是檢測中如果出現(xiàn)梅毒血清學(xué)假陽性現(xiàn)象，對于檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性影響較大，故找到干擾因素，采取干預(yù)措施，提高檢測準(zhǔn)確性成為迫切的需求。為此，本研究選取本院各科室于2013年5月至2014年10月收治的13 000例住院患者作為研究對象，通過Logistic單因素和多因素分析，探討導(dǎo)致梅毒血清學(xué)假陽性的生物學(xué)因素，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取本院各科室于2013年5月至2014年10月收治的13 000例住院患者作為研究對象。研究對象均常規(guī)抽取空腹血樣2 mL，使用高速離心機(jī)(3 500 r/min)分離血清，-2 ℃低溫下冷凍貯藏。采用的試劑及儀器：梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)試劑盒(富士瑞必歐生產(chǎn)，日本進(jìn)口)；快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR)試劑盒(科華生物技術(shù)生產(chǎn)，國產(chǎn)上海)； LG10-3A離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；RPR-100B水平旋轉(zhuǎn)儀(南京大學(xué)普陽科學(xué)儀器研究所)；TE-B型定時微量振蕩器(江蘇姜堰市康健醫(yī)療器具廠)；BCD-539WF冷藏冷凍冰箱(青島海爾股份有限公司)；EP管(0.5、1.5 mL) 試管，試管架；數(shù)顯三用恒溫水浴箱(上海比朗儀器有限公司)。

1.2方法詳細(xì)記錄住院患者臨床資料，提取各類影響因素，如性別、年齡、住院科室、基礎(chǔ)疾病、輸血史登記等。將本研究詳細(xì)內(nèi)容及計劃告知患者，排除非自愿參與本研究者，然后簽署知情同意書。本研究經(jīng)過院倫理委員會審核、批準(zhǔn)。研究對象均按要求在抽取血樣前1 d，晚餐后不再進(jìn)食，確保禁食時間超過8 h，次日清晨抽取空腹血液(2 mL)，按常規(guī)離心獲得血清。所有采集的研究對象血清行RPR和TPPA檢測：若研究對象血清經(jīng)RPR定性檢測為陽性，則要增加RPR血清滴度檢測，按照1∶2、1∶4……1∶128、1∶256依次稀釋不同倍數(shù)。統(tǒng)計試驗結(jié)果，并作統(tǒng)計學(xué)分析。本研究所有操作均按照試劑和標(biāo)準(zhǔn)品的要求操作，且試劑均在保質(zhì)期內(nèi)且按要求保存。

1.3診斷標(biāo)準(zhǔn)采用衛(wèi)生部頒布的《梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)》(中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS273-2007)作為梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行Logistic單因素和多因素統(tǒng)計分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1梅毒血清學(xué)檢測結(jié)果13 000例患者中，RPR(+)、TPPA(+)者99例(0.76%，99/13 000)，其中男57例(66/99,66.67%)，女29例(33/99,33.33%)；≥60歲38例(38/99，29.23%)，<60歲61例(61/99,61.62%)，有輸血史18例(18/99,18.18%)，無輸血史72例(72/99,81.82%)；RPR(-)、TPPA(+)者100例(0.77%，100/13 000)，其中男76例(76/100,76.00%)，女24例(24/100,24.00%)；≥60歲33例(33/100,33.00%)，<60歲67例(67/100,67.00%)，有輸血史26例(26/100,26.00%)，無輸血史74例(74/100,74.00%)；上述患者為確診梅毒感染或既往感染，梅毒感染率為1.53%(199/13 000)。

2.2梅毒血清學(xué)假陽性相關(guān)因素分析檢測結(jié)果為RPR(+)、TPPA(-)者共252例，假陽性率為1.94%(252/13 000)。在檢測出的252例梅毒假陽性患者中男82例，女170例，男女比例約為1∶2；年齡60歲以上梅毒假陽性者65例，60歲以下者187例。住院患者中有過輸血史者418例，其中產(chǎn)生假陽性結(jié)果者42例。252例梅毒假陽性患者的基礎(chǔ)疾病幾乎遍布所有的臨床科室，其中以腫瘤疾病、感染性疾病、心血管疾病以及骨科疾病為最多。見表1。

表1　　血清標(biāo)本假陽性結(jié)果與RPR滴度分布情況

可能導(dǎo)致梅毒血清學(xué)假陽性單因素分別為：性別、年齡、基礎(chǔ)疾病和輸血史。經(jīng)非條件單因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病、年齡60歲以上、惡性腫瘤均是導(dǎo)致梅毒血清學(xué)生物假陽性的獨立影響因素，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2　　梅毒血清學(xué)假陽性非條件單因素Logistic分析

表3　　梅毒血清學(xué)假陽性的非條件多因素Logistic分析

性別、年齡、基礎(chǔ)疾病和輸血史均為可能導(dǎo)致梅毒血清學(xué)假陽性的重要因素，對4種影響因素進(jìn)行梅毒血清學(xué)假陽性非條件多因素Logistic回歸分析。惡性腫瘤、風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病、感染性疾病3個因素是梅毒血清產(chǎn)生學(xué)假陽性危險因素(P<0.05)。見表3。

3討論

近年來，文獻(xiàn)報道顯示梅毒螺旋體感染人類后，需要檢測兩類抗體，其主要原因為蒼白螺旋體表面抗原可刺激宿主機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體和非特異性抗體；特異性抗體為抗密螺旋體的抗體；非特異性抗體則是抗原與人體組織中的類脂抗原發(fā)生非特異性反應(yīng)所得，這類抗體稱為反應(yīng)素，為非特異性抗體[7]。當(dāng)前，人類對于梅毒的檢測，主要依據(jù)其生物學(xué)、免疫學(xué)特性，常用的方法有：血清學(xué)試驗、直接熒光抗體試驗(DFAT)、暗視野顯微鏡(DFM)檢測等，后兩者均為直接檢測梅毒螺旋體，屬于常見實驗室檢測方法。目前，血清學(xué)試驗是醫(yī)學(xué)界檢測梅毒病原體較為推崇的方法，其根據(jù)蒼白螺旋體的免疫學(xué)特性，分別檢測非特異性抗體和特異性抗體，以保證檢測病原體的準(zhǔn)確性，也是目前較為準(zhǔn)確的檢測方法[8]。血清學(xué)檢測常用方法有RPR、梅毒螺旋體血凝試驗(TPHA)、TPPA等，另外還有性病研究室試驗(VDRL)也較為常見。較多文獻(xiàn)報道，RPR的梅毒非特異性抗體檢測效果較為理想，且操作較為簡便，可在較短時間獲得結(jié)果，尤其在處理大量樣本時，該方法檢測效率較高[8]，故本研究中采用了該檢測模式。雖然RPR優(yōu)勢性較強，且廣泛應(yīng)用于梅毒篩查工作中，但一旦血清抗體濃度過高，就容易出現(xiàn)前滯現(xiàn)象，呈現(xiàn)假陰性反應(yīng)[9]，進(jìn)而導(dǎo)致檢測準(zhǔn)確性降低。RPR相關(guān)文獻(xiàn)研究報道，本試驗使用心磷脂、卵磷脂及膽固醇等牛心分離物質(zhì)，是導(dǎo)致漏檢的主要原因，這些組分不具有特異性，因而可能與梅毒螺旋體表面脫落的抗原混淆，此外，其他病原體感染人體后，破碎細(xì)胞釋放的抗體也會發(fā)生類似反應(yīng)，故存在生物假陽性(BFP)的發(fā)生概率[10]。本研究結(jié)果顯示，RPR檢測的假陽性率為1.94%，而國外文獻(xiàn)報道指出利用RPR初篩，假陽性率超過8.2%[11]，本檢測結(jié)果低于文獻(xiàn)報道水平，造成差異的原因較多，如設(shè)備因素、試劑因素、操作者技術(shù)水平、研究對象、檢測樣本數(shù)量、患者基礎(chǔ)疾病等，但是仍可以認(rèn)為RPR初篩存在一定的假陽性率。

本研究中，研究對象的血清標(biāo)本樣本為13 000份，行RPR和TPPA試驗結(jié)果顯示，存在252份假陽性標(biāo)本，對這些標(biāo)本進(jìn)行多因素Logistic回歸分析獲知，惡性腫瘤、風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病、感染性疾病可能是導(dǎo)致梅毒血清產(chǎn)生學(xué)生物假陽的危險因素，其中風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病出現(xiàn)假陽性標(biāo)本13例，在假陽性標(biāo)本中構(gòu)成比為5.1%，在13 000份標(biāo)本中，假陽性率為0.1%。風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病患者自身免疫系統(tǒng)機(jī)能失常，產(chǎn)生了大量抗核抗體(ANA)，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗磷脂綜合征等疾病患者中較為常見，而ANA與梅毒螺旋體產(chǎn)生抗體免疫反應(yīng)相似，均屬于抗類脂質(zhì)抗體，故RPR試驗中風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病患者血清出現(xiàn)了梅毒螺旋體抗體類似反應(yīng)，導(dǎo)致生物假陽性的產(chǎn)生[12]。目前，已知的自身免疫系統(tǒng)疾病多會引發(fā)血清學(xué)檢測假陽性，但是并非所有患者每次檢測都會出現(xiàn)假陽性，任榮鑫等[13]認(rèn)為，風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病患者體內(nèi)的依賴性β2-GP Ⅰ抗核抗體，只有滿足某些條件才會與非梅毒螺旋體抗原血清實驗中的心磷脂抗原發(fā)生凝集反應(yīng)，即便發(fā)生反應(yīng)，也并非一定會檢出陽性，但是風(fēng)濕免疫疾病對梅毒血清學(xué)檢測的影響是存在的。本研究中，惡性腫瘤患者血清標(biāo)本發(fā)生假陽性高達(dá)55例，假陽性率達(dá)到了0.4%(55/13 000)，國內(nèi)較多相關(guān)文獻(xiàn)報道也顯示，惡性腫瘤患者出現(xiàn)梅毒血清學(xué)假陽性的概率較高，與本研究結(jié)果基本一致[14]。惡性腫瘤患者多為老年人，受疾病影響，自身免疫力較差，造成易感性提升，體內(nèi)某些抗體與梅毒螺旋體抗體存在類似表位，故導(dǎo)致假陽性產(chǎn)生[15]。本研究中也發(fā)現(xiàn)，年齡60歲以上患者易出現(xiàn)梅毒血清學(xué)假陽性。此外，腫瘤抗原與蒼白螺旋體表面抗原存在較高的相似性，且兩者可以發(fā)生交叉反應(yīng)，產(chǎn)生了一種異常蛋白，與蒼白螺旋體抗體相似，也可導(dǎo)致梅毒血清學(xué)假陽性，故惡性腫瘤患者易發(fā)生梅毒血清學(xué)假陽性[16]。

本研究中，感染性疾病患者中也出現(xiàn)了較多假陽性結(jié)果，在出現(xiàn)假陽性反應(yīng)血清標(biāo)本中約占14%，假陽性率略低于惡性腫瘤患者。國內(nèi)相關(guān)研究認(rèn)為各類感染性疾病患者，在體溫升高(≥38.5 ℃)，免疫功能升高時，往往體內(nèi)已經(jīng)對病原體產(chǎn)生了免疫抗體，這類免疫抗體中存在一定量的類脂質(zhì)抗體，與蒼白螺旋體抗體相似，也可與RPR試驗中反應(yīng)物發(fā)生非特異性抗原抗體交叉反應(yīng)[17]。目前，已知丙型肝炎陽性患者梅毒血清學(xué)假陽性報道較多，可能與嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)異常增高，與γ-血清球蛋白量異常存在密切聯(lián)系，但是存在較多爭議，還需要進(jìn)一步深入研究[18]。

本研究中還發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)急性假陽性反應(yīng)的血清樣本，但RPR滴度較低，多為1∶8以下，國內(nèi)也有類似文獻(xiàn)報道，同時報道認(rèn)為急性假陽性可在6個月內(nèi)轉(zhuǎn)陰，但是仍存在一些慢性假陽性反應(yīng)病例，尚無成熟研究結(jié)果[19]。

綜上所述，RPR試驗檢測血清標(biāo)本會出現(xiàn)生物假陽性的結(jié)果，必須用TPPA試驗進(jìn)行確認(rèn)。

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Study of the influence factors of false positive of syphilis based on serological test

ZhangWenjing

(DepartmentofClinicalLaboratory,TraditionalChineseMedicineHospitalofCaidianDistrict,Wuhan，Hubei430100，China)

Abstract:ObjectiveTo study the biological factors of Syphilis Serological false positive,and to improve the understanding of the false positive of syphilis serological biology knowledge.MethodsIn different departments of our hospital,from May 2013 to October 2014,13 000 patients were selected as the research subjects.2 mL of fresh fasting blood were collected and centrifugalized.Serum specimens were given treponema pallidum agglutination test (TPPA) and rapid plasma reagin test (RPR).The results of RPR qualitation test showing positive specimens were given RPR serum titer detection.All data results were tested by univariate and multivariate Logistic regression by SPSS22.0 software.ResultsIn 13 000 cases serum,RPR (+) with TPPA (+) were 99 cases,RPR (-) with TPPA (+) were 100 cases,RPR (+) with TPPA (-) were 252 cases respectively.The false positive rate was 1.94%(252/13 000).Single factor statistical analysis showed that rheumatoid immune system disease,over 60 years old and malignant tumor were influence factors of false positive of syphilis serology detection(P<0.05).Multiple Logistic regression analysis showed that rheumatoid immune system disease,infection diseases and malignant diseases were the independent risk factors of false positive serological reactions (P<0.05).ConclusionThe results of RPR test for the biological may be false positive in serum,which must be confirmed by TPPA test.

Key words:syphilis;RPR;TPPA;biological false positive;related factors

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.025

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)10-1362-04

(收稿日期：2015-11-09)

作者簡介：劉婷，女，副主任檢驗技師，主要從事免疫學(xué)及分子生物學(xué)方向的研究。 陳瑩瑩，女，主管檢驗師，主要從事臨床免疫檢驗方向的研究。