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IgG抗-E引起新生兒溶血病1例

2016-06-23 06:03黃美容
關(guān)鍵詞:效價(jià)血型B型

覃 濤,黃美容

(1.貴州航天醫(yī)院檢驗(yàn)科,貴州遵義 563000;2.貴州遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院輸血科,貴州遵義 563000)

·個(gè)案與短篇·

IgG抗-E引起新生兒溶血病1例

覃濤1,黃美容2

(1.貴州航天醫(yī)院檢驗(yàn)科,貴州遵義 563000;2.貴州遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院輸血科,貴州遵義 563000)

本院近期在工作中發(fā)現(xiàn)1例由IgG抗-E引起的新生兒溶血病(HDN),現(xiàn)將其報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料新生患兒,男,G1P1,足月,出生后因“出現(xiàn)皮膚黃染半天”于2013年5月29日急診收入本院新生兒科;外院剖宮產(chǎn)分娩,無(wú)輸血史;其母年齡 21歲,既往無(wú)妊娠史, 但在6年前,因手術(shù)治療曾輸過(guò)血,血型為A型,RhD(+)。入院檢查:總膽紅素464.7 μmol/L,直接膽紅素13.4 μmol/L;紅細(xì)胞(RBC)2.48×1012/L,血紅蛋白(Hb)108g/L,血細(xì)胞比容(HCT)為0.33。臨床醫(yī)生征求家屬同意,擬行換血治療,申請(qǐng)O型洗滌紅細(xì)胞3 U,AB型血漿200 mL行換血治療。本科接申請(qǐng)單后,立即定血型:玻片法,B型RhD(+),然后聯(lián)系血站,洗滌O型RhD(+)洗滌紅細(xì)胞3 U。當(dāng)收到血站送來(lái)的洗滌紅細(xì)胞后,值班人員進(jìn)行交叉配血。鹽水法:主側(cè)無(wú)溶血,無(wú)凝集,次側(cè)凝集;凝聚胺配血:主側(cè)凝集,次側(cè)凝集。復(fù)查雙方血型無(wú)誤后,通知臨床從外院抽取患兒母親的血液送至本科,進(jìn)行下述試驗(yàn),最終篩選了Rh血型(CcDee或CCDee)的B型懸浮少白細(xì)胞紅細(xì)胞及AB型新鮮冰凍血漿進(jìn)行換血,未出現(xiàn)任何輸血不良反應(yīng),癥狀得到明顯改善。

1.2試劑抗-D(IgM)、抗-A、抗-B、抗IgG、C3d(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司,生產(chǎn)批號(hào):20130130、20121225、20110819);凝聚胺試劑盒(珠海貝索生物技術(shù)有限公司,生產(chǎn)批號(hào):113031);不規(guī)則抗體篩查卡、新生兒ABO/RhD血型鑒定卡、抗球蛋白卡、RH血型抗原檢測(cè)卡(單克隆抗體)、篩選細(xì)胞、譜細(xì)胞(長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司,生產(chǎn)批號(hào):20130202、20121101、20121205、20121201、20135608、20135701)。

1.3方法ABO、Rh血型抗原、IgG檢測(cè)(微柱凝膠法),將被檢者紅細(xì)胞用生理鹽水稀釋為0.5%~0.8%的濃度,取50 μL加在相應(yīng)微柱凝膠卡中,離心觀察結(jié)果。

直抗試驗(yàn):取患兒紅細(xì)胞用生理鹽水充分洗滌6次后,配成2%~5%的懸液,各取1滴懸液分別加入到含2滴抗IgG、C3d多抗、抗C3d單抗、抗IgG單抗、生理鹽水(對(duì)照)中,混勻、離心觀察結(jié)果。

不規(guī)則抗體篩選:將濃度為0.5%~0.8%的篩選細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)分別加入到不規(guī)則抗體篩查卡中,在相應(yīng)孔中再分別加入待測(cè)標(biāo)本:等量的母親的血漿、患兒的血漿、患兒紅細(xì)胞放散液,37 ℃孵育15 min,離心觀察結(jié)果。

抗體鑒定:將濃度為0.5%~0.8%的譜細(xì)胞1~10號(hào)分別加入到抗人球蛋白卡中,在相應(yīng)孔中再分別加入待測(cè)標(biāo)本:等量的母親的血漿、患兒的血漿、患兒紅細(xì)胞放散液,37 ℃孵育15 min,離心觀察結(jié)果。

效價(jià)測(cè)定:取等量2 mL與母親血清混勻,37 ℃孵育1 h,用生理鹽水對(duì)倍稀釋?zhuān)謩e加入到等量的含有相應(yīng)抗原的HDN母體效價(jià)檢測(cè)卡中,37 ℃孵育15 min,離心觀察結(jié)果。其中抗-E測(cè)定細(xì)胞抗原:篩選4份Rh(E)陽(yáng)性的O型獻(xiàn)血員洗滌紅細(xì)胞作為抗原,濃度為0.5%~0.8%???B測(cè)定細(xì)胞抗原:篩選4份Rh(E)陰性的B型獻(xiàn)血員洗滌紅細(xì)胞作為抗原,濃度為0.5%~0.8%。

排除試驗(yàn):在抗人球蛋白卡中,分別加入A型、B型、O型紅細(xì)胞抗原,在對(duì)應(yīng)孔中再分別加入待測(cè)標(biāo)本,等量患兒的血漿、放散液,37 ℃孵育15 min,離心觀察結(jié)果。其中,A型、B型、O型為Rh(E)陰性的4人份獻(xiàn)血員洗滌紅細(xì)胞。

放散液的制備:將新生兒紅細(xì)胞用生理鹽水充分洗滌后,加入等量生理鹽水56 ℃,熱放散8 min,離心取放散液備用。

2結(jié)果

2.1血型結(jié)果新生兒血型為B型,CcDEe;母親血型為A型,CcDee。

2.2不規(guī)則抗體篩查結(jié)果新生兒血漿:Ⅰ號(hào)、Ⅲ號(hào)陽(yáng)性;新生兒放散液:Ⅰ號(hào)、Ⅲ號(hào)陽(yáng)性;母親血漿:Ⅰ號(hào)、Ⅲ號(hào)陽(yáng)性。見(jiàn)表1。

2.3直抗結(jié)果新生兒IgG,++++;抗IgG、C3d(強(qiáng)陽(yáng)性)、抗C3d(陰性);母親IgG,陰性;抗IgG、C3d(陰性);抗C3d(陰性)。

2.4譜細(xì)胞抗體鑒定結(jié)果新生兒血漿2、3、4、5、8、10號(hào)細(xì)胞陽(yáng)性;新生兒放散液:2、3、4、5、8、10號(hào)細(xì)胞陽(yáng)性;母親血漿:2、3、4、5、8、10號(hào)細(xì)胞陽(yáng)性。按照譜細(xì)胞反應(yīng)格局,判斷該不規(guī)則抗體為抗-E。見(jiàn)表2。

2.5效價(jià)檢測(cè)母親血漿中抗-E效價(jià)為1∶256,抗-B效價(jià)小于1∶2。

2.6排除試驗(yàn)游離試驗(yàn)無(wú)抗A、抗B抗體,放散試驗(yàn)無(wú)抗A、抗B抗體。

2.7配血結(jié)果明確抗-E導(dǎo)致HDN而引起配血不合,排除ABO系統(tǒng)導(dǎo)致HDN后,篩選Rh(E)陰性的B型紅細(xì)胞(CcDee或CCDee),進(jìn)行交叉配血。結(jié)果:鹽水法,主次側(cè)無(wú)溶血,無(wú)凝集;采用凝聚胺法及抗人球蛋白法,主側(cè),無(wú)溶血無(wú)凝集,次側(cè)凝集(由于直抗強(qiáng)陽(yáng)性)。輸血后,未出現(xiàn)任何輸血不良反應(yīng)。

表1  患兒血漿、紅細(xì)胞放散液及母親血漿抗體與篩選細(xì)胞反應(yīng)格局

表2  患兒血漿、紅細(xì)胞放散液及母體血漿抗體與譜細(xì)胞反應(yīng)格局

3討論

HDN是指母胎血型不合所致的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病,胎兒從父方遺傳所獲血型抗原為母方所缺乏,分娩過(guò)程中該胎兒血型抗原進(jìn)入母體,使母體產(chǎn)生抗該血型抗原的抗體(IgG類(lèi))[1]。當(dāng)母體再次妊娠時(shí),抗該血型抗原的抗體(IgG類(lèi))可通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血液循環(huán),使胎兒在宮內(nèi)或出生后發(fā)生大量紅細(xì)胞破壞,出現(xiàn)一系列溶血性征象的疾病。在本病例中,母親為G1P1,血型為A型(非O型),RhD陽(yáng)性,在產(chǎn)前檢查時(shí),很容易就排除了由于母子血型不合導(dǎo)致的HDN。但是產(chǎn)婦曾有輸血史,需要引起重視,若在產(chǎn)前檢查時(shí),進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選,就會(huì)發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體,并鑒定,然后進(jìn)行夫妻雙方Rh 5個(gè)抗原檢測(cè),定期監(jiān)測(cè)抗-E的效價(jià)。母嬰血型不合的免疫性溶血病可以進(jìn)行早期檢查,早期發(fā)現(xiàn),并采用相應(yīng)的干預(yù)治療,必要時(shí)行宮內(nèi)輸血、及時(shí)剖宮產(chǎn)、產(chǎn)后新生兒換血等多項(xiàng)措施協(xié)同作用才能有效防治新生兒溶血病[2]。所幸,通過(guò)實(shí)驗(yàn)及時(shí)篩選出配合的血液給予換血,無(wú)輸血不良反應(yīng),經(jīng)臨床進(jìn)一步治療,患兒病情好轉(zhuǎn)。

在排除試驗(yàn)中,分別篩選Rh(E)陰性的A、B、O型細(xì)胞抗原,做了新生兒血樣的游離和放散試驗(yàn),均未檢出抗A抗體和抗B抗體。同時(shí),用Rh(E)陰性的B細(xì)胞抗原,檢測(cè)母親血清抗B效價(jià),抗B效價(jià)小于1∶2。所以最終選用Rh(E)陰性的B型少白細(xì)胞的紅細(xì)胞配血。次側(cè)交叉配血中,由于患兒紅細(xì)胞已經(jīng)被母體的抗-E致敏,直抗試驗(yàn)為++++,所以在檢測(cè)IgG類(lèi)抗體的聚凝胺方法及抗人球蛋白方法中,次側(cè)凝集是由致敏在胎兒紅細(xì)胞上的抗-E與胎兒本身的E抗原造成,并非是與獻(xiàn)血員不相合造成的。因此,直抗陽(yáng)性的患兒紅細(xì)胞次側(cè)配血常出現(xiàn)凝集,不作配血禁忌考慮,只要主側(cè)配血相合即可進(jìn)行輸血[3]。

由于Rh血型抗原表位是多肽,在胎兒出生時(shí)已發(fā)育成熟,與相應(yīng)的IgG抗體親和力較強(qiáng),嚴(yán)重的HDN病例多由Rh血型抗體引起,在HDN的發(fā)病方面,Rh血型抗體較ABO血型抗體更為重要[4]。Rh血型系統(tǒng)主要抗原有D、C、c、E和e抗原,以D抗原的抗原性最強(qiáng)。近年來(lái),我國(guó)實(shí)行Rh(D)相容性輸血,絕大多數(shù)患者都能接受同型血液輸注,因輸血所致同種免疫性抗-D越來(lái)越少,然而抗-E已逐漸成為最多見(jiàn)的經(jīng)輸血產(chǎn)生的Rh血型抗體[5]。因此,為了減少Rh引起的同種免疫,有必要在輸血前、獻(xiàn)血員獻(xiàn)血時(shí)進(jìn)行Rh 5個(gè)抗原的檢測(cè),并同型輸注;產(chǎn)前檢測(cè)時(shí),對(duì)有輸血史、妊娠史、流產(chǎn)史的孕婦,有必要進(jìn)行孕婦不規(guī)則抗體篩選、夫妻雙方ABO、Rh 5個(gè)抗原的鑒定,并定期監(jiān)測(cè)其效價(jià)。

參考文獻(xiàn)

[1]胡麗華.臨床輸血學(xué)檢驗(yàn)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2012:194.

[2]馬印圖,劉芳,李振奇,等.母嬰血型不合新生兒溶血病早期干預(yù)治療的臨床研究[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2010,39(8):87-90.

[3]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006.

[4]Marion ER,Ragnhid O,Marsh WL.The clinical significance of alloantibodies of blood group system[J].Semin Hematol,2000,37(2):197-203.

[5]吳遠(yuǎn)軍,吳勇,陳寶嬋,等.Rh血型抗體的檢測(cè)及結(jié)果分析[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2008,24(6):604-606.

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.070

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:C

文章編號(hào):1673-4130(2016)10-1446-02

(收稿日期:2016-02-15)

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