陳　勇，　王向陽(yáng)，　蔡　威，　王　輝

1廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院急診科，武漢　4300702武漢市中心醫(yī)院胃腸外科，武漢　430014

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DGCR8在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義*

陳勇1，王向陽(yáng)2△，蔡威2，王輝2

1廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院急診科，武漢4300702武漢市中心醫(yī)院胃腸外科，武漢430014

摘要：目的探討DGCR8基因在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法對(duì)126例結(jié)直腸癌組織、正常結(jié)直腸黏膜以及淋巴結(jié)病理切片中的DGCR8蛋白進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果DGCR8的表達(dá)在結(jié)直腸癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中明顯高于正常黏膜，其表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床Dukes分期、CEA以及生存時(shí)間等密切相關(guān)(均P<0.05)，而且是結(jié)直腸癌重要的預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一(P<0.05)。結(jié)論DGCR8表達(dá)上調(diào)可能促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移并且影響預(yù)后。

關(guān)鍵詞：DGCR8；結(jié)直腸癌；預(yù)后

在世界范圍內(nèi)，結(jié)直腸癌死亡率位于惡性腫瘤的第2位[1]，我國(guó)結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率均保持上升趨勢(shì)，2012《中國(guó)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)年鑒》中指出2004～2005年結(jié)直腸癌患者的死亡率達(dá)到了7.25/10萬(wàn)[2]。結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移經(jīng)歷多個(gè)步驟并受到多個(gè)基因調(diào)控[3]。最近研究證實(shí)，DGCR8的異?？梢砸餸iRNA的表達(dá)發(fā)生改變，從而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，影響腫瘤的預(yù)后[4-7]。我們用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)DGCR8在結(jié)直腸癌組織、正常黏膜及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)水平，結(jié)合患者臨床資料，探討其臨床意義。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象

126例結(jié)直腸癌組織切片和與之相配對(duì)的正常結(jié)直腸黏膜及淋巴結(jié)標(biāo)本均取自我院2005年1月至2010年6月的結(jié)直腸癌患者，所有患者術(shù)前均未行放化療，病理檢查均證實(shí)為結(jié)直腸癌，所有臨床資料均獲得完整的5年隨訪資料，全組男64例，女62例，年齡21～84歲，平均年齡54.6歲。按2010年國(guó)際抗癌聯(lián)盟/美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(UICC/AJCC)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期[8]。其中DukesA/B 30例，DukesC/D 96例。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑及方法

羊抗人DGCR8單克隆抗體、二抗及免疫組化SP法染色試劑盒均購(gòu)自武漢巴菲爾生物技術(shù)有限公司。免疫組織化學(xué)檢測(cè)方法按SP試劑盒說(shuō)明操作。

1.3結(jié)果判定

由2位病理學(xué)專(zhuān)家采用雙盲法閱片。具體方法如下：①按染色強(qiáng)度分為4個(gè)分值：0(陰性)，1(弱陽(yáng)性)，2(中等陽(yáng)性)，3(強(qiáng)陽(yáng)性)；②按染色范圍分為4個(gè)分值：1(<25%)，2(25%～)，3(50%～)，4(>75%)；③染色強(qiáng)度和范圍評(píng)分之和為其分值，2位病理學(xué)專(zhuān)家評(píng)分的均值為每張切片的最終評(píng)分。最終評(píng)分0～3分為DGCR8低表達(dá)，4～7分為DGCR8高表達(dá)。

1.4隨訪

采用電話(huà)、書(shū)信和電子郵件進(jìn)行隨訪，所有病例均有5年回訪的完整資料，生存時(shí)間為手術(shù)之日至2015年6月(回訪截止時(shí)間)或死亡時(shí)間。隨訪自術(shù)后開(kāi)始進(jìn)行。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，組間差異用χ2檢驗(yàn)分析，生存率的比較采用Kaplan-Meier生存曲線法及Log-rank檢驗(yàn)，建立Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行單、多因素預(yù)后分析，均以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1DGCR8蛋白在結(jié)直腸癌組織、正常黏膜和淋巴結(jié)中的表達(dá)

DGCR8蛋白的表達(dá)在結(jié)直腸癌組織和陽(yáng)性淋巴結(jié)組織中明顯高于正常黏膜(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織(P<0.05)，見(jiàn)表1。免疫組化圖片顯示DGCR8蛋白表達(dá)，結(jié)直腸癌組織和陽(yáng)性淋巴結(jié)組織較正常黏膜明顯增高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織，見(jiàn)圖1。

表1　DGCR8蛋白在結(jié)直腸癌組織、正常黏膜和淋巴結(jié)中的表達(dá)

2.2結(jié)直腸癌中DGCR8的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

結(jié)直腸癌中DGCR8的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、Dukes分期及CEA有關(guān)(均P<0.05)；與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移度(LNR)無(wú)關(guān)(均P>0.05)，見(jiàn)表2。

2.3DGCR8與結(jié)直腸癌的關(guān)系

多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示DGCR8、Dukes分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和CEA是預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素(均P<0.05)，見(jiàn)表3。

A：正常黏膜；B：無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌組織；C：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌組織；D：陽(yáng)性淋巴結(jié)圖1　DGCR8蛋白表達(dá)的免疫組織化學(xué)染色圖片(×200)Fig.1 Immunohistochemistry staining of DGCR8 protein(×200)

項(xiàng)目總數(shù)高表達(dá)低表達(dá)P值病例1269927年齡 <55歲 ≥55歲5967485111160.475性別 男 女6462485116110.321腫瘤大小 <3cm ≥3cm4383326711160.414分化程度 高 中 低2438641832496615各組間比較均>0.05淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無(wú) 有4284277215120.006LNR <30% ≥30%5868465312150.852遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 無(wú) 有分期 DukesA/B DukesC/D864042846237277224315120.0180.006CEA ≤5ng/mL >5ng/mL5274356417100.010

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移度(LNR)=陽(yáng)性淋巴結(jié)數(shù)/總檢查淋巴結(jié)數(shù)×100%

表3　多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析

HR：風(fēng)險(xiǎn)率；CI：可信區(qū)間

2.4DGCR8的表達(dá)與結(jié)直腸癌生存時(shí)間之間的關(guān)系

結(jié)直腸癌組織中DGCR8表達(dá)水平與患者生存時(shí)間明顯相關(guān)(P<0.01)，DGCR8表達(dá)越高，生存時(shí)間越短，見(jiàn)圖2。

圖2　DGCR8的表達(dá)與結(jié)直腸癌生存時(shí)間之間的關(guān)系Fig.2 Relationship between the DGCR8 protein expression level and survival time in colorectal cancer

3討論

DGCR8是位于人類(lèi)22號(hào)染色體ql 1.2區(qū)域的一個(gè)等位基因，其與迪喬治綜合癥(Digeorge Syndrome，DGCS)相關(guān)，故命名為DGCR8[9]。DGCR8是一種RNA結(jié)合蛋白，參與miRNA的合成，在miRNA的合成過(guò)程中，結(jié)合pri-miRNA，并通過(guò)與Drosha相互作用和穩(wěn)定微處理器來(lái)促進(jìn)Drosha的切割，調(diào)控miRNA的生成，以此影響腫瘤的增殖、遷移和侵襲能力[4-7]。研究表明，DGCR8高表達(dá)促進(jìn)癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，在前列腺癌、喉癌和卵巢癌等腫瘤中已得到證實(shí)[10-12]。到目前為止，該蛋白在結(jié)直腸癌中的報(bào)道甚少，其功能還不太清楚。

我們的研究中發(fā)現(xiàn)，DGCR8在結(jié)直腸癌和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)明顯高于正常黏膜(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織高于無(wú)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織(P<0.05)。這些與上述腫瘤中的表達(dá)情況相似。DGCR8的上調(diào)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、Dukes分期和CEA密切相關(guān)(均P<0.05)，DGCR8的上調(diào)與腫瘤的發(fā)展相關(guān)聯(lián)。結(jié)直腸癌中DGCR8在CEA正常值以?xún)?nèi)和高于正常值時(shí)的比較顯示，CEA檢測(cè)值越高的患者，同樣DGCR8表達(dá)越高(P<0.05)，在今后的臨床診斷和預(yù)后評(píng)估中，DGCR8可能與CEA有相似的臨床意義，作為臨床腫瘤常用的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型單、多因素分析發(fā)現(xiàn)DGCR8與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期和CEA一樣均是影響預(yù)后的獨(dú)立因素，體現(xiàn)了DGCR8表達(dá)的高低可能是預(yù)測(cè)患者分期及預(yù)后的重要參考指標(biāo)。生存分析顯示，結(jié)直腸癌中高表達(dá)DGCR8患者生存時(shí)間明顯低于低表達(dá)患者，這也提示DGCR8對(duì)預(yù)測(cè)患者的預(yù)后有重要的意義。

綜上所述，DGCR8的上調(diào)與結(jié)直腸癌的發(fā)生、進(jìn)展以及預(yù)后均有著密切的關(guān)系，將來(lái)可能在結(jié)直腸癌患者的篩選、診斷、術(shù)后療效評(píng)估、病情監(jiān)測(cè)、預(yù)后等方面發(fā)揮重要作用，并成為結(jié)直腸癌的理想標(biāo)志物之一。

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(2015-08-03收稿)

Expression of DGCR8 in Colorectal Cancer and Its Clinical Significance

Chen Yong1，Wang Xiangyang2△，Cai Wei2etal

1DepartmentofEmergency，WuhanGeneralHospitalofGuangzhouMilitaryCommand，Wuhan430070，China2DepartmentofGastrointestinalSurgery，WuhanCentralHospital，Wuhan430014，China

AbstractObjectiveTo study the expression and clinical significance of DGCR8 in colorectal cancer.MethodsImmunohistochemical method(IHC)was used to detect the expression level of DGCR8 protein in 126 cases of colorectal cancer tissues，normal mucosae and lymph nodes.ResultsThe expression level of DGCR8 in colorectal cancer tissues and metastatic lymph nodes was obviously higher than that in normal mucosae，and the up-regulated DGCR8 was related to lymph node metastasis，remote metastasis，clinical Dukes stage，CEA and survival time(P<0.05 for all).Furthermore，DGCR8 was an important independent prognosis factor for colorectal cancer(P<0.05).ConclusionUp-regulated DGCR8 may play an important role in the occurrence，progression，metastasis and prognosis of colorectal cancer.

Key wordsDGCR8；colorectal cancer；prognosis

中圖分類(lèi)號(hào)：R735.3

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2016.02.017

*湖北省衛(wèi)生計(jì)生委立項(xiàng)課題(No.WJ2015Z067)；湖北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.2015CFB542)；武漢市衛(wèi)生計(jì)生委立項(xiàng)課題(No.WX15D62)陳勇，男，1977年生，主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，E-mail：fzqy1212@163.com

△通訊作者，Corresponding author，E-mail：wxydoctor@163.com